苔藓素组合物、其制备方法和用图
【专利说明】
[0001] 相关申请
[0002] 本申请要求2012年11月27日提交的美国临时专利申请61/730, 227的权益，其 全部内容通过引用并入本文。
[0003] 关于联邦赞助的声明
[0004] 本申请的发明受联邦赞助以美国国家衰老研究所和美国国家卫生研究院 (NationalInstituteofAgingandNationalInstitutesofHealth)授权编号 SR44AG034760研发。
技术领域
[0005] 本发明的实施方案涉及具有在神经退行性疾病（例如郝秦生氏病（Hutchinson Disease)、帕金森氏病（Parkinson'sdisease)、唐氏综合征（Down'ssyndrome)和阿尔茨 海默氏病（Alzheimer'sdisease))、病毒潜伏性疾病例如HIV和疱疹、癌症例如前列腺癌 和其它淀粉样蛋白介导的疾病例如青光眼中具有作为治疗剂的实用性的组合物。
[0006] 发明背景
[0007] 神经退行性疾病，例如阿尔茨海默氏病、郝秦生氏病、帕金森氏病、克鲁病（Kuru)、 克雅二氏病（Creutzfeldt-Jakobdisease)和其它海绵状脑病仍然是主要的健康问题。目 前治疗这些疾病的方式非常有限。至于阿尔茨海默氏病、郝秦生氏病和帕金森氏病，这些疾 病本身往往在老年人中出现并且随着疾病进展，患病个体不大能够照顾自己。神经变性疾 病与(6-淀粉样斑块的形成相关。苔藓抑素I(Bryostatin1)刺激使产生可溶性淀粉样前 体蛋白的a-分泌酶生成增多的蛋白激酶C(PKC)的某些亚型生成，从而抑制(6-淀粉样斑 块。至于癌症例如前列腺癌，苔藓抑素1通过差异性调节蛋白激酶C(PKC)S易位和防止 PKC5介导的肿瘤坏死因子-a释放，抑制前列腺癌细胞中佛波酯（phorbolester)诱导的 凋亡。至于病毒潜伏性疾病例如HIV潜伏性疾病，苔藓抑素-1以及许多PKC激动剂激活结 合HIV-I启动子并调节其转录活性的细胞转录因子例如NF-kB。在HIV-I潜伏性疾病中，病 毒启动子不大易接近细胞转录因子，因为病毒启动子周围的核组蛋白去乙酰化（染色质紧 密）。因此HDAC抑制剂可增加组蛋白的乙酰化（染色质放松），然后转录因子可能容易接 近HIV启动子。
[0008] 苔藓素（Bryoid)由为复杂环状大环内酯分子的苔藓抑素族组成。最初从海生苔 藓虫--总合草苔虫（Bulgulaneritina)--中分离出少量苔藓素。合成方法困难且昂 贵。已经鉴定出约20种苔藓素组合物，称为苔藓抑素并且编号为1-20。已知许多苔藓素拥 有抗癌性。
[0009] 具有拥有高效力和活性的新型苔藓素化合物将是有用的。
【发明内容】
[0010] 本发明的实施方案描写了第一苔藓素组合物，其分子量为约896-898Amu(质量+ 钠（Mass+Sodium))，纯度为约50%至晶体成型纯度。第一苔藓素组合物也可表征为分子量 为约873-875Amu(单一同位素质量），具有约50%的纯度和晶体成型纯度的苔藓素化合物。 第一苔藓素组合物测量的质量+钠为897. 2Amu并且测量的单一同位素质量为874. 2Amu。 以下的详细讨论将这种苔藓素称为B10。
[0011] 本发明的实施方案描写了第二苔藓素组合物，其分子量为约910-912Amu(质 量+钠），纯度为约50 %至晶体成型纯度。第二苔藓素组合物也可表征为分子量为约 888-890Amu(单一同位素质量），具有约50%的纯度和晶体成型纯度的苔藓素化合物。第二 苔藓素组合物测量的质量+钠为911. 5Amu并且测量的单一同位素质量为888. 9Amu。以下 的详细讨论将这种苔藓素称为B12。
[0012] 本发明的实施方案描写了第三苔藓素组合物，其分子量为约868-870Amu(质 量+钠），纯度为约50 %至晶体成型纯度。第三苔藓素组合物也可表征为分子量为约 846-848Amu(单一同位素质量），具有约50%的纯度和晶体成型纯度的苔藓素化合物。第三 苔藓素组合物测量的质量+钠为869. 5Amu并且测量的单一同位素质量为846. 6Amu。以下 的详细讨论将这种苔藓素称为B14B。
