无定形莱特莫韦及其用于口服施用的固体药物制剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明的技术领域是药物化学/盖伦制剂。本发明设及用于口服施用的无定形化 合物莱特莫韦化etermovir)的新型稳定盖伦制剂。所述制剂适合作为口服施用的药物用于 病毒疾病、特别是人类巨细胞病毒（下文称为HCMV)感染的治疗方法中。本发明还设及用于 分离呈无定形状态的作为活性药物成分(下文称为API)的莱特莫韦的方法。特别地，本发明 设及在粒度分布、比表面积和有毒杂质含量方面具有有利的物理化学性质的无定形莱特莫 韦，运使得所述化合物可随时配制成用于口服施用的固体药物制剂。
【背景技术】
[0002] 众所周知，呈无定形状态的API在制药工业中表现出在其分离和盖伦制剂期间必 须面对的问题。特别是已知W不同盐形式存在的两性离子化合物如莱特莫韦在合成和盖伦 制剂期间面临许多挑战。
[0003] 已知莱特莫韦是一种用于处理HCMV感染的高活性药物并且被广泛描述在Lis油ka 等，新型抗巨细胞病毒化合物莱特莫韦的体外和体内活性（In Vitro and In Vivo Activities of the Novel Anticytomegalovirus Compound Letermovir) .八111:;[111；[。1'013.4旨6]118化61]1〇1:1161'.2010,54:第1290-1297页；和1(日111等，用新型抗〔1￥化合物 莱特莫韦成功治疗耐多药巨细胞病毒疾病的第一份报告（First report of successful treatment of multidrug-resistant cytomegalovirus disease with the novel anti- CMV compound Letermovir).Am.J.Transplant.2011,11:1079-1084;W及Marschall等，新 型抗巨细胞病毒化合物莱特莫韦对瘤疹病毒和其它人类致病病毒的活性的体外评估（In Vitro Evaluation of the Activities of the Novel Anticytomegalovirus Compound Letermovir against Herpesviruses and Other Human Pathogenic Viruses) .Antimicrob.Agents Chemother.2012,56:1135-1137中。
[0004] HCMV是属于被称为瘤疹病毒的病毒科的病毒物种。它通常缩写为HCMV并且可选地 称为人类瘤疹病毒-5化HV-5)。在瘤疹病毒中，HCMV属于β瘤疹病毒(Betaherpesvirinae)亚 科，它还包括来自其他哺乳动物的巨细胞病毒。
[000引虽然它们可存在于整个身体内，但HCMV感染通常与唾液腺相关。HCMV感染在健康 人中通常被忽视，但对于免疫受损的受试者如HIV感染者、器官移植受者或新生儿来说可能 是危及生命的。特别是，HCMV仍是出生缺陷的主要病毒原因和在移植受者中威胁生命的疾 病。
[0006]目前批准的抗HCMV药物祀向病毒DNA聚合酶PUL54。已知的化合物更昔洛韦 (Ganciclovir, GCV)充当核巧类似物。其抗病毒活性需要通过HCMV蛋白激酶PUL97进行憐酸 化。在运方面，作为核巧酸类似物的昔多韦（Cidovir，CDV)已经被憐酸化并且因此具有活 性。麟甲酸(Foscarnet，F0S)具有不同的作用模式。它通过阻断PUL54的焦憐酸盐结合位点 来直接抑制聚合酶功能。然而，已知上述药物与毒性和耐药性的出现相关。此外，它的生物 利用度仍然可改进。
[0007]已经尝试通过合成和评估苯并咪挫核糖核巧来开发活性更大、毒性更小的口服 HCMV抗病毒药物，其伴有新的作用模式。运类药物显示出针对HCMV的高活性并祀向病毒末 端酶复合物。然而，事实证明，运类化合物在代谢上不稳定。
