选自人类和小鼠；优选人类。在一些具体的实施方 式中，受试者是人类;更具体地，是人类的器官、组织、细胞;优选人类肝癌细胞。
[0039] 需要注意的是，向受试者施用的miR-653或者含SEQ ID No.2所示的DNA载体的量， 是一种经过计算而得到的产生所需治疗作用的活性物质预先确定的量。针对本发明而言， 向受试者施用的miR-653或者含SEQ ID No.2所示的DNA的载体的量，是指能够统计学上显 著增强化疗药物诱导的肝癌细胞增殖抑制或凋亡而预先确定的量。基于受试者特征（比如 本领域熟知的年龄、性别、病史、并发症、遗传因素、其它疾病等）、疾病严重程度、载体性质 与施用途径等因素，普通医疗人员可以进一步调整向受试者施用miR-653或者编码SEQ ID No. 2所示的DNA的载体的量。
[0040] 本发明采集了经肝肿块切除手术获得的肝癌组织及非癌变肝脏组织进行了临床 验证，采用实时荧光定量PCR对miR-653的表达水平进行定量，结果表明miR-653的表达量在 非癌变组织中的水平显著高于癌变组织;此外，对188个肝癌病例中miR-653高表达组与低 表达组的患者的总体生存情况和肝癌无复发生存情况进行了分析比较，发现miR-653高表 达组的总体生存率和无复发生存率均显著优于miR-653低表达组。由此可见，miR-653可以 作为肝癌术后预后评估的一项有效的生物标志物，也进一步证实了本发明所述的试剂盒在 肝癌术后预后评估方面的有效性。
[0041] 在肝癌化疗增敏方面，本发明验证了基于miR-653的所述增敏剂能有效增强肝癌 细胞对化疗药物sorafenib的敏感性，说明本发明提供的增敏剂具有显著的化疗增敏效果。
【附图说明】
[0042] 图1是real time-PCR技术检测肝癌组织与对应癌旁组织中的miR-653的表达水平 的结果，其中：
[0043] A:miR-653在绝大多数肝癌组织中表达水平下调；
[0044] B:miR-653表达水平在未癌变肝脏组织和肝癌组织中的差异；
[0045] C和D:miR-653表达水平在未癌变肝脏组织和肝癌组织中的差异；
[0046] E:miR-653在非癌变肝脏组织、HL-7702非转化肝癌细胞和肝癌细胞中的表达差 异；
[0047] F和G:分别示意miR-653高低表达组中总体生存率和无复发生存率。从图中可以看 出，miR-653高表达组中患者具有较好的术后总体生存率与无复发生存率，即预后良好;而 miR-653低表达组中患者预后不及高表达组。
[0048]图2、miR-653作为肝癌化疗增敏剂的检测结果
[0049] 结果显示，miR-653可增强肝癌细胞对肝癌化疗药物sorafenib的敏感程度。A和B: 分别用流式细胞分析技术(A)和caspase-3蛋白酶活性测试技术(B)在HepG2、Huh-7和SMMC-7721三种不同的肝癌细胞中检测增强miR-653的表达对低浓度的 S〇rafenib(3yM)诱导肝癌 细胞凋亡程度的影响；C和D:在裸鼠的皮下分别移植对照HepG2肝癌细胞和miR-653过表达 HepG2细胞，构建肝癌细胞体内生长模型。不同组模型小鼠口服sorafenib(30mg/kg)，观察 移植肿瘤的生长情况(C);观察结束后，处死小鼠，解剖取肿瘤组织进行caspase-3活性测试 分析，检测在动物体内增强miR-653的表达对低剂量sorafenib诱导肝癌细胞凋亡程度的影 响。
【具体实施方式】
[0050]下面结合附图和具体实施例进一步详细说明本发明，但并不以此限制本发明的范 围。如无特殊说明，下述所采用的试剂与材料均可商购获得，所采用的方法均为常规操作。 [0051 ] 生物材料
[0052]实施例2中所使用的212例肝肿块切除手术的手术标本是经武汉大学人民医院医 学伦理委员会批准，搜集自武汉大学人民医院自2005年1月至2013年12月间收治的病例。 [0053]实施例4中使用的裸鼠/小鼠来自购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司。
[0054] 试剂与耗材
[0055]肝癌细胞系（HepG2、Hep3B、Huh-7、Bel7402和SMMC7721)、非转化肝细胞系（HL-7702)
[0056] pSicoR载体，购自优宝生物；
[0057] miRNA mimic和转染试剂riboFECTY? CP购自广州市锐博生物科技有限公司； [0058] 反转录荧光定量PCR方法检测miRNA的试剂盒为All-in-〇ne?qPCR Mix,购自 GeneCopoeia, Inc ·公司。
