3,19-C)， 176. 3(C，20-C);碳原子标记参见图1。NMR谱表明，该化合物含有两个甲基[SH2. 18(s， H3-17)和 1.ll(s，H3-19)]，三个含氧次甲基[SH4.61(d，J= 9.6Hz，H-6)，5.47(t，J= 6. 0Hz，H-12)和 5. 75 (m，H-18) ;SC77. 7 (C-6)，71. 6 (C-12)和 102. 4 (C-18)]，三取代双 键[SH5. 41 (t，J= 3. 0Hz，H-l) ;SC121. 9 (C-l)和 138. 6 (C-10)〕，一个 0 单取代呋喃环 [SC123. 2 (C-13)，107. 4 (C-14)，143. 4 (C-15)，和 138. 8 (C-16)]，酮羰基[SC203. 5 (C-8)] 以及内酯羰基[SC176. 3(C-20)]。HMBC谱中，H2-ll和H-12与C-20的相关性表明C-10位 连有一个y内酯。根据HMBC谱中H-12与C-14和C-16的相关性，可推断呋喃环位于C-12 位上。此外，H3-17与C-8和C-7的相关性证实C-6位置上存在一个丙-2-酮基。综合氢 谱、碳谱、HMBC谱和N0ESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如图1 所示，立体构型进一步通过E⑶试验确定，理论值与实验值基本一致（图2)。
[0027] 实施例2 :化合物（I)药理作用试验
[0028] 一、材料和仪器
[0029] 人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株SK0V3由兰州大学的医学实验中心提供。通用 RPMI-1640培养基（10%胎牛血清）培养。化合物（I)自制，HPLC归一化纯度大于98%。 RPMI-1640培养液、四甲基偶氮挫蓝（MTT)、二甲基亚砜（DMSO)、L-谷氨酰胺科昊生物工程 有限公司。胰蛋白酶购于美国Sigma公司。胎牛血清购于杭州四季青生物工程材料有限公 司。十二院基磺酸钠（SDS)购于西安周鼎生物技术有限责任公司。HER2(FITC标记）购于 北京博奥森生物技术有限公司。酸化HER2 (FITC标记）购于北京博奥森生物技术有限公司。 青霉素、链霉素购于华北制药厂。
[0030] C02培养箱（Heraeus，BB5060UV)，德国倒置相差显微镜（OLYMPUS，CK-40)，日本荧 光显微镜（OLYMPUS0PTICAL，AX80,日本），超净工作台（苏州净化设备有限公司），酶标分 析仪（BI0-TEK公司，美国），低温高速离心机（Beckman-Coulter公司，德国），EpicsXL流 式细胞仪（Beckman-Coulter公司，德国），R-3850型自动台式灭火器（山东新华医疗器械 股份有限公司），DHG-9245A型电热恒温鼓风干燥箱（上海-恒科技有限公司），KQ-250DB 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），数显恒温水浴箱（上海梅香仪器有限公 司），BS400S电子分子天平（北京赛多利斯天平有限公司），08-2恒温磁力搅拌器（上海天 平仪器厂），TDL-5普通离心机（上海安亭科学仪器厂），低温冰箱（日本三洋公司），电子 制冰箱（日本三洋公司），细胞冻存管（上海生工生物工程有限公司），96孔板（科昊生物 工程有限公司）。
[0031] 二、试验方法
[0032] 1、细胞培养
[0033] 1. 1细胞复苏
[0034] 将冻存管迅速从液氮中取出后立即放入37°C温水中，轻轻晃动冻存管，使冻存物 尽快溶解，将其放入超净工作台中，将其内的细胞悬液移入离心管，再向离心管中加入10 倍RPMI-1640培养液（含10%小牛血清），离心，800rpm/min，离心5~lOmin，弃上清，细胞 沉淀中加入含10%小牛血清的RPMI-1640培养液，轻摇均匀，置37°C、5%C02浓度的培养 箱中培养。并注明细胞名称及日期。
[0035] 1. 2细胞传代培养
