在超净工作台上进行基因枪轰击。基因枪轰击参数设置:金粉直径Ιμπι、真空度28英寸汞柱、压力为900ps1、轰击距离为9cm，金粉不包裹质粒。
[0037](5)农杆菌侵染:将含有pS0Y19质粒的农杆菌EHA105活化后过夜培养至OD600 =1.0，离心并重悬于侵染培养基中，调节OD6qq = 0.6。挑取轰击过的愈伤组织，立即取出放入含有农杆菌EHA105的侵染培养基中，并放在摇床上缓慢荡30分钟后，用120W超声波处理2秒。
[0038]其中，侵染培养基成分为:1/10\1^盐、1\85维生素、3%蔗糖、2.811^/1 FeS04.7H20、3.8mg/L Na2_EDTA、3.9g/L MES、0.04g/L乙酰丁香酮、0.02%Silwet L_77、0.3mg/LIAA，pH 值为 5.4。
[0039](6)侵染后的培养:将侵染过的大豆愈伤组织在滤纸上沥干，然后继续在侵染培养基中振荡暗培养3天，振荡速度60r/min，温度25°C。
[0040](7)除菌培养基清洗及继续培养:用除菌培养基一清洗愈伤组织3-5遍，并放入装有除菌培养基一的锥形瓶中振荡I小时。用无菌滤纸吸干菌液，转接到除菌培养基二中，培养一周，转速为60r/min，光周期16h/天，温度25°C。
[0041 ] 除菌培养基一:每升除菌培养基一含有I XMS盐(除去硝酸盐)、0.8g NH4NO3^3.03gKNO3、I XB5维生素、30g蔗糖、0.66g天门冬酰胺、5mg 2,4-D、200mg头孢霉素、50mg特美汀和50mg万古霉素，卩田直为5.7。
[0042]除菌培养基二:每升除菌培养基二含有IXMS盐(除去硝酸盐)、0.8g NH4NO3^3.03gKNO3、I XB5维生素、30g蔗糖、0.66g天门冬酰胺、5mg 2,4-D、10mg头孢霉素、200mg特美汀和50mg万古霉素，pH值为5.7。
[0043](8)筛选及分化:将愈伤组织转接到筛选和分化培养基，每隔2周换一次培养基，光照16h/天，25 °C直至胚状体的形成。
[0044]其中，每升筛选和分化培养基含有:I\1^盐、1\85维生素、608麦芽糖、58活性炭、30mg草甘膦、1001^头孢霉素、2001^特美汀、501^万古霉素和38植物凝胶，？!1值为5.7。
[0045](9)生根培养:将分化形成的大豆胚状体转移到生根培养基中，光照16h/天，温度25。。。
[0046]其中，每升生根培养基含有:IXMS盐、I X B5维生素、5mg草甘膦、20g蔗糖、3g植物凝胶，pH值为5.8。
[0047](10)炼苗及移栽:将已经生根的植株炼苗3-5天，然后洗去根上残留的凝胶，转移到灭菌过的蛭石:珍珠岩(3:1)中，蛭石要时刻保持湿润状态，光照16h/天，温度250C。待植株高度约为60cm左右时，光照变为12h/天，甚至更短，以促进其开花。
[0048]结果表明，不经基因枪轰击、超声波和表面活性剂silwet L_77处理，农杆菌几乎不能感染愈伤组织，得不到抗性植株。经过基因枪轰击、超声波和表面活性剂silwet L-77处理，能够形成大量的再生转化株。
[0049]实施例2
[0050](I)种子挑选与消毒:挑选饱满、干净的“Williams 82”大豆种子，用氯气消毒16小时。
[0051](2)种子萌发:配置IL萌发培养基，灭菌后倒入25个培养皿。将消毒好的种子脐向下种入萌发培养基中，每个培养皿种10粒，用封口膜包好，24°C，暗培养，萌发5天。
[0052]其中，每升萌发培养基含有:1XB5盐、1XB5维生素、28mg FeSO4.7H20、38mg Na2-EDTA、20g蔗糖、3g植物凝胶。
[0053](3)诱导愈伤组织形成:从萌发的大豆中切出5mm下胚轴，从中间剖开，使其平的一面贴在诱导培养基上，24°C暗培养直至产生愈伤组织，愈伤组织每两个星期继代一次。
[0054]其中，每升诱导培养基含有:I XMS盐、IXB5维生素、30g蔗糖、0.5mg 2，4_D、0.5mgIAA、0.6g MES、0.3mg N6-异戊烯基腺嘌呤、2.5g植物凝胶，pH值为5.8。
