抗her3抗体、其制法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医药领域，具体地说，本发明涉及抗肥R3抗体、其制法及其应用。
【背景技术】
[0002] 肥R3 巧rbB-3、ERBB3、c-erbB-3、c-erbB3、受体酪氨酸蛋白质激酶erbB-3、沈Q IDNO. :41)是编码表皮生长因子受体巧GFR)酪氨酸激酶家族的一名成员，该家族还包括 肥Rl(又称为EGFR)、肥R2、和肥R4等。肥R3结构包括结合配体的胞外区，α螺旋的跨膜 区，具有酪氨酸激酶结构域和富含酪氨酸的C端磯酸化位点胞内区。其中胞外区又可分为 I(L1)、II(S1)、111化2)和IV(S2)，结构域I和III是配体结合区，而II和IV结构域是结合配 体后发生构象改变暴露的二聚化结构域。化regulin(HRG)是肥R3的特异性配体，肥R3的 表达和功能受到配体时空表达的影响，HRG通过促进肥R3与肥R家族的其他成员形成异二 聚体来激发胞内信号。因此，它能结合此配体，但是不能经由蛋白质磯酸化将信号传送入细 胞中。然而，它与具有激酶活性的其它肥R家族成员形成异二聚体。异二聚化导致受体介 导的信号传导途径的激活及其胞内域的转磯酸化。肥R家族成员间的二聚体形成扩大HER3 的信号传导潜力，并且是一种不仅用于信号多样化，而且用于信号放大的手段。例如，肥R2/ 肥R3异二聚体在肥R家族成员间经由PI3K和AKT途径诱导最重要的促有丝分裂信号之一， 已经在许多癌症，包括前列腺、膀脫、和乳腺肿瘤中报告了此基因的扩增和/或其蛋白质的 过表达。已经表征了编码不同同等型的可变转录剪接变体。一种同等型缺乏膜间区，并且 分泌到细胞外。此形式作用为调控膜结合形式的活性。还已经报告了别的剪接变体，但是 它们尚未彻底表征。
[0003]W097/35885涉及肥R3抗体。W02003/013602涉及肥R活性抑制剂，包括肥R抗 体。W02007/077028和W02008/100624也涉及肥R3抗体。但是本领域中仍然缺乏一种针对 肥R3的灵敏性好特异性强的抗体。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种新型的肥R3特异性抗体或其片段。
[0005] 本发明的另一目的是提供上述抗体或其片段的制备方法和用途。
[0006] 本发明的第一方面，提供了一种抗体的重链可变区，所述的重链可变区包括W下 Η个互补决定区CDR;
[0007] (1)互补决定区CDR1
[0008]所述互补决定区CDR1 选自；SEQIDNO. :17、沈QIDNO. :23、沈QIDNO. :29 和 沈QIDNO. : 35 ;
[0009] 似互补决定区CDR2
[0010]所述互补决定区CDR2 选自；SEQIDNO. :18、沈QIDNO. :24、沈QIDNO. :30 和 沈QIDNO. : 36 ;
[0011] 做互补决定区CDR3
[0012] 所述互补决定区CDR3 选自；SEQIDNO. :19、沈QIDNO. :25、沈QIDNO. :31 和 沈QIDNO. :37。
[0013] 在另一优选例中，所述重链可变区的H个互补决定区CDRl、CDR2、CDR3的氨基酸 序列分别如沈QIDNO. : 17、SEQIDNO. : 18 和沈QIDNO. : 19 所示。
[0014] 在另一优选例中，所述重链可变区的Η个互补决定区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸 序列分别如沈QIDNO. : 23、SEQIDNO. : 24 和沈QIDNO. : 25 所示。
[0015] 在另一优选例中，所述重链可变区的Η个互补决定区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸 序列分别如沈QIDNO. : 29、SEQIDNO. : 30 和沈QIDNO. : 31 所示。
