组成的多核 苷酸具有至少98 %同源性的多核苷酸编码得到的多肽;或(c )、由SEQ ID No. 1所示的核苷 酸序列组成的多核苷酸，其中一个或多个碱基被缺失、替代或增加得到的多核苷酸编码得 到的多肽。
[0042]具体的，柔性链接肽为：（a)、由SEQ ID No.2所示的核苷酸序列组成的多核苷酸编 码得到的多肽；（b)、与SEQ ID No. 2所示的核苷酸序列组成的多核苷酸具有至少98%同源 性的多核苷酸编码得到的多肽;或(C )、由SEQ ID No. 2所示的核苷酸序列组成的多核苷酸， 其中一个或多个碱基被缺失、替代或增加得到的多核苷酸编码得到的多肽。
[0043] GST标签为由SEQ ID No.3所示的核苷酸序列组成的多核苷酸编码得到的多肽。
[0044] 由于蛋白编码序列的多态性及变异，天然存在的蛋白质会出现基因突变，编码序 列中碱基被缺失、替代或增加，或氨基酸的缺失、插入、取代或其它变异，从而导致蛋白质的 氨基酸序列出现一个或多个氨基酸被缺失、替代或增加。因此，存在着一些生理和生物活性 上基本等同于无变异蛋白质的蛋白。这些结构不同于相应的蛋白质，但与该蛋白质没有明 显的功能差异的多肽或蛋白称为功能等同变异体。
[0045] 功能等同的变异体同样适用于通过缺失、插入和突变等人工手段改变一个或多个 密码子，从而向一种蛋白质的氨基酸序列中导入这类变异而制成的多肽。尽管这样能获得 更多不同形式的变异体，但所得的变异体作为功能等同变异体的前提是其生理活性基本等 同于原始无变异蛋白质的活性。
[0046] -般的，功能等同变异体的编码序列是同源的，因此，由至少一种改变(如蛋白质 的编码序列中一个或多个碱基的缺失、插入或取代或者蛋白质的氨基酸序列中有一个或多 个氨基酸缺失、插入或取代)所得的多肽或蛋白一般具有功能上等同于所述蛋白质的活性， 因此，由上述核苷酸序列编码的到的蛋白或上述氨基酸序列组成的多肽，如果大肠杆菌周 质蛋白没有明显的功能差异，也包括在本发明的范围内。
[0047] 这种TP重组抗原通过引入有助于可溶性表达的柔性链接肽对TPN15-TPN17-TPN47 嵌合表达多肽进行修饰，相对于传统的TP抗原，这种TP重组抗原的蛋白活性较好。
[0048] 这种TP重组抗原可以应用于制备梅毒检测试剂领域或制备梅毒检测设备领域。
[0049] 如图1所示的上述的TP重组抗原的制备方法，包括如下步骤：
[0050] Sl 0、提供基因表达载体。
[0051] 基因表达载体用于表达TP重组抗原，TP重组抗原包括嵌合表达多肽以及有助于可 溶性表达的柔性链接肽，嵌合表达多肽为TPN15-TPN17-TPN47嵌合表达多肽。
[0052]优选的，这种TP重组抗原作为标记抗原时还包括GST标签，GST标签、嵌合表达多肽 以及柔性链接肽依次连接。
[0053] 具体的，TPN15-TPN17-TPN47嵌合表达抗原为：（a)、由SEQ ID No.l所示的核苷酸 序列组成的多核苷酸编码得到的多肽；（b)、与SEQ ID No.1所示的核苷酸序列组成的多核 苷酸具有至少98 %同源性的多核苷酸编码得到的多肽;或(c )、由SEQ ID No. 1所示的核苷 酸序列组成的多核苷酸，其中一个或多个碱基被缺失、替代或增加得到的多核苷酸编码得 到的多肽。
[0054]具体的，柔性链接肽为：（a)、由SEQ ID No.2所示的核苷酸序列组成的多核苷酸编 码得到的多肽；（b)、与SEQ ID No. 2所示的核苷酸序列组成的多核苷酸具有至少98%同源 性的多核苷酸编码得到的多肽;或(c )、由SEQ ID No. 2所示的核苷酸序列组成的多核苷酸， 其中一个或多个碱基被缺失、替代或增加得到的多核苷酸编码得到的多肽。
[0055] -般的，基因表达载体的构建过程可以为:选取一段辅助蛋白的基因片段，设计引 物，引物上带有酶切位点，PCR扩增辅助蛋白基因片段，连接到用相应酶切处理后的表达载 体中，得到重组质粒。选取一段梅毒检测抗原的基因片段，设计引物，引物上带有酶切位点， PCR扩增梅毒检测抗原基因片段，连入到用相应酶切好的重组质粒中，得到可表达融合蛋白 的基因表达载体。
[0056] 基因表达载体可以选择双顺反子表达的质粒，例如，pET_24a (Novagen公司，货号： 69864-3)、pET-30a，等。其中，柔性链接肽的表达序列作为第二顺反子。
[0057] S20、将S10得到的基因表达载体转化到宿主细胞中。
[0058]宿主细胞可以为原核细胞，例如:大肠杆菌。
