2.42(m，4H，6-H，22-He，38-H，29-H)，2.40 - 2.33(m，lH，22-Ha)，2.30-2. 10(m，4H，2、10-Ha, 14-Ha，21-He)，2. 15 - 1.80(m, 11H，5-H，7-H，8、 9-He, 12-He, 21-Ha, 25-H, 39-H, 41-H)，1. 65 - 1. 36 (m, 13H，3-H, 4-H, 8、9-Ha, 12-Ha, 26、 27、42-He, 49-H)，1. 30-1. 25 (m,J= 16. 0, 12.OHz, 13H, 26、27、42-Ha, 35-H, 36-H, 45-H, 47 -H)，1. 22 (m，3H，19-H)，1. 20 (s,細，43-H, 44-H)，1. 09 (d,J= 15.OHz,6H, 46-H, 48-H).元 素分析，C47H72N2O5,实测值（计算值），％ ;C75. 73 (75. 76) ;H9. 76 (9. 74) ;N3. 75 (3. 76); 010. 76(10. 74).MS(ESI)m/z:745. 54 (Μ+ΗΓ
[013引 3-6 16-{4-[4-(双2-氯己基）氨基-苯基]-了醜基}苦参酸己醋化SJ-20)的 制备
[0139]
[0140] 向反应容器中加入O.OOlmol的苯了酸氮芥，冰浴条件下滴加含有1血氯化亚 讽的二氯甲焼溶液，然后加热回流比，至无气泡产生，将溶剂蒸干，得到踪色固体。然后 将0.OOlmol的化合物3w及0. 14g碳酸钟放入上述固体中，加入30血的Η氯甲焼，回 流22h，反应完全。蒸干溶剂，加入蒸傭水将碳酸钟溶解，用lOmL己酸己醋萃取3次，收 集有机层，无水硫酸钢干燥过夜，过柱分离，洗脱剂为石油離和己酸己醋体积比为4 ;1的 混合溶液，所得产物为黄色油状物，产率55%。古NMR(400MHz，CDCl3)67. 13(2H，d，J =8Hz,ArH),6.68(2H,d,J= 7. 9Hz,ArH), 4. 20 (2H,m, 18-H), 3. 71 (4H,t,J= 8. 7Hz, 2XCH2CI)，3. 62 (4H,t,J= 9.細z, 2XNCH2)，3. 54 (IH，dd，J= 11. 2, 3.細z，17-He)， 3. 38(lH，m，11-H), 3. 40(lH，m，17-Ha), 2. 75-2. 64(2H，m, 23-H), 2. 64-2. 33(llH，m，2、 10-H, 5、6、7、14、21-H), 2. 11-2. 01(2H，m, 22-H), 1. 98-1. 53(llH，m，CH,邸2)，1. 52(3H，m,C &).实测值（计算值），％;C64. 10 化 4. 13)巧8. 17(8. 16) ;C112. 21(12. 23) ;N7. 23(7. 24); 08. 28(8. 27)。MS(ESI)m/z:580. 23(Μ+ΗΓ
[014。 3-7 16-{4-的N-二（2-氯己基）]}苯甲醜苦参酸己醋化SJ-21)的制备
[0142]
[0143] 向反应容器中加入O.OOlmol的苯甲酸氮芥，冰浴条件下滴加含有ImL氯化亚讽 的二氯甲焼溶液，然后加热回流比，至无气泡产生，将溶剂蒸干，得到踪色固体。然后将 0.001mol的化合物3W及0. 14g碳酸钟放入上述固体中，加入30血的Η氯甲焼，回流22h， 反应完全。蒸干溶剂，加入蒸傭水将碳酸钟溶解，用lOmL己酸己醋萃取3次，收集有机层， 无水硫酸钢干燥过夜，过柱分离，洗脱剂为石油離和己酸己醋体积比为3 ;1的混合溶液， 所得产物为黄色油状物，产率58%。电NMR(CDCl3,400MHz)，6h:7.87(lH，m，J= 2. 4Hz， ArH)，7. 36 (IH，d，J= 8. 4Hz，ArH)，6. 59 (2H，m，J= 8. 4Hz，ArH)，4. 36 (IH，m，J= 17Hz, 17-He)，4. 05(2H，m，J= 7. 2Hz，0CH2)，3. 85(lH，m，J=甜z，ll-H)，3. 75(4H，t，J= 6.細z， 2XCH2C1)，3. 57(4H，t，J= 6.細z，2XNCH2)，3. 48(lH，d，J= 10. 8Hz，17-Ha), 2. 82(2H，m，J =17. 2Hz，2、10-He)，2. 76(2H，m，J= 11. 2Hz，C0CH2)，2. 18-1. 32(17H，m，2、10-Ha，CH2，CH)， 1. 16 (3H，t，J= 7. 2Hz，CH3)。元素分析，C2SH41CI2N3O3,实测值（计算值），％ ;C62. 22 化2.侣）；H7. 63(7. 67) ；N7. 87(7. 80) ；C113. 11 (13. 17) 〇MS(ESI)m/z: 538. 4 (M+H) \