[0013] 本发明的实施方案描写了第四苔藓素组合物，其分子量为约895-897Amu(质 量+钠），纯度为约50%至晶体成型纯度。第四苔藓素组合物也可表征为分子量为约 872-874Amu(单一同位素质量），具有约50%的纯度和晶体成型纯度的苔藓素化合物。第四 苔藓素组合物测量的质量+钠为895. 5Amu并且测量的单一同位素质量为872. 6Amu。以下 的详细讨论将这种苔藓素称为B14C。
[0014] 本发明的这些苔藓素化合物的分子量与苔藓抑素1-20的分子量不同。
[0015]如本文所使用，晶体成型纯度意指所述组合物具有使得组合物能够形成晶体的纯 度。通常，此类纯度高于90%，并且更常高于95%纯度。本申请中提出的实施例描写了纯 度高于99%的组合物。晶体纯度将包含其中未检测到杂质的组合物，但没有这样限制。
[0016] 本发明的苔藓素组合物在治疗苔藓素反应性病况例如神经退行性疾病、癌症和病 毒潜伏性疾病中有实用性。本发明的苔藓素组合物是蛋白激酶C(PKC)某些亚型和淀粉样 前体蛋白的高活性调节剂。本发明的苔藓素和苔藓素组合物刺激增多将淀粉样前体蛋白转 化为可溶形式的a(alpha)-分泌酶的生成的蛋白激酶C(PKC)的某些亚型生成。本发明的 苔藓素组合物表现出与苔藓抑素1类似或更高的高活性水平。
[0017] 本发明的一个实施方案涉及对苔藓素例如苔藓抑素1-20有反应性的疾病例如神 经退行性疾病、癌症和病毒潜伏性疾病的治疗。所述方法包括施用有效量的选自第一苔藓 素组合物、第二苔藓素组合物、第三苔藓素组合物和第四苔藓素组合物的至少一种苔藓素 组合物的步骤。
[0018] 本发明的实施方案还包括选自第一苔藓素组合物、第二苔藓素组合物、第三苔藓 素组合物和第四苔藓素组合物、呈用于向患者施用的剂型的苔藓素组合物。所述剂型可呈 许多形式，包括但不限于静脉内、腹膜内、口服剂型，例如片剂、凝胶胶囊、胶囊剂、口服液和 混悬液；气溶胶，例如用于向肺部或鼻通道施用的喷雾或生雾溶液，局部形式例如软膏、洗 剂、贴片和喷雾；和本领域中已知的其它剂型。
[0019] 本发明的另一实施方案涉及制备选自第一苔藓素组合物、第二苔藓素组合物、第 三苔藓素组合物和第四苔藓素组合物的苔藓素组合物的方法，包括从苔藓素来源分离苔藓 素组合物并将所述苔藓素组合物纯化至50%的纯度和晶体成型纯度。苔藓素来源优选为海 生苔藓虫，总合草苔虫。
[0020] 查看附图并阅读下面的详细描述后，本发明的这些和其它特征及优点将显而易 见。
[0021] 附图简述
[0022] 图1描绘了苔藓抑素1的高效液相色谱扫描；
[0023] 图2描绘了总合草苔虫乙酸乙酯（EA)粗提物的HPLC色谱图；
[0024] 图3描绘了苔藓抑素类组合物纯化步骤的流程图；
[0025] 图4描绘了由体现本发明方方面面的苔藓抑素-1和其它提取物诱导的a-分泌 酶活性；
[0026] 图5描绘了苔藓素混合物的色谱图；
[0027] 图6描绘了苔藓素混合物的色谱图并鉴定了在265nm下监测的保留时间；
[0028] 图7描绘了 265nm下不同苔藓素的紫外光谱；
[0029] 图8-1描绘了从700-1000Amu扫描，苔藓抑素1的质谱；
[0030] 图8-2描绘了从700-1000Amu扫描，具有与苔藓抑素2相关的内部标识104和B08 的馏分的质谱；
[0031] 图8-3描绘了从700-1000Amu扫描，具有与苔藓抑素3相关的内部标识106和B14 的馏分的质谱；
[0032] 图8-4描绘了从700-1000Amu扫描，具有体现本发明方方面面的内部名称112和 B16的馏分的质谱；
[0033] 图8-5描绘了从700-1000Amu扫描，具有与苔藓抑素-3相关的内部名称102及 B12和B14的馏分的质谱；
[0034] 图8-6描绘了从700-1000Amu扫描，