细菌性阴道病联合检测试剂及使用该试剂的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及阴道病检测技术领域,具体公开一种细菌性阴道病联合检测试剂及使用该试剂的方法。
【背景技术】
[0002]阴道炎是阴道粘膜及粘膜下结缔组织的炎症,临床上以白带的性状发生改变以及外阴瘙痒灼痛为主要特点,感染累及尿道时,可有尿痛、尿急等症状。其中细菌性阴道病(BV)是最常见的妇科炎症。
[0003]目前,临床上诊断BV的标准为,符合以下4项指标中的3项可诊断为BV:1、阴道PH > 4.5 ;2、阴道分泌物增多,变稀如奶状,有异味;3、胺试验阳性,即在阴道分泌物中加入10% KOH产生鱼腥味;4、阴道涂片中可见线索细胞。此即为传统的Amsel法。
[0004]传统诊断BV的方法存在很多不足之处。主要体现为,一些与感染无关的因素如近期性交、阴道灌洗、行经或是存在大量子宫颈粘液等同样可以导致阴道PH值升高,或使分泌产生异味;胺试验中对气味的鉴别因人而异;而对于用作BV诊断最佳标志的线索细胞的识别则受到显微设备的质量、样本的采集以及操作者的经验等诸多因素的共同影响,主观性强,因而很难对判定结果进行统计和比较。
【发明内容】
[0005]本发明目的是提供一种细菌性阴道病联合检测试剂,该试剂采用干化学酶技术,通过测定阴道分泌物中生化成份的变化,可有效鉴别细菌性阴道病。
[0006]为了实现上述目的,发明采用了以下的技术方案:一种细菌性阴道病联合检测试剂,包括过氧化氢浓度测定反应液、白细胞酯酶活性测定反应液和唾液酸甘酶活性测定反应液;
[0007]所述过氧化氢浓度测定反应液包括如下组分及配比:90mlPH值为6.6的0.1M柠檬酸缓冲液、1.0g-3.0g的蔗糖、0.5-1.5g的聚乙烯吡咯烷酮、0.05ml-0.2ml的40mMVC,0.2g-l.0g的2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸、5ml-10ml的750U/ml过氧化物酶溶液、0.2ml_2ml的80mM 4-氨基安替P比啉;
[0008]所述白细胞酯酶活性测定反应液由A液和B液组成,所述A液的组分及配比为:100ml的纯化水、lg_5g的四硼酸钠、0.5g-2g的NaCl、0.1g-1g的聚乙烯吡咯烷酮、0.lg-0.5g的胆酸钠、0.5g-2g的七水硫酸镁;所述B液的组分及配比为:100.0ml的无水甲醇、0.2g-l.5g的L-酒石酸、0.2g-2g的白细胞稳定剂、0.02g-0.1g的1,10癸二醇、0.2g_2g的5-溴-4-氯-3-吲哚乙酯;
[0009]所述唾液酸甘酶活性测定反应液的组分及配比为:100.0ml的纯化水、0.5g_3g的无水乙酸钠、0.2g-2g的聚乙烯吡咯烷酮、0.5g-5g的蔗糖、0.05g-3g的5-溴-4-氯-3-吲哚-a -D-N-乙酰神经氨酸钠盐、0.02ml-0.08ml的0.02M柠檬酸。
[0010]一种使用上述试剂的方法,
[0011]将过氧化氢浓度测定反应液浸泡滤纸,烘干,制成干化学纸片,即可用于检测;若干化学制片呈红色或紫红色为阴性,表示可能有大量乳酸杆菌存在,阴道菌群正常;不显色或淡黄色为阳性,指示阴道菌群失调,阴道环境病态或处于亚健康状态;
[0012]将白细胞酯酶活性测定反应液先用A液浸泡滤纸,烘干后用B液浸泡,再烘干,制成干化学纸片,即可用于检测;干化学纸片不显色为阴性,表示患者阴道内正常;蓝绿色为阳性,表明患者阴道内有炎症反应;
[0013]用唾液酸甘酶活性测定反应液浸泡滤纸,再烘干,制成干化学纸片,即可用于检测;干化学纸片不显色为阴性,表示患者阴道内正常;显红色或紫红色为阳性,表示可能感染细菌性阴道病。