[0059] 实施例1、本发明所述肝癌术后预后评估试剂盒及其制备方法
[0060] 本实施例提供了用于肝癌术后预后评估的试剂盒。所述试剂盒具体包括用于PCR 扩增miR-653的cDNA的引物，其上下游序列如下：
[0061 ]上游引物：5 ' -GTGTTGAAACAATCTCTACTG-3 ' ；
[0062]下游引物：5 ' -GCGTTCGAACAGCTGCCT-3 '。
[0063 ]进一步地，所述试剂盒还包括RNA提取试剂、缓冲体系、反转录试剂、PCR扩增试剂。 [0064] 进一步地，本发明的试剂盒还包括miR-653的反转录引物，如Seq ID No.3所示。
[0065] 本实施例还提供上述试剂盒的制备方法，步骤为:组装所述试剂盒的试剂中包括 用于PCR扩增miR-653的cDNA的引物;和/或，在标有肝癌术后预后评估用途的商品包装内放 置用于PCR扩增miR-653的cDNA的引物;所述步骤还包括:组装所述试剂盒的试剂中还包括 RNA提取试剂、缓冲体系、反转录试剂、PCR扩增试剂;和/或，所述商品包装内还放置有RNA提 取试剂、缓冲体系、反转录试剂、PCR扩增试剂。
[0066] 上述miR-653的核苷酸序列如Seq ID No. 1所示。
[0067] 实施例2、肝癌术后预后评估试剂盒的临床验证
[0068] 经武汉大学人民医院医学伦理委员会批准，发明人对武汉大学人民医院自2005年 1月至2013年12月间收治的212例肝肿块切除手术的手术标本进行了研究。其中188例被诊 断为肝癌，获取的手术组织为肝癌组织(部分含对应的癌旁组织）。24例被诊断为肝血管瘤， 获取的组织(距血管瘤前缘2厘米以上)可以作为非癌变肝脏组织而作为研究对照。
[0069]利用实施例1所述的试剂盒，首先采用real time-PCR技术检测40例肝癌组织与对 应癌旁组织中的miR-653的表达水平。
[0070] 步骤如下：
[0071] (1)获取用于real time-PCR的模板：
[0072] 1)用Trizol 提取总 RNA
[0073] 2)依如下反应体系添加 poly(A)尾巴，混匀后于37摄氏度反应20分钟
[0074] 反应体系：总体积为20yL。其中总RNA 2yg，poly(A)聚合酶lyL(2.5个单位），10X poly(A)聚合酶缓冲液2yL，10XrATP溶液2yL，其余为不含DNA酶和RNA酶的双蒸水。
[0075] 3)依如下方法完成反转录，得到扩增模板
[0076]第一步:依如下反应体系配制RNA-反转录引物混合物，混匀并短暂离心后，置65摄 氏度孵育变性10分钟后，立即放冰上至少2分钟。
[0077]混合物总体积为13yL。其中poly(A)添加反应的反应产物2yL，反转录引物lyL(终 浓度0.02yM/L)，不含DNA酶和RNA酶的双蒸水10yL。
[0078] 其中miR-653的反转录引物序列如下：
[0079] 5'-GCGTT CGAACA GCTGC CTCGA GCTTA AGCCT AGGTT TTTTT TTTTT TTTTTTTTTT TTUnSeqIDNo.3K*。
[0080]第二步:依如下说明配置反转录反应体系，充分混匀并短暂离心后于42摄氏度孵 育反应60分钟，然后将反应体系至于85摄氏度孵育5分钟将反应体系灭活。所得单链的反转 录产物cDNA可以放置于-20摄氏度保存。
[0081 ]反转录反应体系共25yL。其中RNA-反转录引物混合物共13yL，5X反转录缓冲溶液 5yL，25mM dNTP lyL，RNA酶抑制剂（25单位AxL) lyL，反转录酶（200单位/VL) lyL，不含DNA酶 和RNA酶的双蒸水4yL。
[0082] (2)real time-PCR的引物序列如下：
[0083] 上游引物：5'-GTGTTGAAACAATCTCTACTG-3'（Seq ID Νο·5);
[0084] 下游引物：5'-GCGTTCGAACAGCTGCCT-3'（Seq ID Νο·6)
[0085] 扩增的目的片段序列为：
[0086] 5'-GTGTTGAAACAATCTCTACTGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAACCTAGGCTT
[0087] AAGCTCGAGGCAGCTGTTCGAACGC-3'(Seq ID No.4)
[0088] (3)所述PCR扩增的反应体系如下
[0089] PCR扩增反应体系为20yL。其中2XAllin0ne? q