[0036] 待SK0V3细胞长至80~90%培养瓶时，弃去原有的培养液，并用配好的PBS洗两 遍；用0. 25%的胰酶消化，放在倒置显微镜下观察，当见细胞回缩、细胞间隙增大、形态变 圆时弃去消化液，加入一定量的培养液中和胰酶消化液，并用吸管轻轻吹打已经消化过的 细胞.，使其脱离培养瓶，800rpm/min离心5min，弃上清；显微镜下在计数板上进行细胞计 数，按1:3比例传代，分装至培养瓶中，再次补充适量培养液后继续培养。注意严格无菌操 作，每天观察细胞生长情况。
[0037] 1. 3细胞冻存
[0038] 取对数生长期的细胞以0.25%的胰蛋白酶消化后离心，PBS洗2次，在低速离心机 上lOOOrpm离心5min，弃上清液，加入lmL于-20°C下预冷的含DMS0的细胞冻存液，用吸管 吹打均匀后移入冻存管中，用封口膜封口标记后放入4°C静置30min，之后-20°C放置2h后 转入-80°C。一个月内使用的细胞可保存于_80°C中，长期保存者24h后应由-80°C移入液 氮中。细胞的复苏与冻存应遵循的原则为慢冻快融。
[0039]2、四甲基偶氮蓝（MTT)实验
[0040] (1)选择对数生长期的细胞（生长80-90% )时，用配好的0? 25%胰酶将细胞消。 化好以后，轻轻地吹打制成单细胞悬液，调整的最终的细胞浓度为8X104/mL; (2)取3个96 孔板，每个时间点1板，100yL/孔，每孔细胞数为104做好分组标志；（3)细胞贴壁后分组， 设空白组（不接种细胞）、对照组（只含等量溶剂）及实验组（加不同浓度的化合物（I)， 其终浓度分别为〇. 1、1、10、20、30和60ymo1/L)，每组设6个复孔；（4) 37°C、5 %C02条件下 分别培养24、48和72h; (5)时间到后，吸去上清液后每孔加5g/L的MTT10yL; (6)培养 4h后加入10yLDMS0,在多功能微板测试系统上以490nm波长测定各孔光密度0D值；（7) 药物对细胞抑制率的计算：
[0041] 抑制率（％ )=(对照组细胞数_实验组细胞数）/对照组细胞数X 100%。
[0042] 实验至少重复三次。
[0043] 3、PI染色法流式细胞术（FCM)检测细胞周期及凋亡
[0044] (1)取对数生长期的SK0V3细胞，先用配好的胰酶消化后轻轻吹打制成单细胞悬 液，调整细胞浓度为6X105/mL; (2)以6X105/mL的密度接种于50mL的培养瓶中，于37°C、 5%C02培养箱中培养24h;(3)24h后将原来的培养液吸出，加入同等量（7. 5mL)的、含不 同浓度（0、10、20和30ymol/L)的化合物（I)的培养液，继续于37°C、5% 0)2培养箱中 培养48h;(4) 48h后收集细胞，用0. 25 %胰酶消化后轻轻吹打制成单细胞悬液，将其移入离 心管后，以lOOOr/min离心，离心lOmin，弃去上清液，并用4°C的70%的冰乙醇固定，放置 4°C的冰箱过夜；(5)次日用磷酸盐缓冲液PBS清洗、离心，弃上清后检测加入核糖核酸酶 (RNAase) 150yL和碘化丙啶（PI)染液150yL，在室温条件下避光染色30min，运用流式细 胞仪检测细胞的周期分布及凋亡情况。实验重复三次，并应用软件进行分析。
[0045] 4、PI染色法流式细胞术（FCM)检测HER2、P-HER2蛋白的表达率
[0046] (1)取对数生长期的SK0V3细胞，先用0.25 %胰酶消化后轻轻吹打制成单细胞悬 液，调整细胞浓度为1X106/mL; (2)以1X106/mL的密度接种于50mL的培养瓶中，于37°C、 5%C02培养箱中培养24h;(3)24h后吸出原有的培养液，加入同等量（12. 5mL)的、含浓度 为20iimol/L的化合物（I)的培养液（实验组）和不含药物的培养液（对照组），继续 于37°C、5%C02培养箱中培养48h; (4) 48h后收集细胞，将培养瓶内的培养液先移入离心管 内，再用〇. 25 %的胰蛋白酶消化，保证培养瓶内的细胞及营养液都移入离心管，按lOOOr/ min离心，10min;(5)再加入PBS按1000转/min离心10min，重复两次；(6)待测管内有 100yL样品，向实验组和对照组分别加入30yLFITC标记的HER2、P-HER2抗体受体（用 PH= 7. 4、0. 01M的PBS溶解，并按1:60稀释），4°C孵育30m