[0144] 通过本发明制备的苦参碱衍生物的制备方法得到的苦参碱衍生物，其构成纯度在 99%或W上。
[0145] 药理实验
[0146] 实验材料：
[0147]人乳腺癌MCF-7细胞株、人肝癌SMMC-7721、小鼠骨肉瘤S180细胞株常规培养于含 10%小牛血清的1640培养基中，37°C，5%C02培养箱及饱和湿度条件下培养，3-4d传代1 次。由天津市医药科学研究所细胞室提供。
[0148]MTT(批号；0793Scientificresearchspescial公司）；RPMI1640 培养基（批号： NT F0886Hyclone公司）；新生牛血清（批号：090605杭州四季青生物工程材料有限公司）； 二甲基亚讽（DMSO)等其余试剂均为国产分析纯。
[0149] 仪器(?培养箱型号度B16/BB5060上海力创科学仪器有限公司），美国；酶联免疫 检测仪（型号infinite M200Tecan公司瑞±产）；倒置显微镜（型号；CK奧林己斯公司日 本产）超净工作台（北京半导体设备一厂）。
[0150] 实验操作及结果：
[0151] 化SJ系列化合物对肝癌细胞的抑制作用
[0152] 用MTT法测试目标化合物对人体肝癌细胞SMMC-7721的体外抗肿瘤活性。取处于 指数生长期的状态良好的细胞，制成每毫升含5X1〇3个细胞的悬液。将细胞悬液接种于96 孔培养板中，每孔100μ以分样品组、对照组（不加样品）和空白组（只有培养基），每组设 定4个复孔。置于恒温(?培养箱中培养24h换液，加入受试化合物（化合物用DMS0溶解 后用PBS稀释，对照组浓度分别为 0. 008,0. 016,0. 031,0. 063,0. 125,0. 250,0. 500,1. 00， 2. 00,4. 00,8. 00(μmol/mL)，样品组浓度分别为 0.001,0. 002,0. 004,0. 008,0. 016， 0.032,0. 064,0. 130,0. 250,0. 500，1.00(μπιο1 /mL)。每孔 100μL培养 48h加入MTT， 每孔10μL，于培养箱中反应地后吸去上清液，每孔加入150μLDMS0,在平板摇床上振摇 5min，用酶联免疫检测仪在波长570nm处测定每孔的吸收度，计算细胞抑制率后再由统计 软件求出。值。
[0153] 表化SJ系列化合物对肝癌细胞SMMC-7721的抑巧?Κ乍用
[0154]
[0155] 2KSJ系列化合物对乳腺癌细胞的抑制作用
[0156] 用Μ?Τ法测试目标化合物对乳腺癌细胞MCF-7的体外抗肿瘤活性。取处于指数生 长期的状态良好的细胞，制成每毫升含5Xl〇3个细胞的悬液。将细胞悬液接种于96孔培 养板中，每孔100μレ分样品组、对照组（不加样品）和空白组（只有培养基），每组设定4 个复孔。置于恒温C〇2培养箱中培养24h换液，加入受试化合物（化合物用DMS0溶解后用 PBS稀释，对照组浓度分别为 0. 008,0. 016,0. 031,0. 063,0. 125,0. 250,0. 500,1. 00,2. 00， 4. 00,8. 00(umol/ 血），样品组浓度分别为 0.001,0. 002,0. 004,0. 008,0. 016,0. 032， 0. 064,0. 130,0. 250,0. 500,1. 00 (μmol/mL)。每孔 100μL，培养 4化加入MTT，每孔 10μL，于培养箱中反应4h后吸去上清液，每孔加入150μLDMS0,在平板摇床上振摇5min， 用酶联免疫检测仪在波长570nm处测定每孔的吸收度，计算细胞抑制率后再由统计软件求 出ICs。值。
[0157] 表2KSJ系列化合物对乳腺癌细胞MCF-7的抑制作用 [015 引
[0159] 3KSJ系列化合物对骨肉瘤细胞S180的抑制作用
[0160] 用MTT法测试目标化合物对骨肉瘤细胞S180的体外抗肿瘤活性。取处于指数生 长期的状态良好的细胞，制成每毫升含5Xl〇3个细胞的悬液。将细胞悬液接种于96孔培 养板中，每孔100μ以分样品组、对照组（不加样品）和空白组（只有培养基），每组设定 4个复孔。置于恒温(?培养箱中培养24h换液，加入受试化合物（化合物用DMS0溶解后 用PBS稀释，对照组浓度分别为 0. 002,0. 004,0. 008,0. 016,0. 031,0. 063,0. 125,0. 250， 0.500,1.00,2. 00(umol/ 血），样品组浓度分别为 0.001,0. 002,0. 004,0. 008,0. 016， 0.032,0. 064,0. 130,0. 250,0. 500，1.00(μπιο1 /mL)。每孔 100μL培养 48h加入MTT， 每孔10μL，于培养箱中反应地后吸去上清液，每孔加入150μLDMSO,在平板摇床上振摇 5min，用酶联免疫检测仪在波长570nm处测定每孔的吸收度，计算细胞抑制率后再由统计 软件求出。值。