[0059] -般的，基因表达载体转化操作参见试剂盒生产厂家推荐的方法实现，宿主细胞 为感受态细胞，例如大肠杆菌感受态细胞，将构建好的基因表达载体加入感受态细胞，热激 处理，使感受态细胞的细胞膜结构扰动，细胞膜上出现空隙以便基因表达载体进入细胞，之 后恒温培养，使宿主细胞复苏。
[0060] 一般的，基因表达载体转化到宿主细胞后，还需要对转化后的宿主细胞进行抗性 筛选，如在培养基中加入氨苄西林钠或卡那霉素。
[0061] S30、对S20得到的转化了基因表达载体的宿主细胞进行诱导表达，分离得到表达 液。
[0062] S40、对S30得到的表达液中进行饱和硫酸铵梯度分析，确定沉杂蛋白和沉目的蛋 白的硫酸铵浓度，加入相应的沉杂的硫酸铵终浓度，充分静止后收集上清，接着在上清中加 入饱和硫酸铵沉目的蛋白的终浓度，充分静止后收集沉淀，将沉淀重新溶解，得到粗产物。 [0063] S40中还包括向表达液中加入吐温20或TritonX-IOO的操作。吐温20或TritonX- 100的质量百分浓度为0.1 %~0.3 %。优选的，吐温20或TritonX-IOO的质量百分浓度为 0.15%〇
[0064]原核表达的TP重组抗原中往往含有较多的聚体结构，在纯化过程中加入一定量的 吐温20或TritonX-IOO较好的解决了该问题。
[0065] S50、利用亲和柱纯化S40得到的粗产物，再进行亲和柱及离子交换纯化，得到TP重 组抗原。
[0066] 一实施方式的梅毒检测试剂，含有上述的TP重组抗原的溶液。
[0067] TP重组抗原的溶液中含有吐温20或TritonX-IOO。吐温20或TritonX-IOO的质量百 分浓度为〇. 1 %~〇. 3%。优选的，吐温20或TritonX-IOO的质量百分浓度为0.15%。
[0068] 原核表达的TP重组抗原中往往含有较多的聚体结构，在使用过程中加入一定量的 吐温20或TritonX-IOO较好的解决了该问题。
[0069] -实施方式的梅毒检测试纸，包括包被抗原、标记抗原、GST单克隆抗体及标记物。
[0070] 标记抗原包括依次连接的GST标签、嵌合表达多肽以及有助于可溶性表达的柔性 链接肽，嵌合表达多肽为TPN15-TPN17-TPN47嵌合表达多肽。
[0071] 包被抗原包括依次连接的上述嵌合表达多肽以及上述柔性链接肽；
[0072] 标记物通过抗GST单克隆抗体与标记抗原间接结合。
[0073]嵌合表达多肽以及柔性链接肽的序列前文已经给出，在此不在赘述。
[0074] 优选的，标记物可以为胶体金、胶体硒、胶体银或乳胶等较大的纳米颗粒。
[0075] -实施方式的梅毒检测试剂盒，包括上述的梅毒检测试剂，或者包括上述的梅毒 检测试纸。
[0076] 具体的，如图2、图3和图4所示的一实施方式的梅毒检测试剂盒，包括梅毒检测试 纸100、壳体200以及其他检测试剂。
[0077] 梅毒检测试纸100包括支撑薄片110、样品垫120、金标垫130、硝酸纤维素膜140、吸 收垫150、检测线160及质控线170。样品垫120、金标垫130、硝酸纤维素膜140及吸收垫150从 支撑薄片110的一端向另一端依次设置在支撑薄片110上。样品垫120与金标垫130部分重 叠，金标垫130与硝酸纤维素膜140部分重叠，硝酸纤维素膜140与吸收垫150部分重叠。检测 线160及质控线170设在硝酸纤维素膜上，且检测线160设在靠近金标垫130的一端，质控线 170设在靠近吸收垫150的一端。支撑薄片110采用不吸水的材料制作。样品垫120用于样品 点样。抗GST单克隆单体包附胶体金颗粒并与标记抗原偶联后均匀涂覆在金标垫130上。包 被抗原包被在硝酸纤维素膜140上。
[0078] 标记抗原包括依次连接的GST标签、嵌合表达多肽以及有助于可溶性表达的柔性 链接肽，嵌合表达多肽为TPN15-TPN17-TPN47嵌合表达多肽。包被抗原包括依次连接的上述 嵌合表达多肽以及上述柔性链接肽。检测线160为亲和纯化的抗梅毒抗原，质控线170为羊 抗鼠 IgG抗体。
[0079]本实施方式中，金标垫130上的标记物为胶体金，可以理解，在其他实施方式中，标 记物还可以为胶体硒、胶体银或乳胶等较大的纳米颗粒。本实施方式中，所用到的抗梅毒抗 原为梅毒螺旋体抗原。
[0080] 结合图4,检测试纸100可置于检测试剂盒的壳体200内。壳体200上开设有加样孔 210及观察窗220。加样孔210对应样品垫120的位置。检测线160及质控线170裸露于观察窗 220中，方便观察。
[0081 ]其他检测试剂可以根据需要直接在实验室制备。
[0082]上述检测试剂盒利用双抗原夹心法来检测被检材料中的是否含有