[0016] 在另一优选例中，所述重链可变区的Η个互补决定区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸 序列分别如沈QIDNO. : 35、SEQIDNO. : 36 和沈QIDNO. : 37 所示。
[0017] 在另一优选例中，所述重链可变区具有沈QIDNO.:沈QIDNO. :2、6、10或12所 示的氨基酸序列。
[0018] 本发明的第二方面，提供了一种抗体重链，所述抗体重链具有如权利要求1所述 的抗体的重链可变区。
[0019] 在另一优选例中，所述抗体重链具有SEQIDNO. :42、43、44或45所示的氨基酸序 列。
[0020] 本发明的第Η方面，提供了一种抗体的轻链可变区，其特征在于，所述的轻链可变 区包括W下Η个互补决定区CDR;
[0021] (1)互补决定区CDR1'
[0022] 所述互补决定区CDR1' 选自；SEQIDNO. :20、沈QIDNO. :26、沈QIDNO. :32 和 沈QIDNO. : 38 ;
[0023] (2)互补决定区CDR2'
[0024]所述互补决定区CDR2' 选自；SEQIDNO. :21、沈QIDNO. :27、沈QIDNO. :33 和 沈QIDNO. : 39 ;
[00巧](3)互补决定区CDR3'
[0026]所述互补决定区CDR3' 选自；SEQIDNO. :22、沈QIDNO. :28、沈QIDNO. :：34 和 沈QIDNO. : 40。
[0027] 在另一优选例中，所述轻链可变区的Η个互补决定区CDR1'、CDR2'、CDR3'的氨基 酸序列分别如沈QIDNO. : 20、SEQIDNO. : 21和沈QIDNO. : 22所示。
[0028] 在另一优选例中，所述轻链可变区的Η个互补决定区CDR1'、CDR2'、CDR3'的氨基 酸序列分别如沈QIDNO. : 26、SEQIDNO. : 27和沈QIDNO. : 28所示。
[0029]在另一优选例中，所述轻链可变区的Η个互补决定区CDR1'、CDR2'、CDR3'的氨基 酸序列分别如沈QIDNO. : 32、SEQIDNO. : 33和沈QIDNO. : 34所示。
[0030]在另一优选例中，所述轻链可变区的Η个互补决定区CDR1'、CDR2'、CDR3'的氨基 酸序列分别如沈QIDNO. : 38、SEQIDNO. : 39和沈QIDNO. : 40所示。
[0031] 在另一优选例中，所述轻链可变区具有SEQIDNO. :4、8、12或16所示的氨基酸序 列。
[0032] 本发明的第四方面，提供了一种抗体的轻链，所述的轻链具有如权利要求3所述 的抗体的轻链可变区。
[0033] 在另一优选例中，所述抗体轻链具有SEQIDNO. :46、47、48或49所示的氨基酸序 列。
[0034] 在另一优选例中，所述重链的恒定区和/或所述轻链的恒定区是人源的。
[0035] 本发明的第五方面，提供了一种特异性结合肥R3的单克隆抗体，其特征在于，所 述单克隆抗体具有W下特性：
[0036] (1)与肥R3蛋白亲和力常数Μ> 1X10";
[0037] 似结合肥R3胞外区的DI或Dili结构域。
[0038] 在另一优选例中，所述单克隆抗体抑制肥R3与其配体化regulin结合的ICs。值 《3nM。
[0039] 在另一优选例中，所述单克隆抗体与肥R3的结合位点包括选自下组的一个或多 个位点：第125位的丝氨酸、第150位天冬氨酸、151位精氨酸和第467位组氨酸。
[0040] 在另一优选例中，所述单克隆抗体具有：
[0041] (1)如权利要求1所述的重链可变区；和/或
[0042] 似如权利要求3所述的轻链可变区。
[0043] 在另一优选例中，所述单克隆抗体具有：
[0044] (1)如权利要求2所述的重链；和/或
[0045] 似如权利要求4所述的轻链。
