十全大补酒中当归的鉴别方法与流程

本发明涉及十全大补酒中当归的鉴别方法，具体属于中药检测技术领域。

背景技术：

十全大补酒是由党参、白术(炒)、茯苓、甘草(蜜炙)、当归、川芎、白芍(炒)、熟地黄、黄芪(蜜炙)和肉桂制成。辅料为白酒、蔗糖。本品的功能是温补气血。方中熟地黄补血滋阴，填精生髓；党参补脾健中，益气生血，阳生阴长，共为君药。白术健脾益气；茯苓健脾利湿；黄芪健脾益气升阳，合以助君药开气血生化之源，黄芪补气健中；当归、白芍补养阴血，以阴配阳；肉桂补火助阳，鼓舞气血生长，共为臣药。川芎行气活血，使补而不滞，为佐药。甘草益气，调和诸药，为使药。十药相合，共奏温补气血之功。现有的十全大补酒质量标准中，未涉及到当归的鉴别，因此，研究一种高效、准确鉴别十全大补酒中当归的方法，有利于提升十全大补酒的质量检测标准，显得尤为必要。

技术实现要素：

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种十全大补酒中当归的鉴别方法，可以高效鉴别十全大补酒中当归成分，操作简单，分离度高。

本发明的十全大补酒，是由党参80g、茯苓80g、麸炒白术80g、炙甘草40g、熟地黄120g、白芍(炒)80g、当归120g、川芎40g、炙黄芪80g和肉桂20g制成的。以上十味，粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的的渗漉法(《中国药典》2015年版通则0189)，用白酒17200mL作溶剂，浸渍48小时后，以每分钟1～3mL的速度缓缓渗漉，收集漉液，加入蔗糖1720g，搅匀，静置，滤过，即得。

为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

十全大补酒中当归的鉴别方法，是以当归对照药材和藁本内酯对照品为对照，以正己烷-乙酸乙酯＝4～7︰1～3为展开剂的薄层色谱法。

前述十全大补酒中当归的鉴别方法，包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取本品加乙醚振摇提取，得乙醚液，挥干，残渣加甲醇使其溶解，作为供试品溶液；

(2)对照药材溶液的制备：取当归对照药材0.5g，加乙醚超声处理，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1mL使其溶解，作为对照药材溶液；

(3)对照药品溶液的制备：取藁本内酯对照品，加甲醇制成每1mL中含有1mg藁本内酯对照品的溶液，作为对照品溶液；

(4)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液、对照品溶液、供试品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯＝4～7︰1～3为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

具体地，前述十全大补酒中当归的鉴别方法，包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取本品20mL～30mL，加30mL～40mL乙醚振摇提取，得乙醚液，挥干，残渣加1mL～3mL甲醇使其溶解，作为供试品溶液；

(2)对照药材溶液的制备：取当归对照药材0.5g，加20mL～25mL乙醚超声处理10min～25min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1mL使其溶解，作为对照药材溶液；

(3)对照药品溶液的制备：取藁本内酯对照品，加甲醇制成每1mL中含有1mg藁本内酯对照品的溶液，作为对照品溶液；

(4)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液8～12μL、对照品溶液8～12μL、供试品溶液8～12μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯＝4～7︰1～3为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

优选地，前述十全大补酒中当归的鉴别方法，包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取本品20mL，加30mL乙醚振摇提取，得乙醚液，挥干，残渣加1mL甲醇使其溶解，作为供试品溶液；

(2)对照药材溶液的制备：取当归对照药材0.5g，加20mL乙醚超声处理10min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1mL使其溶解，作为对照药材溶液；

(3)对照药品溶液的制备：取藁本内酯对照品，加甲醇制成每1mL中含有1mg藁本内酯对照品的溶液，作为对照品溶液；

(4)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液10μL、对照品溶液10μL、供试品溶液10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯＝4︰1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

为了确保本发明鉴别方法科学、合理、可行，对本发明的鉴别方法进行了研究和考察。

当归，具有补血活血，调经止痛，润肠通便之功效。常用于血虚萎黄，眩晕心悸，月经不调，经闭痛经，虚寒腹痛，风湿痹痛，跌扑损伤，痈疽疮疡，肠燥便秘。酒当归活血通经。用于经闭痛经，风湿痹痛，跌扑损伤。本方中当归、白芍补养阴血，以阴配阳；肉桂补火助阳，鼓舞气血生长，共为臣药。本实验将选取当归对照药材和藁本内酯对照品作为对照，通过乙醚提取本品中当归成分，对当归药材进行薄层鉴别，并考察不同点样量、不同厂家薄层板、不同温度、不同湿度对本品中当归药材薄层色谱的影响。试验结果表明：以当归对照药材和藁本内酯对照品为对照，以正己烷-乙酸乙酯＝4～7︰1～3为展开剂的薄层色谱法特征明显，专属性强，可作为本品中当归的鉴别方法。

1、仪器与试剂

MS304s/01电子天平(METTLER TOLEDO(梅特勒-托利多))、硅胶G薄层板(青岛海洋化工有限公司)、P-1型薄层色谱展开缸(上海信谊仪器厂有限公司)、5ul薄层点样毛细管(天津市思利达科技有限公司)。