[0014]本发明包含三个独立检测项目,分别为:
[0015]1.过氧化氢浓度测定:分泌物中过氧化氢经过氧化物酶作用,释放出新生态氧,后者在4-氨基安替吡啉存在下,使2,4,6-三溴-3-轻基苯甲酸氧化呈红色或紫红色,呈色深度与过氧化氢浓度成正比。呈红色或紫红色为阴性,表示可能有大量乳酸杆菌存在,阴道菌群正常;不显色或淡黄色为阳性,指示阴道菌群失调,阴道环境病态或处于亚健康状态。
[0016]2.白细胞酯酶活性测定:白细胞酯酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酯,释放出溴吲哚基,后者在有氧的条件下呈蓝绿色,呈色深度与白细胞酯酶活性成正比。不显色为阴性;蓝绿色为阳性,表明患者阴道内有炎症反应。
[0017]3.唾液酸苷酶活性测定:唾液酸苷酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚-a -D-N-乙酰神经氨酸钠盐,释放出溴吲哚基,后者在重氮盐的条件下显红色或紫红色。不显色为阴性;显红色或紫红色为阳性,表示可能感染细菌性阴道病。
[0018]本发明的有益效果在于:采用上述试剂及其方法后,具备以下优势:
[0019]乳酸杆菌可产生大量过氧化氢;线索细胞具有白细胞酯酶活性;BV妇女阴道分泌物中的唾液酸苷酶活性明显高于正常妇女。
[0020]即根据阴道炎患者阴道分泌物中上述主要生化酶活性显著变化的特点,酶与其生色底物接触时,会发生特异性反应,并伴有颜色改变。结合过氧化氢的变化,将其分别制成干化学试纸,反应仅需10分钟,无需任何仪器设备,结果目测判定清晰明了,非常适合于即时检验(POCT)检测要求。同时多项目联合检测,大大提高诊断结果的准确性,也避免了传统诊断方法步骤繁琐、仪器设备以及人为主观因素对诊断结果的影响。
【具体实施方式】
[0021]实施例1
[0022]一种细菌性阴道病联合检测试剂,过氧化氢浓度测定反应液取90mlPH值为6.6的0.1M柠檬酸缓冲液、1.0g蔗糖、1.5g的聚乙烯吡咯烷酮、0.2ml的40mMVC、l.0g的2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸、5ml的750U/ml过氧化物酶溶液、2ml的80mM 4-氨基安替吡啉制成;将过氧化氢浓度测定反应液浸泡滤纸,烘干,制成干化学纸片,即可用于检测;若干化学制片呈红色或紫红色为阴性,表示可能有大量乳酸杆菌存在,阴道菌群正常;不显色或淡黄色为阳性,指示阴道菌群失调,阴道环境病态或处于亚健康状态。
[0023]所述白细胞酯酶活性测定反应液中A液取10ml的纯化水、Ig的四硼酸钠、0.5g的NaCl、0.1g的聚乙烯吡咯烷酮、0.1g的胆酸钠、2g的七水硫酸镁制成;B液取100.0ml的无水甲醇、0.2g的L-酒石酸、0.2g的白细胞稳定剂、0.1g的1,10癸二醇、2g的
5-溴-4-氯-3-吲哚乙酯制成;将白细胞酯酶活性测定反应液先用A液浸泡滤纸,烘干后用B液浸泡,再烘干,制成干化学纸片,即可用于检测;干化学纸片不显色为阴性,表示患者阴道内正常;蓝绿色为阳性,表明患者阴道内有炎症反应。
[0024]所述唾液酸甘酶活性测定反应液取100.0ml的纯化水、3g的无水乙酸钠、2g的聚乙烯吡咯烷酮、0.5g的蔗糖、0.05g的5-溴-4-氯-3-吲哚-a -D-N-乙酰神经氨酸钠盐、0.02ml的0.02M柠檬酸制成。用唾液酸甘酶活性测定反应液浸泡滤纸,再烘干,制成干化学纸片,即可用于检测;干化学纸片不显色为