一种二肽分子及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于蛋白质领域，特别涉及一种二肤及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002]k脯氨酸（Pro),英文名为L(-)-Proline，别名：4-漠-2-(H氣甲基）苯礙醜氯 4-漠-2-(H氣甲基）苯礙醜基氯，CAS号为147-85-3,是植物蛋白质的组分之一，并可W 游离状态广泛存在于植物体中。在干旱、盐溃等胁迫条件下，许多植物体内脯氨酸大量积 累。积累的脯氨酸除了作为植物细胞质内渗透调节物质外，还在稳定生物大分子结构、降 低细胞酸性、解除氨毒W及作为能量库调节细胞氧化还原势等方面起重要作用。
[0003]k丙氨酸，英文名为kAlanine，CAS号：56-41-7,C3H7N02 = 89. 10200°CW上升 华。是组成蛋白质的一种成分。在营养学中属人体非必需的氨基酸。目前多从发酵法和天 然产物中提取。
[0004] 炎症是具有血管系统的活体组织对损伤因子所发生的防御反应。对机体的损伤的 局部组织所呈现的反应称为炎症反应，炎症发展后期会产生渗出液，渗出物的压迫和炎症 介质的作用可引起患者疼痛。现在抗炎的临床应用药物主要为化学合成药物，如蔡了美 丽、剛巧美辛、化罗昔康、布洛芬等，送些化学药物虽然抗炎效果明显，但不能治本，不能 消除致炎的基本原因，大多都有较严重的不良反应，给患者造成痛苦和损失。
[0005] 创面修复，创面是正常皮肤（组织）在外界致伤因子如外科手术、外力、热、电流、 化学物质、低温W及机体内在因素如局部血液供应障碍等作用下所导致的损害。常伴有皮 肤完整性的破坏W及一定量正常组织的丢失，同时，皮肤的正常功能受损。也称为伤口或者 创伤。创面修复既伤口修复。
[0006]消化道溃瘍病，胃溃瘍、十二指肠溃瘍统称为消化道溃瘍病。由于生活节奏加快， 工作压力加大，近年消化道溃瘍病的发病率不仅未见下降，反有上升趋势。近10多年来本 病的症状也变得不典型，无规律的胃部隐痛常引不起人们的注意，直到发生呕血或黑便时 方到医院就诊。消化性溃瘍主要指发生在胃和十二指肠的慢性溃瘍，亦可发生于食管下段、 胃空肠吻合口周围及含有异位胃粘膜的美克尔（MECKEL)憩室。送些溃瘍的形成与胃酸和 胃蛋白酶的消化作用有关，故称消化性溃瘍。近年研究发现溃瘍的形成与幽口螺旋桿菌 (HP)的存在有关。本病绝大多数巧5%W上）位于胃和十二指肠，故又称胃十二指肠溃 瘍。本病的总发病率占人口的5-10%，十二指肠溃瘍较胃溃瘍多见，W青壮年多发，男多于 女，儿童亦可发病，老年患者所占比例亦逐年有所增。由于复发率很高，给患者带来痛苦。
[0007] 免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物（病毒、 细菌等）；处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞W及识别和处理体内突变细胞和病毒感 染细胞的能力。现代免疫学认为，免疫力是人体识别和排除"异己"的生理反应。年老体弱 的人员由于自身免疫系统较弱，所W需要提高细胞的识别能力。免疫力低下是会造成人体 容易受到外界的感染，功能下降。
[000引在现有药物中缺少可W同时治疗多种疾病的二肤，临床中疗效好，毒性小的二肤 的产品未发现。
【发明内容】
[0009] 为了寻找一种可W多角度修复人体创面和抗炎镇痛，同时提高人体免机能的药 物，发明人通过大量试验，广泛的筛选，采用Fmoc保护的氨基酸来合成，得到大量二肤分 子，其中部分二肤分子获得了意想不到的技术效果。意外地发现治疗效果较好的二肤PA,即 k脯氨酸A-丙氨酸，其由Pro,Ala2个氨基酸残基组成，相对分子量为186. 23,其氨基酸 序列如SEQID: 1所示。
[0010] 上述二肤的制备方法可W使用合成，也可W采用从生物体中提取纯化得到。
[0011] 制备方法，其特征在于包括如下的步骤：
