作为端锚聚合酶抑制剂的吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-酮化合物的制作方法
【专利说明】作为端锅聚合酶抑制剂的化惦并[2,3-d]略惦-4-鋼化合物
[0001] Wnt信号传导触发Ξ种细胞内信号传导级联，其包括β-联蛋白介导的经典通路、非 经典平面细胞极性和Wnt/巧通路。进化上保守的经典Wnt信号传导通路调节许多细胞过程， 包括细胞增殖、分化、粘附和维持。当Wnt配体结合至细胞表面Frizzled和脂蛋白受体相关 蛋白化RP) 5/6共受体时，起始调节细胞内β-联蛋白水平的经典通路，其进而促进激酶GSK3 从APC/轴蛋白/GSK-3 (腺瘤性结肠息肉病蛋白（APC)、轴蛋白、糖原合酶激酶3α/β (GSK3)) 破坏复合物的置换。在Wnt结合存在的情况下(开启状态），Dishevelled(Wnt通路中的蛋白） 被活化，其进而，招募GSK3远离破坏复合物，导致细胞溶质β-联蛋白的累积，β-联蛋白易位 至核，与Τ-细胞因子/淋己样增强因子(TCF/LEF)家族转录因子的相互作用和经典Wnt通路 应答基因的转录。在Wnt配体不存在的情况下（关闭状态），细胞溶质β-联蛋白被组成型憐酸 化，且被祀向用于泛素化和由蛋白酶体降解。
[000引两种高度同源的人端错聚合酶同工型，端错聚合酶1和2(TNKS1和TNKS2)是聚 (ADP-核糖)聚合酶(PARP)酶家族的成员，其使用β NAD+作为底物催化蛋白的翻译后修饰W 便相继将ADP核糖部分添加至目标蛋白上(聚ADP-核糖基化(pa巧lation或parsylation))。 端错聚合酶类的蛋白底物之一为轴蛋白，0-联蛋白破坏复合物的浓度-限制性组分;聚ADP- 核糖基化标记轴蛋白用于降解且端错蛋白酶抑制导致轴蛋白稳定化、Wnt信号传导抑制和 0-联蛋白降解。
[0003] Wnt信号传导通路活化突变发现于宽范围的癌症中，且据信有助于肿瘤起始、维持 和/或进展。因此，端错聚合酶活性的抑制似乎是治疗癌症中有希望的方法，所述癌症诸如 结肠直肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌(包括Ξ阴性乳腺癌）、卵巢癌、成神经管细胞瘤、黑色素瘤、 肺癌(包括非小细胞肺癌）、膜腺癌、前列腺癌、成胶质细胞瘤、T-细胞淋己瘤、T-淋己母细胞 性淋己瘤、T-细胞急性淋己细胞性白血病(T-A化））、套细胞淋己瘤、多发性骨髓瘤、慢性粒 细胞白血病和急性粒细胞白血病。
[0004] 已经进行相当大的努力来鉴定抑制经典Wnt /β-联蛋白信号传导通路的药剂。 TNKS1和TNKS2抑制剂诸如W0 2013/117288是已知的。
[0005] 尽管存在W0 2013/117288,但需要发现具有TNKS1和TNKS2抑制活性的化合物。进 一步需要发现相比于其他PARP选择性抑制TNKS1和TNKS2的化合物。
[0006] 图1是8-甲基-2-[4-(喀晚-2-基甲基）赃嗦-1-基]-3,5,6,7-四氨化晚并[2,3-d] 喀晚-4-酬4-甲基苯横酸盐(实施例6的化合物）的代表性XRTO图。
[0007 ]本发明的一个方面是式I的化合物：
其中： Y是：
X 是-c出-、-c ( CH3 化-或-c (C此 CH3 ) Η-; ri是氨、径基或面素； R2是氨、面素、-CN、-C出、C的或-OC出； 或其药学上可接受的盐。
[0008]优选地，本发明的一个进一步方面提供式I的化合物，其中： Y是：
X 是-C出-、-C (CH3 化-或-C (C此 CH3) H-; R1是氨、径基或面素； R2是氨、面素、-CN、-C出、C的或-0C出； 或其药学上可接受的盐。
[0009 ]优选地，本发明的另一个方面提供式I的化合物，其中： Y是
X是-C也-、-C (C也化-或-C (C也C也）H-; R2是氨、面素、-CN、-C也、CF3或-0C也； 或其药学上可接受的盐。
[0010] 本发明的另一个优选方面提供式I的化合物，其中： Y是：
X是-C也-、-C (C也化-或-C (C也C也）H-; ri是氨、径基或面素； R2是氨、面素、-CN、-C也、CF3或-0C也； 或其药学上可接受的盐。
