一种蛋黄卵磷脂的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种蛋黄卵磷脂的制备方法及其用途。
【背景技术】
[0002] 卵磷脂（lecithin)是一种在动植物中分布很广的含磷脂类，它的主要成分有磷 脂酰胆碱（PC)、脑磷脂（PE)、肌醇磷脂（PI)和磷脂酸（PA)。卵磷脂有极高的营养和医学价 值，具有延缓衰老、提高大脑活力、防治动脉硬化、解除心血管疾病、预防脂肪肝、滋润皮肤 等多种生理功能，同时还具有很好的乳化作用和抗氧化性能。因此，卵磷脂在食品、医药、化 妆品等行业应用广泛。蛋黄中提取的卵磷脂成为蛋黄卵磷脂。
[0003] 本领域中卵磷脂的提取方法通常为有机溶剂提纯法、超临界CO2萃取法、柱层析法 等。单纯的有机溶剂萃取工艺生产出的产品纯度较低，胆固醇含量较高，产品中残留有害的 有机溶剂，而且其工艺较复杂，柱层析法的成本也太高。然而，超临界〇) 2萃取作为一种新 型的分离技术，具有工艺简单、高效低耗能、环保、无溶剂残留、选择性高等特点，生产出的 卵磷脂质量高，是制取高纯度蛋黄卵磷脂的先进工艺。
[0004] 目前，用超临界CO2萃取技术制备蛋黄卵磷脂，归纳起来主要有以下3种典型工 艺：1、乙醇溶剂萃取+超临界CO 2萃取；2、超临界CO2萃取+乙醇溶剂萃取；3、超临界CO2萃 取+超临界CO 2和携带剂乙醇萃取。其中，第1种和第2中方法的收率相对较低，成本也较 低，第3中的收率相对较高，但成本也较高。如，高进，"高纯度蛋黄卵磷脂的提取、纯化及分 析研究"，湖南农业大学，硕士学位论文公开的用超临界CO 2萃取+乙醇溶剂萃取提取蛋黄卵 磷脂的方法，具体是将超临界〇)2萃余物在50°C下，用4、6、8、10倍量95%乙醇，在在45°C 的水浴中浸泡120min，得率分别为9. 3%、11. 5%、12. 6%、13. 2%，得率低，且温度高，成本 尚。
[0005] 因此，获得一个产率高，成本低的蛋黄卵磷脂的制备方法成为当前的迫切需要。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的之一，提供一种制备蛋黄油的新方法。本发明属于改进发明，通过对 已有超临界CO2萃取+乙醇溶剂萃取方法的改进，从而获得预料不到的技术效果。
[0007] 本发明所述蛋黄卵磷脂的制备方法，包括如下具体步骤：
[0008] (1)用超临界二氧化碳萃取法提取蛋黄油，即取蛋黄粉，在萃取压力为35Mpa、CO2 流量为50L/h、萃取温度为50°C的条件下萃取120min，除去蛋黄油，得残渣；
[0009] (2)在步骤⑴的残渣中，加入4-8倍量v/w的90%乙醇，在温度30°C的条件下提 取3-4次，每次提取1-1. 5h，合并滤液，减压回收乙醇，即可。
[0010] 其中，v/w :是指 kg/L。
[0011] 步骤（2)中，优选地，90%乙醇的加入量为残渣的4倍。
[0012] 步骤（2)中，优选地，提取的次数为4次，每次提取的时间是I. 5h。
[0013] 本发明还提供了前述方法制备的蛋黄卵磷脂及其在制备延缓衰老、提高大脑活 力、防治动脉硬化、解除心血管疾病、预防脂肪肝、滋润皮肤的药物中的用途。
[0014] 采用本发明方法制备蛋黄卵磷脂，得率在16. 36%以上，比现有方法的最高得率还 高，说明本发明方法提取效率高，而且本发明方法的提取温度低，成本低；本发明优选的技 术方案，在溶剂用量低的情况下，得率高达17. 26%，成本低廉，工业应用前景优良。
[0015] 下面通过【具体实施方式】对本发明做进一步详细说明，但是并不是对本发明的限 制，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述 基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
【具体实施方式】
[0016] 实验材料和评价指标
[0017] 1.药材收集、鉴定与前处理及仪器设备的校正
[0018] 本研究所用鸡蛋为成都正大农牧食品有限公司提供的新鲜鸡蛋，经检验符合Q/ CZD0002S-2014正大鲜鸡蛋质量标准。