[0055](4)基因枪轰击:待愈伤组织形成后，选取表面光滑，圆形粒状，淡黄色的愈伤组织在无菌的滤纸上密集摆放成直径为2cm圆形，放入培养皿中，在超净工作台上进行基因枪轰击。基因枪轰击参数设置:金粉直径Ιμπι、真空度28英寸汞柱、压力为900ps1、轰击距离为9cm，金粉不包裹质粒。
[0056](5)农杆菌侵染:将含有pS0Y19质粒的农杆菌EHAlOl活化后过夜培养至OD600 =1.2，离心重悬于侵染培养基中，调节OD6qq = 0.6。挑取轰击过的愈伤组织，立即取出放入含有农杆菌EHAlOl的侵染培养基，并放在摇床上缓慢荡30分钟后，用180W超声波处理2秒。
[0057]其中，侵染培养基成分为:1/10XMS盐、1XB5维生素、3%蔗糖、2.8mg/L FeSO4.7H20、3.8mg/L Na2_EDTA、3.9g/L MES、0.04g/L乙酰丁香酮、0.02%Silwet L_77、0.3mg/LIAA，pH 值为 5.4。
[0058](6)侵染后的培养:将侵染过的大豆愈伤组织在滤纸上沥干，然后继续在侵染培养基中振荡暗培养3天，振荡速度60r/min，温度25°C。
[0059](7)除菌培养基清洗及继续培养:用除菌培养基一清洗愈伤组织3-5遍，并放入装除菌培养基一的锥形瓶中振荡I小时。无菌滤纸吸干菌液，转接到除菌培养基二中，培养一周，转速为60r/min，光周期16h/天，温度25°C。
[0060]除菌培养基一:每升除菌培养基一含有I XMS盐(除去硝酸盐)、0.8g NH4NO3^3.03gKNO3、I XB5维生素、30g蔗糖、0.66g天门冬酰胺、5mg 2,4-D、200mg头孢霉素、50mg特美汀和50mg万古霉素，卩田直为5.7。
[0061 ]除菌培养基二:每升除菌培养基二含有I XMS盐(除去硝酸盐)、0.8g NH4NO3^3.03gKNO3、I XB5维生素、30g蔗糖、0.66g天门冬酰胺、5mg 2,4-D、10mg头孢霉素、200mg特美汀和50mg万古霉素，pH值为5.7。
[0062](8)筛选及分化:将愈伤组织转接到筛选和分化培养基，每隔2周换一次培养基，光照16h/天，25 °C直至胚状体的形成。
[0063]其中，每升筛选和分化培养基含有:I\1^盐、1\85维生素、6(^麦芽糖七活性炭、30mg草甘膦、1001^头孢霉素、2001^特美汀、501^万古霉素和38植物凝胶，？!1值为5.7。
[0064](9)生根培养:将分化形成的大豆胚状体转移到生根培养基中，光照16h/天，25°C。
[0065]其中，每升生根培养基含有:IXMS盐、I X B5维生素、1mg草甘膦、20g蔗糖、3g植物凝胶，pH 5.8。
[0066](10)炼苗及移栽:将已经生根的植株炼苗3-5天，然后洗去根上残留的凝胶，转移到灭菌过的蛭石:珍珠岩(3:1)中，蛭石要时刻保持湿润状态，光照16h/天，250C。待植株高度约为60cm左右时，光照变为12h/天，甚至更短，以促进其开花。
[0067]结果表明，不经基因枪轰击，超声波和表面活性剂si Iwet L-77处理，农杆菌几乎不能感染愈伤组织，得不到抗性植株。经过基因枪轰击，超声波和表面活性剂silwet L-77处理，能够形成大量的再生转化株。
[0068]实施例3
[0069](I)种子挑选与消毒:挑选饱满、干净的“天隆I号”大豆种子，用氯气消毒16小时。
[0070](2)种子萌发。配置IL萌发培养基，灭菌后倒入25个培养皿。将消毒好的种子脐向下种入萌发培养基中，每个培养皿种10粒，用封口膜包好，24°C，暗培养，萌发5天。
[0071]其中，每升培养基含有:1XB5盐、1XB5 维生素、28mg FeSO4.7H20,38mg Na2-EDTA、20g蔗糖、3g植物凝胶
[0072](3)诱导愈伤组织形成:从萌发的大豆中切出5mm下胚轴，从中间剖开，使其平的一面贴在诱导培养基上，24°C暗培养直至产生愈伤组织，愈伤组织每两个星期继代一次。
[0073]其中，每升诱