[000引此外，已经描述了对苯并咪挫核糖核巧耐药的HCMV，其中耐药性已被映射至病毒 开放阅读框(下文称为0RF)UL89和化56(参见Krosky等，人类巨细胞病毒对苯并咪挫核糖核 巧的耐药性-映射到两个开放阅读框：UL89和UL56(Resistance of Human Cytomegalovirus to Benzimidazole Ribonucleosides-Maps to Two Open Reading 化ames:UL89 and UL56),Journal of Virology ,1998,第4721-4728页；和Evers等，苯并咪 挫核巧对人类巨细胞病毒复制的抑制设及Ξ种不同的机制（Inhibition of Human Cytomegalovirus Replication by Benzimidazole Nucleosides Involves Three Distinct Mechanisms).Antimicrobial Agents and Chemotherapy,2004,第3918-3927 页)。
[0009] BAY 38-4766是HCMV复制的另一种有效的和选择性的抑制剂并且是新型非核巧类 抗HCMV药物苯二胺横酷胺的代表。它还祀向病毒末端酶复合物。BAY 38-4766阻止高分子量 病毒DNA多联体切割成单体基因组长度。然而，运类化合物的开发已经停止了。
[0010] 此外，已经描述了化合物耐药的HCMV，其尤其在病毒0RF UL56和UL89中含有突变 (参见Buerger等，新型非核巧抑制剂通过化89和化56基因产物特异性祀向巨细胞病毒DNA 突变（A Novel Non-nucleoside Inhibitor Specifically Targets Cytomegalovirus DNA Maturation via the UL89 and UL56 Gene Products)Journal of Virology,2001, 第9077-9086页）。
[0011] 开发改进的抗HCMV药物的其他尝试导致鉴定到小分子量化合物Bay 82-3286和3， 4-二氨哇挫嘟如莱特莫韦。
[0012]
[0013] 相比于上述化合物，作为莱特莫韦的3,4-二氨哇挫嘟阻断病毒复制而不抑制后代 HCMV DNA或病毒蛋白的合成。实际上，据显示，莱特莫韦经由设及病毒末端酶的作用模式起 作用。然而，其与病毒末端酶复合物的相互作用模式和其化学结构不同于已知祀向HCMV末 端酶复合物的所有其他目前为止已表征的药物(包括抓CRB和BAY 38-4766)。虽然描述了所 有已公布的切割/包装抑制剂(包括抓CRB和BAY38-4766)针对晒齿动物巨细胞病毒的抗病 毒活性，但莱特莫韦仅针对人类巨细胞病毒有活性并且因此具有作为特异性人类抗HCMV药 物的高潜力。
[0014] 莱特莫韦的确切化学名称是(S)-{8-氣-2-[4-(3-甲氧基苯基)-1-赃嗦基]-3-[2- 甲氧基-5-(Ξ氣甲基)苯基]-3,4-二氨-4-哇挫嘟基}乙酸，其具有如下所示的式(I)
[0015]
[0016] 莱特莫韦的合成被公开在US 2007/0191387 Al，示例性实施方式14和15,第40页 和第41页，第[0495]段至第[0505]段。莱特莫韦表现出优异的体外和体内抗HCMV活性并且 已经完成临床1扣期试验。
[0017] US 2007/0191387 A1未提及莱特莫韦在粒度分布、比表面积和药学上可接受的杂 质含量方面的特定物理化学性质，所述性质使其适合于可口服施用的固体盖伦制剂。
[0018] 莱特莫韦的制备被描述在W0 2006/133822;实施例11中。
