浓缩后得到含有3β-乙 酰氧基人参皂苷匕的粗品98mg;将3β-乙酰氧基人参皂苷Fi的粗品采用体积比为1:5的 乙酸乙酯-甲醇混合溶液重结晶，得到3β-乙酰氧基人参皂苷F^mg。
[0040] 其中，柱层析用硅胶粒度为100~400目。柱层析用MCIGEL粒度为75-150U。
[0041] 实施例4
[0042] 选取上述实施例1中得到的3β-乙酰氧基人参皂苷匕单体，采用波谱方法，进行 结构鉴定。
[0043] 化合物的HR-ESI-MS谱（见附图1)给出分子量703. 4343 [M+Na]+ (计算值 703.4397)的准分子离子峰，结合4NMR、13CNMR确定其分子式为
[0044] 化合物的1HNMR(400MHz，C5D5N)中给出烯氢质子信号δ5. 28 (1H，t，J= 5. 6Hz)， 糖端基质子信号S5.20(1?d，J= 6.0Hz);中场有糖质子信号；高场给出9个甲基信号： δ2. 11 (3H，s)，1. 65 (3H，s)，1. 63 (3H，s)，1. 62 (3H，s)，1. 60 (3H，s)，1. 33 (3H，s)，1. 07 (3H， s)，0.98(3H，s)，0.95(3H，s)。与人参皂苷Fi比较，多了一个甲基信号。1HNMR谱中还给出 其他质子信号。
[0045] 化合物的13CNMR(100MHz，C5D5N)中共给出38个碳信号。其中一组为葡萄糖 碳信号：S98. 4, 79. 3, 78. 3, 75. 3, 71. 6,62. 9,结合化合物的虫NMR中糖端基质子信号 δ5. 20 (lH，d，J= 6.0Hz)可知葡萄糖为β-构型。碳谱中还给出9个甲基碳信号；一个双 键碳信号S126.0,131. 1 ;-个羰基碳信号δ170.9。与人参皂苷碳谱数据比较，基本 相似，除了多了一个乙酰基信号以外。
[0046] 化合物的HMBC谱中，H-28,H-29与δ81. 3的碳远程相关，S卩δ81. 3为C-3,H-3 与δ170. 9的碳远程相关，说明乙酰氧基连接在C-3上。HMBC谱还显示出Η-28与C-3， C-4,C-5 和C-29,Η-29 与C-3,C-4,C-5 和C-28,Η-5 和C-10,C-19,C-28 和C-29,Η-21 与 C-17 和C-22,Η-24 与C-26 和C-27,Η-18 与C-7,C-8 和C-9,Η-19 与C-l，C-5 和C-6 之 间的相关。根据化合物的HMBC谱归属了甲基质子的信号：化学位移为δ0.95的甲基质子 与C-15 (δ30. 9)，C-8 (δ41. 2)，C-13 (δ49. 1)和C-14 (δ51. 4)有远程相关，指定为Η-30 甲基；化学位移为δ〇. 98的甲基质子与（Μ0(δ38. 6)，（Μ(δ38. 9)和C_9(S49. 7)有远 程相关，指定为Η-19甲基；化学位移为δ1.07的甲基质子与C-7(δ47. 3)，C-8(δ41. 2)， C-9(δ49. 7)和C-14(δ51. 4)有远程相关，指定为Η-18甲基；化学位移为δ1.33的 甲基质子与C-28 (δ31. 4)，C-4 (δ39. 2)，C-3 (δ81. 3)和C-5 (δ61. 4)有远程相关， 指定为Η-29甲基；化学位移为δ1.60的甲基质子与024(δ126. 0)，025(δ131. 1) 和C-26(δ25. 8)有远程相关，指定为Η-27甲基；化学位移为δ1.63的甲基质子与 (Μ7(δ51.8)和022(δ36. 1)有远程相关，指定为Η-21甲基；化学位移为δ1.65的甲基 质子与C-3 (δ81. 3)，C-4 (δ39. 2)，C-5 (δ61. 4)和C-29 (δ17. 0)有远程相关，指定为Η-28 甲基。葡萄糖的端基质子δ5. 20与C-20 (δ83. 4)有远程相关，说明葡萄糖连接在C-20上。
[0047] 又根据该化合物的HSQC、HMBC谱图归属了其他碳、氢信号。数据见表1。虫NMR 谱、13CNMR谱、HSQC谱、HMBC谱分别见附图2-5。
[0048] 综合分析，鉴定该化合物为20-0-β-D-吡喃葡萄糖基-3β-乙酰氧基-达 玛-24-烯-6α，12β，20 (S)-三醇。经SciFinder检索未发现有关该化合物的文献报道， 为一个新化合物。
[0049] 表13β-乙酰氧基人参皂苷卩!的NMR数据和HMBC相关（400MHz和100MHz，C5D5N)
[0050]
[0052] 本发明通过下面的药效学实验进一步说明其抗肿瘤作用。
[0053] 实施实例5
[0054]MTT(四唑盐）法测定3β-乙酰氧基人参皂苷Fi对人肿瘤细胞的杀伤作用。
