EQIDNO. 9中包含的基因组和转基因元件描述， 见下表1。5'和3'端的侧翼序列包括于沈QIDNO. 9中，并在沈QIDNO. 21和沈QID NO. 22列出。
[0109] 结合序列是相对较短的核巧酸分子，是新的核酸分子，当进行多核巧酸分子检测 时能够作为转化事件S监D32-01的诊断分子。在结合部位的SEQIDNO. 1和SEQIDNO. 2 代表甜ZD32-01 -个插入位点中转基因片段和基因组DNA每一方面10多聚核巧酸。较长 或较短的多核巧酸结合序列从SEQIDNO. 3或SEQIDNO. 4中选择出来，接合分子保结 合区SEQIDNO. 1和3'结合区SEQIDNO. 2)在DNA检测方法中作为DNA探针或DNA引物 分子是十分有用的。检测转化事件的引物和探针专口用于大豆转化事件甜ZD32-01的检 。引物分子被指定为沈QIDNO. 10,沈QIDNO. 11，沈QIDNO. 14,沈QIDNO. 15,沈QID NO. 16,沈QIDNO. 17,探针分子被指定为沈QIDNO. 12,沈QIDNO. 13,沈QIDNO. 10,沈Q IDNO. 11。另外用于从大豆食品中产生扩增产物的片段还包括SEQIDNO. 18-20。
[0110] 表1含有甜Z册2-01大豆基因组转基因/基因组片段（SEQIDNO. 9)的基因组和 遗传元件
[0112] SouthernBlot分析
[0113] 含有甜ZD32-01的植物基因组DNA和对照大豆基因组DNA(每个大约15mug)被各 种限制性酶消化（140U)在150ul的总体积包含15ul的buffer(肥B,Beverly,Mass.).限 制性核酸内切酶，如，BamHI，PstI,HindIII，和甜aI用于甜ZD32-01的Southern分 析。核酸内切酶在适当的溫度下消化至少6小时。解育后，DNA用3M醋酸钢和2. 5体积的 乙醇沉淀。接下来DNA用70%的乙醇洗涂，干燥并重新悬浮在40mul的TBE中。在样品中 加入Loadingbuffer(0. 2倍），然后在琼脂糖凝胶（0. 8% )上30瓦电泳16-18小时。凝 胶被漠化乙锭染色，用去嚷岭溶液处理（0. 125N肥L) 10分钟，用变性溶液处理，（0. 5M氨氧 化钢，1. 5M氯化钢）30分钟，最后用中和溶液（0. 5MTrizmabase, 1. 5M氯化钢）处理30 分钟。DNA被转到杂交-N膜上（AmershamPharmaciaBiotech,Buckingamshire, !England) 用吸水纸（SchleicherandSchuell,DasseLGermany)吸4-6小时然后用紫外光照固定到 膜上。
[0114] 膜用20ml的DIGEasyHyb溶液预杂交在45°C下2-4hours。带有标记的DNA探 针与沈QIDNO. 1，或沈QIDNO. 2,或沈QIDNO. 3,或沈QIDNO. 4,或其他序列的一部 分同源或互补，没有结合的核酸被去掉。用IOml预热的DIGEasyHyb,含有变性探针的溶 液代替预杂交液。印记在45°C杂交16-18小时。
[0115] 印记在低严格溶液（5.times. SSC，0.1.times. SD巧在45°C下被洗掉，再次重复用 较高的严格溶液在65°C下重复洗涂（0. 1.times. SSC，0. 1%SD巧。印记曝光。运些例证了 的方法和条件在检测样品中DNA的时可W适当改变。
[0116] 实施例3 阳117] 杂草控制
[0118] 用含有甜ZD32-01的大豆在田间控制杂草的生长。田间种植含有甜ZD32-01的大 豆种子，种子萌发成为植株，用配方含有草甘麟的除草剂处理田间的植株。草甘麟配方的有 效剂量W大约0. 25化ae/A(草甘麟酸平衡的含量，磅/前）到3或更高的剂量用于田间。 应用范围从约0.75化ae/A到1.5化ae/A在生育季根据需要在田间处理一次或多次控制 杂草的生长。从草甘麟处理的植株上收获含有S监D32-01的种子。
[0119] 上述公开并在权利要求书中引证的上海交通大学保藏的代表甜ZD32-01的大豆 种子保藏在中国典型培养物保藏中屯、（CCTCC)，中国湖北省武汉市武汉大学校内，邮政 编码430072,该保藏生物材料的分类命名为：大豆属栽培大豆种大豆S监D32-01Glycine Hiax(L)Merr.，保藏编号为CCTCCN0:P201513,保藏日期为2015年8月18日，保存期为S十 年（自保藏中屯、收到之日起计算），期满前收到提供培养物样品的请求后再延续保存五年。
[0120] W上所述本发明的原理，技术熟练人员能够显而易见地在不偏离运些原则的前提 下在程序安排和细节上加W改变。我们的权利要求包括在不偏离本发明权利要求的范围和 精神的所有改变。
[0121]
【主权项】