[0019] W0 2006/133822未提及莱特莫韦在粒度分布、比表面积和药学上可接受的杂质含 量方面的特定物理化学性质，所述性质使其适合于可口服施用的固体盖伦制剂。
[0020] W0 2013/127971 A1描述了莱特莫韦的钢盐和巧盐及其溶剂化物，W及其作为抗 病毒剂的用途。W0 2013/127971 A1未提及莱特莫韦在粒度分布、比表面积和药学上可接受 的杂质含量方面的特定物理化学性质，所述性质使其适合于可口服施用的固体盖伦制剂。
[0021] 莱特莫韦经由特定抗病毒机制抑制HCMV复制，所述抗病毒机制设及病毒末端酶亚 基，但不同于也已知祀向运种酶复合物的其他化合物类别的抗病毒机制（参见Goldner等， 新型抗巨细胞病毒化合物AIC246(莱特莫韦)经由设及病毒末端酶的特定抗病毒机制抑制 人类巨细胞病毒复制（The Novel Antixytomegalovirus Compound AIC246(Lete;rmovi;r) Inhibits Human Cytomegalovirus Replication through a Specific Antiviral Mechanism That Involves the Viral Terminase)Journal of Virology,2011,第 10884-10893页）。
[0022] 然而，两性离子莱特莫韦带有在药物化学领域中存在挑战的化学性质。据此，呈两 性离子形式的分离的莱特莫韦可W保持在无定形状态，而呈酸性和碱性盐形式的莱特莫韦 可在有限数目的抗衡离子下结晶（也参见德国专利申请10 2012 101 673.9;德国专利申请 10 2012 101 659.3)〇
[0023] 迄今为止使API莱特莫韦可再现地W两性离子形式结晶并且保持其W稳定的多晶 型物形式结晶的尝试已经失败。因此，莱特莫韦必须W其无定形状态通过足够的产率和纯 度分离，同时保持其物理化学性质，运使得能够在用于口服施用的片剂/胶囊制剂中实现足 够的溶出特性。
[0024] 在运方面，本领域中仅已知莱特莫韦的溶液制剂。然而，用于可静脉内施用的制剂 的无定形莱特莫韦只有通过添加过量精氨酸或赖氨酸或者添加环糊精与氨氧化钢的组合 才能完全溶解在水(含和不含乙醇）中。
[0025] 本发明的目的是获得适于口服施用的呈无定形状态的莱特莫韦的快速溶出固体 剂型如片剂和/或胶囊。在上下文中，本发明的另一个目的是获得具有足够生物利用度的用 于口服施用的固体无定形API莱特莫韦的口服剂型。
[0026] 然而，通过使用喷雾和高剪切造粒两者对莱特莫韦和过量精氨酸的水溶液进行湿 式造粒不会产生用于立即释放(下文称为IR)的表现出充分溶出的片剂/胶囊。特别是，在大 多数有机溶剂(包括低级醇）的情况下，在莱特莫韦W纯API形式分离、纯度和/或化学稳定 性不足的方面遇到问题。因此，与预期相反，通过添加精氨酸制造静脉内制剂的方法不可转 移至莱特莫韦的片剂/胶囊制剂。如实施例1中所示，精氨酸对固体剂型中的莱特莫韦的溶 出特性没有正面影响。
[0027] 本发明人进行的溶解度研究也证实了无定形莱特莫韦的成问题的溶解度曲线，因 为如实施例2中所示，在1至7.5的pH范围内的莱特莫韦溶解度从0.4mg/ml变为〉Img/ml。
【发明内容】
[0028] 令人惊讶和出乎意料的是，本发明提供呈无定形状态的纯API莱特莫韦，其足W进 一步加工成用于口服施用的固体药物制剂。当使用欧洲药典方法2.9.3、装置2,在50巧m的 奖叶速度下在37.0°C±0.5°C下在1000ml 0.1N HC1/0.2%月桂基硫酸钢介质中测试并通 过反相HPLC在时间点30分钟如下测量溶出时，本文提供的固体药物制剂能够实现颗粒状制 剂中的无定形莱特莫韦在30分钟内溶出度巧0 %的溶出特性：
[0029] HPLC操作条件： 杆； Wa化rs Symmetry Nucieosil 100 CT8, 40 mm X '4.0 '班姐，IQ μ??