[0055] (1)试验设计
[0056] 使用的肿瘤细胞株：A549人非小细胞肺癌细胞、MGC80-3人胃癌细胞、MCF-7人乳 腺癌细胞三种人肿瘤细胞系（采用的细胞培养液分别为RPMI1640培养液、DMEM培养液、 MEM培养液）。
[0057] 试验分组：
[0058] 3β-乙酰氧基人参皂苷Fjl:l、25、50、100、200yg/L;
[0059]人参皂苷Rg3组：l、25、50、100、200yg/L;
[0060] 空白对照组：细胞培养液；
[0061] 溶剂对照组：细胞培养液及DMS0 ;
[0062] 阳性对照组：5_氟尿嘧啶（10μg/L)
[0063] (2)方法
[0064] 取对数生长期细胞，加入0. 25%胰蛋白酶消化，600r/min离心lOmin，调整细胞浓 度为6X104个/mL，接种于96孔培养板中（边缘孔用无菌PBS填充），每孔90yL。培养 24h后，加入待测样品（样品溶解于DMSO中，用培养基逐步稀释，加入细胞中药液的DMSO 终浓度低于1% )，使细胞液终浓度达到1、25、50、100、200μg/L，每组均设3个平行孔。于 37°C5% 0)2培养箱共同培养48h。每孔加入20μLMTT溶液（5mg/mL，溶解于PBS中），继 续培养4h后，终止培养。小心吸弃上清液，每孔加入150μLDMSO,震荡lOmin，使结晶物充 分溶解。用酶标仪在570nm处测每孔的吸光值（A)，计算出细胞存活率：细胞存活率％ =加 样品A值/对照细胞A值X100%。数据使用SPSS软件分析系统进行处理。
[0065] (3)结果
[0066] 实验结果表明，与人参中的抗肿瘤主要成分人参皂苷Rg3相比，3β-乙酰氧基人参 皂苷h对三种人肿瘤细胞系均具有更强的细胞杀伤作用。结果见表2-4。
[0067] 表2对A549人非小细胞肺癌细胞的影响
[0068]
[0069] 表3对MGC80-3人胃癌细胞的影响
[0070]
[0071] 表4对MCF-7人乳腺癌细胞的影响
[0072]
[0073] 综上所述，我们从人参花中提取并分离鉴定得到了一种具显著抗肿瘤活性的新皂 苷成分3β-乙酰氧基人参皂苷匕，其在抗肿瘤药物开发中具有广阔前景。
【主权项】
1. 一种3 β -乙酰氧基人参皂苷F i，结构式如下：化学名称是20-0- β 吡喃匍甸糖基-3 β -乙醜氧基-达玛-24-稀-6 α，12 β，20 (S) -二醇。2. 如权利要求1所述的3 β -乙酰氧基人参皂苷F i的提取方法，其特征在于包括下列 步骤：取人参花，加3-5倍重量的70-95%乙醇加热回流提取，每次3-6小时，共提取3-5 次，合并提取液，减压浓缩回收溶剂，冷冻干燥成粉末状；将乙醇提取物用甲醇溶解，加2 倍重量的硅胶拌匀，水浴蒸干后先经硅胶柱色谱，其中，洗脱剂为氯仿：甲醇：水体积比为 100:10:1~80:10:1 ;然后过MCI GEL柱色谱，其中，洗脱剂为甲醇：水体积比为6~8:4~ 2 ;将得到的粗品粉末用乙酸乙酯-甲醇1:3~5重结晶，得到3 β -乙酰氧基人参皂苷匕。3. 根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于：减压浓缩时水浴温度为40~50°C。4. 根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于：柱层析用硅胶粒度为100~400目。5. 根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于：柱层析用MCI GEL粒度为75-150U。6. 如权利要求1所述的3 β -乙酰氧基人参皂苷F 1在制备抗肿瘤药物中的应用。7. 根据权利要求6所述的3 β -乙酰氧基人参皂苷F i在制备抗肿瘤药物中的应用，其 特征在于：所述的肿瘤为人胃癌肿瘤或人肺癌肿瘤或人乳腺癌肿瘤。
【专利摘要】本发明公开了3β-乙酰氧基人参皂苷F1及其提取方法和其药物用途。属于新化合物和其药物用途。本发明方法以人参花为原料，经过醇提，硅胶柱层析和MCI？GEL柱层析，重结晶的方法，得到了一种新化合物3β-乙酰氧基人参皂苷F1，其化学名称为20-O-β-D-吡喃葡萄糖基-3β-乙酰氧基-达玛-24-烯-6α,12β,20(S)-三醇。3β-乙酰氧基人参皂苷F1在制备抗肿瘤药物中具有广泛用途。
【IPC分类】A61P35/00, C07J17/00
【公开号】CN105330713
【申请号】CN201510741882
【发明人】李珂珂, 弓晓杰, 陈丽荣, 徐斐
【申请人】大连大学
【公开日】2016年2月17日
【申请日】2015年11月4日