[0011] 本发明的一个优选方面是W下化合物： 8-甲基-2-[4-(喀晚-2-基甲基)赃嗦-1-基]-3,5,6,7-四氨化晚并[2,3-(1]喀晚-4-酬， 或其药学上可接受的盐； 8-甲基-2-[4-(l-喀晚-2-基乙基）赃嗦-1-基]-3,5,6,7-四氨化晚并[2,3-d]喀晚-4- 酬，或其药学上可接受的盐； 2-[4-[(4-氯喀晚-2-基）甲基]赃嗦-1-基]-8-甲基-3,5,6,7-四氨化晚并[2,3-(1]喀 晚-4-酬，或其药学上可接受的盐;或 2-[4-[(4-甲氧基喀晚-2-基）甲基]赃嗦-1-基]-8-甲基-3,5,6,7-四氨化晚并[2,3-d] 喀晚-4-酬，或其药学上可接受的盐。
[0012] 本发明的另一个优选方面是W下化合物： 2-[4-[(3-漠-2-化晚基）甲基]赃嗦-1-基]-8-甲基-3,5,6,7-四氨化晚并[2,3-(1]喀 晚-4-酬，或其药学上可接受的盐； 2-[4-[(3-氯-2-化晚基）甲基]赃嗦-1-基]-8-甲基-3,5,6,7-四氨化晚并[2,3-(1]喀 晚-4-酬，或其药学上可接受的盐； 2-[4-[(3-氣-2-化晚基）甲基]赃嗦-1-基]-8-甲基-3,5,6,7-四氨化晚并[2,3-(1]喀 晚-4-酬，或其药学上可接受的盐;或 2-[[4-(8-甲基-4-氧代-3,5,6,7-四氨化晚并[2,3-(1]喀晚-2-基)赃嗦-1-基]甲基]邮 晚-3-甲腊，或其药学上可接受的盐。
[0013] 本发明的一个进一步方面是药物组合物，所述药物组合物包含式I的化合物，或其 药学上可接受的盐，W及药学上可接受的载体。
[0014] 本发明的又一个进一步方面提供在有需要的癌症患者中抑制端错聚合酶1和2的 方法，其包括将治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐施用于所述患者。
[0015] 本发明的另一个方面提供治疗患者中的癌症的方法，所述癌症是结肠直肠癌、胃 癌、肝癌、乳腺癌、立阴性乳腺癌、卵巢癌、成神经管细胞瘤、黑色素瘤、肺癌、非小细胞肺癌、 膜腺癌、前列腺癌、成胶质细胞瘤、T-细胞淋己瘤、T-淋己母细胞性淋己瘤、T-细胞急性淋己 细胞性白血病(T-A化）、套细胞淋己瘤、多发性骨髓瘤、慢性粒细胞白血病或急性粒细胞白 血病，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的 ±h πττ. ο
[0016] 本发明的一个又进一步方面提供式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治 疗。
[0017] 本发明的另一个方面提供式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗癌症， 所述癌症是结肠直肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、Ξ阴性乳腺癌、卵巢癌、成神经管细胞瘤、黑色 素瘤、肺癌、非小细胞肺癌、膜腺癌、前列腺癌、成胶质细胞瘤、T-细胞淋己瘤、T-淋己母细胞 性淋己瘤、T-细胞急性淋己细胞性白血病(T-A化）、套细胞淋己瘤、多发性骨髓瘤、慢性粒细 胞白血病或急性粒细胞白血病。
[0018] 本发明的一个进一步方面提供式I的化合物或其药学上可接受的盐用于制备用于 治疗癌症的药物的用途，所述癌症是结肠直肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、Ξ阴性乳腺癌、卵巢 癌、成神经管细胞瘤、黑色素瘤、肺癌、非小细胞肺癌、膜腺癌、前列腺癌、成胶质细胞瘤、T- 细胞淋己瘤、T-淋己母细胞性淋己瘤、T-细胞急性淋己细胞性白血病(T-A化）、套细胞淋己 瘤、多发性骨髓瘤、慢性粒细胞白血病或急性粒细胞白血病。
[0019] 术语"患者"是指哺乳动物且"哺乳动物"包括但不限于人。
[0020] 术语"Ξ阴性乳腺癌"是指特征在于肿瘤样品对于雌激素受体巧R)、孕酬受体(PR) 和激素表皮生长因子受体2化邸2/neu)被测试为阴性的乳腺癌。
