大豆转化事件shzd32-01及其应用方法
【技术领域】
[0001] 本发明是关于一个新的大豆的转化事件，被称为甜ZD32-01。该事件对除草剂草甘 麟（Gly地OSte)表现出较强的耐受性。本发明还设及到与转化事件甜ZD32-01有关的大豆 植株部分、种子及其产品的应用方法。
【背景技术】
[0002] 大豆（Glycincemax)是重要的经济作物。大豆对除草剂的耐性是一个重要的农艺 性状，特别是对草甘麟除草剂的耐性。草甘麟（N-phosphonomethylglycine)是一种植物物 种的广谱除草剂，是孟山都公司生产的产品农达（Roumlup.RTM.)除草剂中的主要成分，是 一种在环境中半衰期短的安全型除草剂。当草甘麟喷施于植物表面时，草甘麟会系统地进 入整个植物。草甘麟的植物毒性是由于它对莽草酸途径的抑制，而莽草酸是芳香族氨基酸 合成的前体，草甘麟能够抑制植物中5-締醇丙酬酸莽草酸-3-憐酸合酶巧PSPS)的合成。
[0003] 草甘麟的耐性能够通过对草甘麟亲和力较低的突变体而获得，运种突变体在草 甘麟存在时仍然能够表现代谢活性化S.化t.Nos. 5, 633, 435、5, 094, 945、4, 535, 060和 6, 040, 497)。通过酶在植物组织中对草甘麟的降解化S.化t.No. 5, 463, 175)也能够赋予 细胞对草甘麟的耐受性。运些基因被用于生产耐草甘麟转基因作物，因此使用草甘麟可 W有效地控制杂草而不会对作物造成损害。耐草甘麟基因工程已经用于玉米扣.S.Pat. No. 5, 554, 798)、小麦化S.化t.No. 6, 689, 880)、棉花化S.化t.No. 6, 740, 488)、大豆（WO 9200377)和油菜扣SPatentAppl. 20040018518)等作物。耐草甘麟转基因和耐其它除草 剂转基因，如bar基因，（Tokielal.,1992;Thompsonetal.,1987,耐除草剂草锭麟）也 是有用的选择标记或评价标记，利用与其他农艺性状的连锁为筛选提供有用的表型。
[0004] 外源基因的表达受其在染色体位置的影响，由于外源基因的插入位点不同，转化 体表现差异很大，因此要筛选大量的转化体来鉴定出引入外源基因最优化表达的转化事 件。在不同的转化事件中已经观察到在不同组织中导入基因的表达水平具有较大范围的变 异。也存在不同的时空表达模式，如在不同的植物组织中转基因的相关表达也会不同，因此 需要从成千上万的转化体中筛选出一个转基因表达水平符合商业化应用的转化事件。一个 具有理想表达水平和模式的转化体，可W将该转基因通过有性杂交的传统方法导入其他遗 传背景中，杂交后代可W保持原转化体外源转基因的性状表达。该策略可W确保目的基因 在大量适应当地生长的优良品种中可靠表达。 阳〇化]检测特殊的转化事件可W通过鉴定有性杂交后代植株或种子是否含有转基因，另 夕F，检测特殊转化事件的方法对遵守批准上市前的规定和要求是必要的，同时有利于进行 转基因作物的食品标识。使用任何核酸检测方法，如聚合酶链式反应（PCR)或利用多聚核 酸探针的DNA杂交方法都可W检测是否含有转基因。运些检测方法一般都关注常用的转 基因元件，如启动子，终止子，标记基因等，但对于辨别不同的转化事件是无效的，特别是使 用同一个DNA载体的转化事件更是无法分析，除非插入转基因附近的染色体DNA序列（旁 侦UDNA)是已知的。例如Windels等人1999年对耐除草剂转基因大豆40-3-2使用了跨越 插入基因和旁侧序列的一对引物进行转化事件的检测，一个引物特异地包括了插入基因 的序列，另一个引物包括了侧翼序列（美国专利号为：6, 893, 826 ;6, 825, 400 ;6, 740, 488 ; 6, 733, 974 和 6, 689, 880 ;6, 900, 014 和 6, 818, 807)。
【发明内容】
[0006] 本发明提供一种大豆转化事件甜ZD32-01及其应用方法，大豆甜ZD32-01是由一 个大豆栽培种衍生而来，具有对草甘麟除草剂的耐受性，同时提供来自转化事件甜ZD32-01 的大豆植株部分、种子及其产品的应用方法。
[0007] 本发明提出一个新的被命名为甜ZD32-01的耐草甘麟的大豆转化事件，W及含有 该事件植株部分、种子和由植株、植株部分、种子和产品而来的产品。
[0008] 本发明提出一种在含有事件甜ZD32-01的大豆细胞基因组中含有的新的DNA分 子，能够用多种方法鉴定样品中运种新的DNA分子。
[0009] 本发明中提出一个重组的DNA分子，存在于所述大豆转化事件甜ZD32-01中，包括 下列所给出的沈QIDN0:1、沈QIDN0:2、沈QIDN0:3、沈QIDN0:4、沈QIDN0:9 W及 该沈QIDN0:1、沈QIDN0:2、沈QIDN0:3、沈QIDN0:4和沈QIDN0:9完全互补序列 中的至少一个核酸序列。