[0012] a.合成顺序为从C端到N端；取1倍摩尔当量的树脂放入多肤合成仪反应器中， 加入DCM(二氯甲焼）溶胀半小时，然后抽掉DCM，加入序列中第一个Fmoc保护的氨基酸 IOmmol，2倍摩尔当量的DIEA(二异丙基己胺），适量的DMF(二甲基甲醜胺）、DCM溶液（适 量是指W可使树脂充分鼓动起来为宜），用氮气鼓泡反应60min;然后加入约5倍摩尔当量 甲醇，反应半小时，抽掉反应液，用DMF、甲醇洗净；
[001引b.加入适量脈巧去除Fmoc(9-巧甲氧撰基）保护基，洗净，巧立丽检测；
[0014] C.往反应器中加入序列中第二个氨基酸（也为2倍摩尔当量），2倍摩尔当量 皿TU(苯并H氮哇-N，N，N'，N' -四甲基脈六氣磯酸盐）及DIEA，氮气鼓泡反应半小时，抽掉 液体，用DMF,甲醇洗净，巧H丽检测；
[0015]d.将树脂用氮气吹干后，从反应柱中取下并称取重量，倒入烧瓶中，然后往烧瓶中 加一定量的95%TFA(H氣己酸）切割液，震荡反应2h，目的是将二肤从树脂载体上裂解下 来并去除氨基酸的侧链保护基团；
[0016] e.滤掉树脂，得到滤液，然后向滤液中加入大量己離，析出粗产物，然后离必，清洗 即可得到该序列的粗产物；
[0017]f.分析提纯和质谱检测：用ESI(电喷雾电离）离子源质谱仪和测序仪检测该序 列的正确性，用高效液相色谱将粗品提纯至要求纯度；
[0018] g.收集纯化好的目标二肤溶液放入冻干机中进行浓缩，冻干成白色粉末。
[0019] 本发明提供的二肤可作为药品，普通食品、保健品或者消毒剂，化妆品，医疗器 械的组成部分。本发明还提供一种二肤的组合物，其中含有药学可W接受的载体。组合物可 WW药物制剂形式存在，该药物制剂形式药物组合物，可W按照制剂学常规技术制备，包括 将药物活性成分，本发明的二肤与药物载体混合，按照制剂学常规技术制成所需要的剂型。
[0020] 本发明中的二肤，分子量小、人工合成方便、纯度很高，生产方面，适合大规模生 产，在应用方面，送些二肤抗炎镇痛效果明显，对创面损伤、烧伤、烫伤、消化道溃瘍具有显 著的治疗效果；该二肤还有能提高动物免疫机能的作用，二肤能够在制备抗菌、抗炎镇痛、 抗肿瘤和提高免疫力的药物中的应用。
【具体实施方式】
[0021] W下是结合具体试验对本发明的说明，并不是对本发明保护范围的限制。
[0022] 实施例1本发明中二肤的制备方法
[0023]原料：树脂（Wang Resin)，Fmoc保护的氨基酸，
[0024]试剂；N，N-二甲基醜胺值MF)，DCM，ME0H，己酸酢，化巧，DIEA，皿TU，六氨化巧 [002引仪器；十二通道半自动多肤合成化高效液相色谱她LC)，型号；Waters2695检测 试剂；苯酪试剂，化政巧H丽试剂
[0026] (1)合成顺序为从C端到N端。
[0027] 似取IOmmol当量的树脂放入多肤合成仪反应器中，加入DCM(二氯甲焼）溶胀 半小时，然后抽掉DCM，加入序列中第一个Fmoc保护的氨基酸IOmmolJOmmol的DIEA(二 异丙基己胺），适量的DMF(二甲基甲醜胺）、DCM溶液（适量是指W可使树脂充分鼓动起来 为宜），用氮气鼓泡反应60min。然后加入约SOmmol当量甲醇，反应半小时，抽掉反应液，用 DMF、甲醇洗净。
[002引 做加入适量脈巧去除Fmoc(9-巧甲氧撰基）保护基，洗净，巧立丽检测。
[0029] (4)往反应器中加入序列中第二个氨基酸（也为20mmol)JOmmol皿TU(苯并H氮 哇-N，N，N'，N' -四甲基脈六氣磯酸盐）及DIEA，氮气鼓泡反应半小时，抽掉液体，用DMF，甲 醇洗净，巧H丽检测。
[0030] (5)重复依步骤3、4的方式依次加入序列中氨基酸，抽掉液体，用DMF洗净，巧H丽 检测。
[003。（6)将树脂用氮气吹干后，从反应柱中取下并称取重量，倒入烧瓶中，然后往烧瓶 中加一定量的95%TFA(H氣己酸）切割液，震荡反应2h，目的是将多肤从树脂载体上裂解 下来并去除氨基酸的侧链保护基团。
[0032] (7)滤掉树脂，得到滤液，然后向滤液中加入大量己離，析出粗产物，然后离必，清 洗即可得到该序列的粗产物。
[0033] (8)分析提纯和质谱检测：用ESI(电喷雾电离）离子源质谱仪检测该序列分子量 的正确性，用高效液相色谱将粗品提纯至要求纯度。
[0034] (9)收集