[0030] 检测波长: 256 nm 大致运行时间； 4分钟 大致保留时间： 1J分钟 柱温度： 40 "C
[0031 ] 注射体积： 20 μ L. 流速： l.5mi/min 流动相： 缓冲液阳4,0化騰；35/4:5 v/v。
[0032] 因此，基于所述改进的溶出特性可预期高程度的口服生物利用度。
[0033] 在第一主要方面，本发明人发现，无定形莱特莫韦可W通过如下有利地分离：
[0034] i)将在挥发性有机溶剂、优选地丙醇中的无定形莱特莫韦的溶液滚筒干燥，或
[0035] ii)使所述无定形莱特莫韦从水混溶性溶剂(优选地丙酬或乙腊)沉淀至作为反溶 剂的过量水中。
[0036] 原则上，还可W通过使在有机溶剂中的溶液喷雾干燥或蒸发来分离无定形化合物 如莱特莫韦，但在莱特莫韦的情况下，由于留在无定形API莱特莫韦中的大量残余溶剂，产 率和/或纯度不足。
[0037] 在第二主要方面，本发明人发现两种优选的制造方法，即在滚筒干燥器上分离的 莱特莫韦的情况下，优选使用湿式造粒加工API,并且在沉淀的莱特莫韦的情况下，优选使 用干式造粒加工API。
[0038] 两种方法都能够实现无定形莱特莫韦作为API的可再现的盖伦制剂的制造，当使 用欧洲药典方法2.9.3、装置2，在50巧m的奖叶速度下在37.0°C ± 0.5°C下在1000ml 0.1N HC1/0.2 %月桂基硫酸钢介质中测试并通过反相HPLC在时间点30分钟如下测量溶出时，所 述制剂表现出造粒制剂中的莱特莫韦30分钟内溶出度巧0 %的溶出特性：
[0039] HPLC操作条件：
[0040] 怯： Waters Symmetry Niicleosi 1100 C] 8，40 mm X 4.0 mm， 10 μη'ι 检测波长： 256 nm 大致运行时间： 4分钟 大致保留时间； 1.3分钟
[0041] 按溫度； 4〇υ 注射体积: 20 μL 流速： 1.5 ml/inin 流动相缓冲渡烘4.贷化膳；：55/45 v/v。
【具体实施方式】
[0042] 本发明设及无定形API莱特莫韦的改进分离和其用于口服施用的具有足够溶出特 性的化学稳定的盖伦制剂。此外，本发明设及含有固体无定形API莱特莫韦或其药学上可接 受的盐、溶剂化物或水合物并表现出足够生物利用度的口服剂型如片剂或胶囊。此外，本发 明设及可口服施用的固体无定形API莱特莫韦或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物 的药物制剂，其用于病毒疾病的治疗方法中，特别是用于HCMV感染的治疗方法中。
[0043] 关于本发明的上下文，基于无定形莱特莫韦的适当的盖伦制剂所面对的问题反映 在：
[0044] a)不可避免地从有机溶剂中的溶液中分离出来W获得纯形式的无定形莱特莫韦， 其表现出足W制备口服制剂的物理化学性质，和
[004引b)提供保持莱特莫韦呈无定形状态并且能够实现IR片剂或胶囊造粒的适当的盖 伦制剂。
[0046] 关于上述项目a),图12示出莱特莫韦的优选合成路线的反应方案。其中，步骤4)- 溶剂切换之前左下方的星号指示依据本发明起始分离的步骤。
[0047] 在运方面，本发明提供本发明潜在的上述问题的解决方案，即
[0048] a)提供适当的分离技术W获得呈纯净、化学稳定和无定形状态的莱特莫韦
[0049] b)提供无定形莱特莫韦的适当的片剂/胶囊制造方法，其使得在IR片剂/胶囊剂型 中实现足够的溶出特性，即在30分钟内莱特莫韦溶出度巧0 %。
[0050] 令人惊讶和出乎意料的是，本发明提供化学稳定的、可口服施用的莱特莫韦或其 药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的固体药物制剂，其特征在于造粒制剂中的无定形 莱特莫韦在30分钟内溶出度巧0%。
[0051] 此外，令人惊讶和出乎意料的是，本发明提供化学稳定的、可口服施用的莱特莫韦 或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的固体药物制剂，其特征在于造粒制剂中的无 定形API莱特莫韦的绝对生物利用度(F)为30%至95%，优选地50%至95%，更优选地60% 至 95%。
[0052] 在另一个方面，令人惊讶和出乎意料的是，本发明提供化学稳定的、可口服施用的 莱特莫韦或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的固体药物制剂，其特征在于造粒制 剂中的无定形API莱特莫韦的绝对生物利用度(F)为>30%，优选地>40%，更优选地巧0%， 甚至更优选地>70 %，甚至更优选地>80 %，并且最优选地>90 %。