[0021] "治疗有效量"或"有效量"意指抑制癌症患者中的Wnt /β-联蛋白信号传导通路和 破坏患者中目标癌细胞或减缓或停滞癌症的进展所必需的化合物或其药学上可接受的盐， 或包含所述化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物的剂量。化合物或其药学上可接受 的盐的预期剂量为0.1至200 mg/患者/天范围内。预期优选剂量为1至175 mg/患者/天范围 内。预期最优选剂量为5至150 mg/患者/天范围内。治疗患者所需的精确剂量和治疗时间长 度由医生鉴于疾病的阶段和严重性W及个别患者的特定需要和反应来确定。尽管表示为基 于每天的剂量，但可调整给药方案W提供对患者更优的治疗益处并且控制和/或减轻不期 望的药代动力学效应。除了每天给药之外，每隔一天给药(Q2D);经五天时段每隔一天给药、 随后两天不给药(T.I.W.);或者每Ξ天(Q3D)可能适当。
[0022] 术语。治疗/处理（treatment )"、"治疗/处理（treat)"和。治疗/处理（treat ing)" 意指包括患者遭受的癌症的全方位介入，诸如活性化合物的施用W减轻至减缓或逆转一种 或多种症状并且延迟癌症的进展，即使实际上没有根除癌症。待治疗的患者为哺乳动物，特 别是人。
[0023] 优选地，使用药学上可接受的载体将本发明的化合物配制为药物组合物并通过多 种途径施用。优选地，此类组合物用于口服施用。此类药物组合物和制备它们的方法是本领 域众所周知的。参见例如REMINGTON: T肥 SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY (A. Gennaro,等人编辑，第19版，Mack Publishing Co., 1995)。在特定实施方案中，所述药物 组合物包含8-甲基-2-[4-(喀晚-2-基甲基）赃嗦-1-基]-5,6,7,8-四氨化晚并[2,3-(1]喀 晚-4(3H)-酬或其药学上可接受的盐连同药学上可接受的载体和任选其他治疗成分，特别 用于治疗特定癌症类型。
[0024] 本发明的化合物能够与许多无机和有机酸反应W形成药学上可接受的酸加成盐。 此类药学上可接受的盐和用于制备它们的常规方法是本领域众所周知的。参见例如，P. St址 1，等人，HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PRO阳RTIES, SELECTION AND USE, (VCHA/Wiley-VCH, 2002) ;S.M. Berge,等人，。化armaceutical Salts, '' Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 66, No. 1, January 1977。
[0025] 本发明的化合物，诸如实施例1，被命名为:8-甲基-2-[4-(喀晚-2-基甲基)赃嗦- 1-基]-5,6,7,8-四氨化晚并[2,3-d]喀晚-4(3H)-酬（IUPAC);并且也可W被命名为:化晚 并[2,3-d]喀晚-4(3H)-酬，5,6,7,8-四氨-8-甲基-2-[4-(2-喀晚基甲基）-1-赃嗦基]- (CAS);且其他名称也可W用来明确标识本发明的化合物。
[0026] 应当理解，式I的化合物被描述为单一立体异构体。具体定义的取代基可W产生手 性中屯、，其得到外消旋混合物或两种立体异构体。如本文所使用，除非另有指定，否则提及 特定化合物意指包括个别立体异构体和外消旋混合物，其包括命名化合物。可W使用对映 异构体纯的或富集的起始材料通过立体特异性合成制备特定的立体异构体。可W通过本领 域众戶片周知的技术（诸女日Stereochemistry of Organic Compounds，E. I. Eliel和S. H. Wilen(Wiley 1994)和Enantiomers , Racemates, and Resolutions , J., Jacques , A. Collet和S. H. Wilen(Wiley 1991)中找到的那些，包括手性固定相上的层析、酶促拆分或 分级结晶或为了该目的形成的非对映异构体(诸如非对映异构体盐)的层析拆分起始材料、 中间体或外消旋混合物的特定立体异构体。当手性化合物被分离或拆分成其异构体、但没 有确定绝对构象或旋光度时，异构体被任意地指定为异构体1和异构体2,其对应于各自从 手性层析洗脱的顺序，且如果手性层析在合成中早期起始，则将相同指定应用于后续中间 体和实施例。