[0161] 表3KSJ系列化合物对骨肉瘤细胞S180的抑制作用
[0162]
[0163] 药理实验结果表明；在W苦参碱和美法仑为对照药、与KSJ系列化合物同时给药 的情况下，研究KSJ系列化合物对人体肝癌细胞SMMC-7721和乳腺癌细胞MCF-7的抑制作 用，通过对比它们的抑制率和ICs。值发现；KSJ系列所有化合物的抗肿瘤活性都优于对照 药苦参碱，其中KSJ-1、KSJ-2、KSJ-4、KSJ-5、KSJ-6、KSJ-7、KSJ-8、KSJ-9、KSJ-11、KSJ-12、 KSJ-13、KSJ-14、KSJ-15、KSJ-16、KSJ-18、KSJ-19、KSJ-20 和KSJ-21 都优于对照药美法仑； 研究KSJ系列化合物对骨肉瘤细胞S180的抑制作用，通过对比它们的抑制率和ICw值发 现；KSJ系列所有化合物的抗肿瘤活性都优于对照药苦参碱，其中KSJ-1优于对照药美法 仑，KSJ-4、KSJ-8、KSJ-11、KSJ-15、KSJ-18和对照药美法仑抗肿瘤相当。
【主权项】
1. 一种苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐，其特征在于：所述衍生物的结构式如式 I所示：Rx为下述RXl、Rx2、Rx3、RX4、Κχ5、RXfS或Rx7 :2. -种苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐，其特征在于：所述衍生物的结构式如式 II所示：Rx为下述RXl、Rx2、Rx3、RX4、Κχ5、RXfS或Κχ7 :3. -种苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐，其特征在于：所述衍生物的结构式如式 Ill所示：Rx为下述Rxi、Rx2、Κχ3、Rx4、Rx6 或Rx?: --·wi d：4.如权利要求1或2所述的苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐，其特征在于：制备 所述苦参碱衍生物所采用的原料包括槐果碱。5. 如权利要求1所述的苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐，其特征在于：制备所述 式I的中间体为结构式如下的13-(2-羟基）乙氧基苦参碱：6. 如权利要求2所述的苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐，其特征在于：制备所述 式II的中间体为结构式如下的13-(2-氨基）乙氧基苦参碱： ' "?7. 如权利要求3所述的苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐，其特征在于：制备所述 式III的中间体为结构式如下的苦参酸乙酯：8. 如权利要求7所述的苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐，其特征在于：所述的中 间体苦参酸乙酯是苦参碱与NaOH的醇溶液生成苦参酸后，再与乙醇反应制得该中间体苦 参酸乙酯。9. 如权利要求1-3任一所述的苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐在制备抗肿瘤药 物中的用途。10. 如权利要求9所述的苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的 用途，其中所述用途为治疗肝癌、乳腺癌和骨肉瘤的药物。
【专利摘要】一种苦参碱衍生物，本发明提供了一种高活性，低毒性的，具有良好抗肿瘤性能的苦参碱衍生物，及其在制备抗肿瘤药物中的用途。
【IPC分类】A61K31/4375, C07D471/16, C07J63/00, A61K31/58, C07D471/22, C07F9/6561, A61P35/00, A61K31/675
【公开号】CN105254631
【申请号】CN201410325726
【发明人】陶遵威, 张娜, 周运琴, 王文彤, 崔晓燕, 张国庆
【申请人】天津市医药科学研究所
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2014年7月10日