[0046] 在另一优选例中，所述单克隆抗体包括：单链抗体、双链抗体、嵌合抗体（如人鼠 嵌合抗体）、鼠源抗体、人源化抗体或其组合。
[0047] 在另一优选例中，所述的单克隆抗体，为IgG(IgGl)型抗体。
[0048] 本发明的第六方面，提供了一种重组蛋白，所述的重组蛋白具有：
[0049](i)如权利要求1所述的抗体的重链可变区、如权利要求2所述的抗体重链、如权 利要求3所述的抗体的轻链可变区、如权利要求4所述的抗体轻链、或如权利要求5所述的 单克隆抗体；W及
[0050](ii)任选的协助表达和/或纯化的标签序列。
[005。 在另一优选例中，所述的标签序列包括細is标签。
[0052] 在另一优选例中，所述的重组蛋白特异性抗肥R3。
[0053] 在另一优选例中，所述的重组蛋白选自下组：
[0054] (a)具有SEQIDNO. :42-49所示的氨基酸序列的多肤；
[00巧]化）将（a)中的氨基酸序列经过一个或多个（如1-20个）氨基酸残基的取代、缺 失或添加而形成的、由（a)衍生的且特异性抗肥R3的多肤。
[0056] 本发明的第走方面，提供了一种免疫偶联物，该免疫偶联物含有：
[0057] (a)载体部分，所述载体部分含有如权利要求1所述的抗体的重链可变区、如权利 要求2所述的抗体重链、如权利要求3所述的抗体的轻链可变区、如权利要求4所述的抗体 轻链、或如权利要求5所述的单克隆抗体或权利要求7所述的重组蛋白；和
[0058] 化）选自下组的偶联部分；可检测标记物、药物、毒素、细胞因子、放射性核素、或 酶。
[0059] 在另一优选例中，所述偶联物选自；英光或发光标记物、放射性标记物、MRI(磁共 振成像）或CT(电子计算机X射线断层扫描技术）造影剂、或能够产生可检测产物的酶、放 射性核素、生物毒素、细胞因子（如IL-2等）、抗体、抗体化片段、抗体scFv片段、金纳米颗 粒/纳米棒、病毒颗粒、脂质体、纳米磁粒、前药激活酶（例如，DT-必肌黄酶值TD)或联苯 基水解酶-样蛋白质度?l))、化疗剂（例如，顺笛）或任何形式的纳米颗粒等。
[0060]本发明的第八方面，提供了一种多核巧酸，它编码选自下组的蛋白质：
[0061]如本发明第一方面所述的抗体的重链可变区、如本发明第二方面所述的抗体重 链、如本发明第Η方面所述的抗体的轻链可变区、如本发明第四方面所述的抗体轻链、或如 本发明第五方面所述的单克隆抗体或本发明第六方面所述的所述的重组蛋白。
[0062]在另一优选例中，所述的多核巧酸具有沈QIDNO. :1、3、5、7、9、11、13、15或50-57 所示的DM序列。
[0063]本发明的第九方面，提供了一种载体，它含有本发明第八方面所述的多核巧酸。
[0064]在另一优选例中，所述的载体包括；细菌质粒、瞻菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、 哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒、或其他载体。
[0065]本发明的第十方面，提供了一种遗传工程化的宿主细胞，它含有本发明第九方面 所述的载体或基因组中整合有本发明第八方面所述的多核巧酸。
[0066]本发明的第十一方面，提供了一种制备重组多肤的制备方法，该方法包含：
[0067] (a)在适合表达的条件下，培养本发明第十方面所述的宿主细胞；
[0068] 化）从培养物中分离出重组多肤，所述的重组多肤是本发明第五方面所述的所述 的单克隆抗体或本发明第六方面所述的所述的重组蛋白。
[0069]本发明的第十二方面，提供了一种药物组合物，所述组合物中含有：
[0070](i)如权利要求1所述的抗体的重链可变区、如权利要求2所述的抗体重链、如权 利要求3所述的抗体的轻链可变区、如权利要求4所述的抗体轻链、或如权利要求5所述的 单克隆抗体或权利要求7所述的重组蛋白；W及
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