[0027] 本领域普通技术人员将认识到式I的化合物中可W互变异构平衡存在。为了说明 的目的，该平衡如下所示：
为了方便起见，在式I中描绘4-氧代形式，且在整个本说明书中使用相应的命名法。然 而，此类描绘包括相应的互变异构的径基形式。
[0028] 在本发明的化合物的合成中作为最初起始材料采用的化合物是众所周知的，并且 在不可商业得到的程度，使用提供的特定参考文献通过本领域普通技术人员通常采用的或 在一般参考文献中发现的标准步骤容易合成。
[0029] 已知程序和方法的实例包括在一般参考文献诸如Comprehensive Organic Transformations，VCH Publishers Inc，1989;Compendium of Organic Synthetic Methods，第1-10卷，1974-2002，Wiley Interscience;Advanced Organic Chemistry， Reactions Mechanisms, and Structure，第5片反，Michael B. Smith和Jerry March，Wiley Interscience，2001 ; Advanced Organic Chemi stry，第4片反，部分B，React ions and Synthesis ,Francis A. Carey和Richard J. Sundberg，Kluwer Academic / Plenum Publishers ,2000等和其中引用的参考文献中描述的那些。
[0030] 此外，在W下方案中描述的某些中间体可W含有一个或多个氮保护基团。该可变 保护基团在每次出现时可W根据特定反应条件和待进行的特定转换而相同或不同。保护和 脱保护条件是技术人员众所周知的，并且描述于文献中（参见例如"Greene's Protective Groups in Organic Synthesis",第四版，Peter G.Μ. Wilts和Theodora W. Greene, John Wil巧 and Sons, Inc. 2007)。
[0031 ] 本文使用的缩写根据Aldrichimica Acta, Vol. 17 , No . 1, 1984进行定义。其 他缩写定义如下："APC"是指腺瘤性结肠息肉病蛋白；"BID"是指每日两次给药；"生物素化 的NAD+"是指6-生物素-17-烟酷胺-腺嚷岭-二核巧酸；"B0C'是指叔下基氧基幾基；"DCM"是 指二氯甲烧；"DMF"是指二甲基甲酯胺；"DMAP"是指4-二甲基氨基化晚；"DMEM"是指 Du化ecco氏改良的Eagle氏培养基；"DMS炉是指二甲基亚讽；"DPBS"是指Du化ecco氏憐酸盐 缓冲盐水；可TT"是指二硫苏糖醇；巧Dcr是指1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺； 巧GFP"是指增强型绿色巧光蛋白；巧tOAc"是指乙酸乙醋；"FBS"是指胎牛血清；"Flag标签" 是指Flag肤DY邸孤DK，N-末端至C-末端（SEQ ID N0:6); "ΗΕΓ是指人胚肾；"皿阳S"是指4- (2-径基乙基)-1-赃嗦乙横酸；"册Ac"是指乙酸；"HRP"是指辣根过氧化物酶；"IPAm"是指异 丙胺；"MEM"是指最小必需培养基；"MeOr是指甲醇；"MOr是指感染复数；"NCBI"是指国家 生物技术信息中屯、；"PBS"是指憐酸盐缓冲盐水；"RPMI"是指Roswell化rk Memorial研究 所；"SCr是指结合至二氧化娃的强阳离子交换苯基横酸的纯化柱；"SCX-2"是指结合至二 氧化娃的强阳离子交换丙基横酸的纯化柱；"SFC"是指超