[0010] 所述的重组DNA分子，包括核酸序列沈QIDNO: 1。 1] 所述的重组DNA分子，包括核酸序列SEQIDNO: 2。 阳01引所述的重组DNA分子，包括核酸序列沈QIDNO: 3。 阳01引所述的重组DNA分子，包括核酸序列沈QIDNO:4。
[0014] 所述的重组DNA分子，包括核酸序列沈Q ID NO:9。
[0015] 所述的重组DNA分子，包括核酸序列沈Q ID NO: 1和沈Q ID NO: 2。
[0016] 所述的重组DNA分子，包括核酸序列沈Q ID NO: 3和沈Q ID NO:4。
[0017] 所述的重组DNA分子，运里所述重组DNA分子来自于大豆转化事件甜ZD320-01， 包含所述转化事件的代表性种子样本保存在中国典型培养物保藏中屯、（化inaCenter化r TypeQiltureCollection,CCTCC),地址：中国武汉武汉大学，保藏日期：2015年8月18 日，保藏编号为CCTCCN0:P201513 ;该保藏生物材料的分类命名为：大豆属栽培大豆种大 豆S监D32-01GlycineInax(L)Merr.。
[0018] 本发明提出的重组DNA分子，运里所述重组DNA分子存在于大豆植株、大豆植物细 胞、大豆种子、大豆植株部分或商品产品中。
[0019] 本发明中提出的一种DNA引物或探针包含足够长的连续的核巧酸序列来自于SEQ IDN0:9或其互补序列，运里所述引物或探针是为诊断转化事件甜ZD32-01的，运里所述 DNA引物和探针能在严格杂交条件下与包含所给出的SEQIDNO: 1-4和SEQIDN0:9中的 一个核酸序列的DNA分子杂交，而不能在严格杂交条件下与不包含所给出的SEQIDNO: 1-4 和SEQIDNO:9中的一个核酸序列的DNA分子杂交。
[0020] 本发明提出的一对DNA分子所包含的第一个DNA分子和与第一个DNA分子不同 的第二个DNA分子，运里所述的第一个DNA分子和第二个DNA分子每个都包含一段足够长 的连续的核巧酸序列来自SEQIDN0:9,或与其完全互补的序列，作为DNA引物与转化事件 S监D32-01的DNA-起用于扩增反应产生诊断样本中大豆转化事件甜ZD32-01的扩增产物。
[0021] 本发明提出的一种检测样品中转化事件甜ZD32-01的DM分子存在的方法，所述 方法包括：a)使上述样品的DNA与权利要求11中的DNA探针相接触；b)使上述样品和上述 DNA探针置于严格杂交条件下；C)检测上述DNA探针与上述样品中DNA分子的杂交情况，上 述DNA探针与上述DNA分子杂交，说明上述样品中存在大豆转化事件甜ZD32-01的DNA分 子。
[0022] 本发明提出的一种检测样品中转化事件甜ZD32-01的DNA分子存在的方法，所述 方法包括：a)使上述样品的DNA与权利要求12中的运对DNA分子相接触；b)进行扩增反应 产生含有所给出的SEQID1-4和SEQIDN0:9和其完全互补序列中一个核酸序列的扩增 产物；C)检测上述反应中的DNA扩增产物，上述反应中有扩增产物，说明上述样品中存在大 豆转化事件甜ZD32-01的DNA分子。
[0023] 本发明提出的一种DNA检测试剂盒包括一对引物或至少一个DNA探针，运里a)运 对DNA引物包括至少一个DNA分子包含足够长的连续的核酸序列来自SEQID:9或其完全 互补序列，运里的运对DNA引物能够产生诊断转化事件SNZD32-01的扩增片段；b)至少一 个DNA探针是诊断转化事件甜ZD32-01的。
[0024] 本发明提出一种田间种植含有甜ZD32-01的大豆，在田间用草甘麟除草剂处理杂 草和含有S监D32-01的大豆植株控制田间杂草生长。 阳0巧]本发明的技术方案是：
[00%] -种含有大豆转化事件甜ZD32-01的大豆植株或其部分，其特征在于，大豆植株 或其部分包含大豆转化事件甜ZD32-01，其有代表性的种子保藏在中国典型培养物保藏中 屯、，保藏编号为CCTCCN0:P201513。
[0027] 一种所述的含有大豆转化事件甜ZD32-01大豆植株的种子，其特征在于，所述的 种子含有所述大豆转化事件甜ZD32-01。
[0028] 一种由所述的种子生产的大豆商品产品，其特征在于，所述商品产品包含所述大 豆转化事件甜ZD32-01。
[0029] 所述商品产品进一步定义为食品、面粉、豆巧或油。
[0030] 所述的大豆植株部分进一步定义为细胞、花粉、胚珠、花、芽、根或叶片。
[0031] 所述的大豆植株进一步定义为包含所述大豆转化事件甜ZD32-01的大豆植株的 任何世代的后代植株，该后代植株包含所述大豆转化事件甜ZD32-01。
[0032] 所述大豆植株或其部分能够产生大豆转化事件S监D32-01的诊断扩增。
[0033] 所述诊断扩增包含沈Q ID NO: 1或沈Q ID NO:2。
[0034] 一种大豆转化事件甜ZD32-01包含种子，其特征在于，所述的种子能够产生所述 大豆转