1. 一种含有大豆转化事件SHZD32-01的大豆植株或其部分，其特征在于，大豆植株 或其部分包含大豆转化事件SHZD32-01，其有代表性的种子保藏在中国典型培养物保藏中 心，保藏编号为CCTCCN0:P201513。2. -种权利要求1所述的大豆植株的种子，其特征在于，所述的种子含有所述大豆转 化事件SHZD32-01。3. -种由权利要求2所述的种子生产的大豆商品产品，其特征在于，所述商品产品包 含所述大豆转化事件SHZD32-01。4. 根据权利要求3所述的大豆商品产品，其特征在于，所述商品产品进一步定义为食 品、面粉、豆柏或油。5. 根据权利要求1所述的大豆植株部分，其特征在于，进一步定义为细胞、花粉、胚珠、 花、芽、根或叶片。6. 根据权利要求1所述的大豆植株，其特征在于，进一步定义为包含所述大豆转化 事件SHZD32-01的大豆植株的任何世代的后代植株，该后代植株包含所述大豆转化事件 SHZD32-01。7. -种大豆转化事件SHZD32-01包含大豆植株或其部分，其特征在于，大豆植株或其 部分能够产生大豆转化事件SHZD32-01的诊断扩增。8. 根据权利要求7所述的大豆植株，其特征在于，所述诊断扩增包含SEQIDNO: 1或 SEQIDNO:2。9. 一种大豆转化事件SHZD32-01包含种子，其特征在于，所述的种子能够产生所述大 豆转化事件SHZD32-01的诊断扩增。10. 根据权利要求9所述的种子，其特征在于，所述的大豆转化事件SHZD32-01的诊断 扩增包括SEQIDNO: 1 或SEQIDNO:2。11. 根据权利要求4所述的大豆商品产品：食品、面粉、豆柏或油，其特征在于，所述的 食品、面粉、豆柏或油进一步定义为含有能够产生大豆转化事件SHZD32-01诊断扩增的核 酸，当使用DNA扩增方法进行检测时，上述诊断扩增包含SEQIDNO: 1或SEQIDNO: 2。12. -种产生耐草甘膦除草剂大豆的方法，其特征在于，包含将所述大豆转化事件 SHZD32-01引入大豆基因组。13. 根据权利要求12所述的方法，其特征在于，包含下列步骤：(a)用第一种包含所 述大豆转化事件SHZD32-01的大豆植株与第二种不含有所述大豆转化事件SHZD32-01的 大豆植株进行杂交产生后代植株；和（b)筛选至少一个第一种含有所述大豆转化事件 SHZD32-01并耐草甘膦的后代植株。14. 根据权利要求13所述的方法，其特征在于，进一步包含，通过所述第一种含有所述 大豆转化事件SHZD32-01并耐草甘膦的后代植株自交，产生第二代后代植株，并选择至少 一个含有所述大豆转化事件SHZD32-01的第一种植株的纯合体植株。15. -种具有草甘膦耐受性大豆植株、种子或其含有DNA的包括草甘膦抗性蛋白 G10-EPSPS和能够产生大豆转化事件SHZD32-01诊断扩增的部分。16. 根据权利要求15所述的具有耐草甘膦耐受性大豆植株、种子或其含有DNA的部分， 其特征在于，所述的大豆转化事件SHZD32-01的诊断扩增包含SEQIDNO: 1或SEQIDNO:2。17. -种产生大豆商品产品的方法，其特征在于，包括：(a)获得权利要求1所述的大豆 植株或部分；和（b)从所述大豆植株或其部分生产所述大豆商品产品。18. 根据权利要求17所述的方法，其特征在于，所述的商品产品被定义为食品、面粉、 碎肩、分离蛋白或油。19. 一种在田间控制杂草的大豆种植方法，其特征在于，使用权利要求1所述的包含大 豆转化事件SHZD32-01的大豆植株，所述方法包括在田间使用一定剂量的草甘膦以有效地 控制杂草的生长，所述大豆表现出耐草甘膦特性。20. 根据权利要求19所述的方法，其特征在于，在大豆生长阶段从Vl到R4期进行田间 处理。
【专利摘要】本发明公开了一种包含大豆转化事件SHZD32-01的大豆植株和种子以及该大豆转化事件SHZD32-01中独特的DNA分子，本发明也提出了该大豆植株部分、种子及其产品的应用方法；所述大豆转化事件SHZD32-01含有下列核酸序列中的至少1个核酸分子：SEQ？ID？NO:1、SEQ？ID？NO:2、SEQ？ID？NO:3、SEQ？ID？NO:4、SEQ？ID？NO:9及其完全互补序列；所述应用方法包括产生耐草甘膦除草剂大豆的方法、产生大豆商品产品的方法和在田间控制杂草的大豆种植方法。本发明的大豆株系含有SHZD32-01大豆转化事件，表现出很强的草甘膦耐受性，有助于对杂草的控制，大豆转化事件SHZD32-01的DNA检测对于鉴定样品中的大豆转化事件SHZD32-01并应用于含有该DNA的大豆育种具有非常价值。CCTCC NO:P20151320150818
【IPC分类】A01H5/00, C12Q1/68, C12N15/11
【公开号】CN105219767
【申请号】CN201510646846
【发明人】曹越平, 肖培英, 薄路花, 刘峰, 崔云云, 周麟笔, 张家进, 武湘豫, 李娜
【申请人】上海交通大学
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2015年10月9日