[0019] HA221-40-11超临界萃取装置江苏华安科研仪器有限公司
[0020] 0A2000-B数显恒速搅拌机上海欧河机械设备有限公司
[0021] 仪器设备在使用前已做校验，以使研究可以安全、准确的进行。
[0022] 2.评价指标
[0023] 2. 1蛋黄卵磷脂中，主要成分为磷脂酰胆碱，因此，以磷脂酰胆碱提取收率作为评 价指标。
[0024]
[0025] 2. 2磷脂酰胆碱含量测定方法
[0026] 照高效液相色谱法（中国药典一部附录VI D)测定。
[0027] 色谱条件与系统适用性试验用硅胶为填充剂（色谱柱250mmX4. 6mm，5 μπι)，以 甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（85:15:0. 45:0. 05)为流动相Α，以正己烷-异丙醇-流动相 A (20:48:32)为流动相B ;柱温为40°C ;流速为每分钟lml，按下表进行梯度洗脱；检测器为 蒸发光散射检测器。
[0028]
[0029] 取磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰胆碱、鞘磷脂、溶血磷脂酰胆碱对照品各 适量，用三氯甲烷-甲醇（2:1)溶解并定量稀释制成每1ml分别含上述对照品为50 μ g、 100 μ g、200 μ g、200 μ g、200 μ g的混合溶液，取上述溶液20 μ 1注入液相色谱仪，各成分按 上述顺序依次洗脱，各成分峰之间的分离度应符合规定，理论板数按磷脂酰胆碱峰计算应 不低于1500。
[0030] 测定法精密称取磷脂酰胆碱对照品适量，用三氯甲烷-甲醇（2:1)溶解并定量稀 释制成每1ml含磷脂酰胆碱50 μ g、100 μ g、150 μ g、200 μ g、300 μ g、400 μ g的溶液作为对 照品溶液。精密量取上述对照品溶液各20 μ 1分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品 溶液浓度的对数值与相应的峰面积对数值计算回归方程。另精密称取本品约70mg，置50ml 量瓶中，加三氯甲烷-甲醇（2:1)溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取20 μ 1，注入液相色谱 仪，记录色谱图。由回归方程计算磷脂酰胆碱的含量。
[0031] 实验例1蛋黄卵磷脂的制备方法
[0032] 前处理：将鸡蛋破碎后，用蛋清分离器分取蛋黄，于100~105°C熟化，粉碎，70~ 80°C继续干燥至水分< 5%，粉碎，过1号筛，得蛋黄粉。取蛋黄粉1000g，测定其含水量 < 5%，超临界二氧化碳萃取法萃取蛋黄油，萃取温度为50°C，萃取压力35Mpa，OV流量 50L/h，萃取时间120min，去除蛋黄油，收集剩余蛋黄渣。
[0033] 取上述蛋黄渣500g，加入4倍量90%乙醇（即2000ml乙醇），固定提取温度30°C 提取4次，每次I. 5h (提取过程中持续搅拌，转速为150转/分钟），合并滤液，减压回收乙 醇，即可。
[0034] 按磷脂酰胆碱含量测定方法测定磷脂酰胆碱含量，并计算磷脂酰胆碱提取收率， 经测定为17. 23%。
[0035] 取蛋黄粉1000g，测定其含水量< 5%，萃取压力35Mpa，C02流量50L/h，萃取时间 120min〇
[0036] 重复三次，蛋黄卵磷脂的收率如下表：
[0037]
[0038] 可以看出，本发明方法的收率差异不大，说明本发明方法是稳定的，另外，本发明 方法的平均收率为17. 26%。
[0039] 实验例2黄卵磷脂的制备方法
[0040] 前处理：将鸡蛋破碎后，用蛋清分离器分取蛋黄，于100~105°C熟化，粉碎，70~ 80°C继续干燥至水分< 5%，粉碎，过1号筛，得蛋黄粉。取蛋黄粉1000g，测定其含水量 < 5%，超临界二氧化碳萃取法萃取蛋黄油，萃取温度为50°C，萃取压力35Mpa，OV流量 50L/h，萃取时间120min，去除蛋黄油，收集剩余蛋黄渣。
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