[0053] 对于使药剂也W 口服使用的适用剂型如片剂或胶囊形式维持其活性来说，化学稳 定性是至关重要的。本领域技术人员认识到，除了其制剂本身的组成、其混合物、其制造方 法和其本身的储存条件之外，API的化学稳定性尤其取决于其分离方法。在运方面，公知常 识是，由于例如与储存溫度、储存相对湿度和储存持续时间相关的增加，杂质可能从API如 莱特莫韦降解。
[0054] 因此，在本发明的第一主要方面，莱特莫韦W足够产率和纯度从有机溶剂溶液中 分离出来并且莱特莫韦保持稳定在其无定形状态，所述状态具有保守的物理化学性质W能 够实现提供足够溶出特性、即无定形莱特莫韦在30分钟内溶出度巧0%的口服片剂/胶囊制 剂。
[0055] 根据本发明，在最终化学合成步骤中，通过相应甲醋的皂化来制备莱特莫韦，其通 过使用（2S，3S)-( + )-二-0-4-甲苯酷基-D-酒石酸结晶而用于分离两种对映异构体。通过从 甲基-叔下基-酸(下文称为MTBE)溶液中用碳酸氨盐水溶液萃取来除去手性酸，并且使用在 两相混合物中的水性氨氧化钢来皂化莱特莫韦的甲醋。
[0056] 在皂化后，可在中性抑下将两性离子形式萃取到MTBE中。最后，将溶剂切换为丙酬 并且可通过使用W下任一种来分离无定形API莱特莫韦：
[0057] i)滚筒干燥器，或
[0058] ii)通过将无定形API莱特莫韦的丙酬或乙腊溶液沉淀至过量的揽拌水中，随后在 锥形干燥器中在40-80°C的升高溫度下干燥。
[0059] 可选地，可W通过向无定形API莱特莫韦的乙腊或丙酬溶液中添加水作为反溶剂 来强制沉淀。该过程导致粘性物质，其必须被进一步加工W获得固体无定形API莱特莫韦， 所述莱特莫韦可W通过过滤分离。
[0060] 由于上述分离方法，莱特莫韦可W无定形状态、W化学和手性纯度在可接受的残 余溶剂限度下分离，从而表现出适于盖伦制剂而无需其他步骤如研磨或微粉化的物理化学 性质。
[0061 ] 所述物理化学性质包括：当对分离的莱特莫韦进行化unauer-Emmett-Teller (BET)比表面积(SSA)分析并同时应用W下示例性条件时，根据本发明获得的无定形莱特莫 韦的比表面积为至少Im^g:
[0062] 原理：在77K下氮气吸附；根据化unaue;r,Emmett和化lle;r(BET)的方法
[0063] 方法:根据USP<84於的体积测定方法(方法II)
[0064] 仪器：Tristar 3000AacPr邱 061 (Micromeritics)
[006引样品质量:约1.5-2.5g
[0066] 样品制备:在40°C下在真空下脱气2小时(最终真空<2.7化）
[0067] 压力范围p/pO :0.05-0.15(3个数据点）。
[0068] 所述物理化学性质还包括：当对本发明的分离的莱特莫韦进行粒度分布分析并同 时应用W下示例性条件时，粒度分布(PSD)中位值不超过1 Own:
[0069] 装置:Mastersizer 2000,具有干式分散
[0070] 程序：Fraunhofer;称入量：0.3-0.4g [00川巧慢时间：20秒
[0072] 背景时间：6秒
[0073] 遮蔽限度:0.5 %至6 %
[0074] 样品盘:微体积;具有球的小筛 [007引 进料速率:45-55 %
[0076] 分散压力：2.5己
[OOW]进行四次独立的分析并且必须将结果取平均值。
[0078] 所述物理化学性质还包括根据本发明的分离的莱特莫韦的药学上可接受的有毒 杂质含量，即：
[0079] i)当通过如下文带有数字12的特定实施方式中所详细阐述的静态顶空气相色谱 法测定时，异亚丙基丙酬的杂质含量</ = 31ppm
[0080] 和/或
[0081] ii)当通过具有W下操作条件的气相色谱法测定时，3-甲氧基苯胺的杂质含量< 20ppm，优选地< 15ppm，更优选地< 1 Oppm，甚至更优选地巧卵m，最优选地< 1.5ppm:
[008引化器 气相色谱仪，例如Agilent说撕 精 DB-1 :㈱m长度，0.巧mm内径，1 μιη膜厚度
[00削载气，流速 氮气，L7mL/miii，恒定流 分流比 1:5 注射器温度 15(TC
[0084]烘箱溫度程序 起始温度 70? 保温时间 5分钟 1.化热速率 8 K/min 1. 最终温度 120°C 保温时间 22分钟
[0085] 2. 化热速率 25 K/min 2.最终