十全大补酒(130901，130902,140201，江苏信邦制药有限公司)、当归对照药材(中国药品生物制品检定所)、藁本内酯对照品(中国食品药品检定研究院)、乙醚(天津科密欧化学试剂有限公司，分析纯)、甲醇(西陇化工股份有限公司，分析纯)、乙酸乙酯(西陇化工股份有限公司，分析纯)、正己烷(西陇化工股份有限公司，分析纯)。

2、鉴别方法的考察

2.1、供试品溶液的制备方法

现有技术中，当归鉴别时供试品溶液是通过加乙醇超声、过滤后制备得到的。本发明供试品溶液是采用乙醚振摇提取后用甲醇溶解得到的。与现有技术相比，操作简单，提取时间短，提取效果好。使用两种方法分别制备供试品溶液，在同等条件下进行鉴别，采用现有技术的一组分离度较差，而采用本发明方法的一组分离度高，重现性好。

2.2、最佳点样量的考察

分别吸取步骤(1)、步骤(2)、步骤(3)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液7、8、9、10、11、12、14μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯＝4︰1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。其中，供试品10μL点样量效果最佳，当点样量大于12μL时，供试品溶液位置斑点出现拖尾现象，点样量低于8μL时，供试品溶液位置斑点不明显；对照药材溶液点样量8～12μL时效果好，尤其是在10μL时效果最佳；对照品溶液点样量8～12μL时效果好，尤其是在10μL时效果最佳，故选择供试品溶液点样量为8～12μL，最佳点样量10μL；对照药材溶液点样量8～12μL，最佳点样量10μL；对照品溶液点样量8～12μL，最佳点样量10μL。

3、专属性考察

吸取步骤(1)中供试品溶液10μL、步骤(2)中对照药材溶液10μL、步骤(3)中对照品溶液10μL、川芎和当归阴性对照溶液10μL(溶液中同时缺少川芎和当归成分)，按供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、阴性对照溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯＝4︰1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照色谱中相应位置上无斑点，表明该方法的专属性良好。如图1所示。

4、耐用性考察

4.1不同厂家薄层板

吸取步骤(1)中供试品溶液10μL、步骤(2)中对照药材溶液10μL、步骤(3)中对照品溶液10μL、川芎和当归阴性对照溶液10μL(溶液中同时缺少川芎和当归成分)，按供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、阴性对照溶液分别点样，更换不同厂家的薄层板，以正己烷-乙酸乙酯＝4︰1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照色谱中相应位置上无斑点，且更换不同厂家薄层板后，各薄层板之间无显著差异，表明更换不同厂家薄层板对当归的薄层鉴别无影响。如图2所示。

4.2温湿度

吸取步骤(1)中供试品溶液10μL、步骤(2)中对照药材溶液10μL、步骤(3)中对照品溶液10μL、川芎和当归阴性对照溶液10μL(溶液中同时缺少川芎和当归成分)，按供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、阴性对照溶液分别点样，变换不同温湿度条件，以正己烷-乙酸乙酯＝4︰1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照色谱中相应位置上无斑点，且变换不同温湿度条件后，各薄层板之间无显著差异，表明变换不同温湿度的薄层板对当归的薄层鉴别无影响。如图3所示。

本发明的有益之处在于：本发明提供的一种十全大补酒中当归的鉴别方法，可控性强，能够实现高效、准确地鉴别十全大补酒中当归成分。本发明的方法，分离度高，重现性好，专属性强，精密度、稳定性好，并且阴性对照无干扰，不同厂家薄层板和温度、湿度条件均不影响。本发明鉴别方法能够对骨痛药酒中当归成分进行准确、全面、科学有效的鉴别，提升了质量检测标准，进一步确保了产品质量的稳定、安全、有效。

附图说明

图1是本发明的十全大补酒中当归的专属性鉴别色谱图；

图2是十全大补酒中当归鉴别时采用不同薄层板的色谱图；

图3是十全大补酒中当归鉴别时不同温湿度条件下的色谱图；

图中附图标记的含义：图1～图3:1-供试品批号130901，2-供试品批号130902,3-供试品批号140201,4-当归对照药材，5-藁本内酯对照品，6-川芎和当归阴性对照；图2：A-青岛海洋硅胶G薄层板(规格：100×100mm),B-烟台市化学工业研究所硅胶G薄层板(规格：100×100mm)；图3：A-温度28.3℃、湿度32％，B-温度3.5℃、湿度72％。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步的介绍。

实施例1

十全大补酒中当归的鉴别方法，包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取本品25mL，加35mL乙醚振摇提取，得乙醚液，挥干，残渣加2mL甲醇使其溶解，作为供试品溶液；

(2)对照药材溶液的制备：取当归对照药材0.5g，加22mL乙醚超声处理20min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1mL使其溶解，作为对照药材溶液；

(3)对照药品溶液的制备：取藁本内酯对照品，加甲醇制成每1mL中含有1mg藁本内酯对照品的溶液，作为对照品溶液；

(4)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液8μL、对照品溶液12μL、供试品溶液12μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯＝7︰3为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

实施例2

十全大补酒中当归的鉴别方法，包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取本品30mL，加40mL乙醚振摇提取，得乙醚液，挥干，残渣加3mL甲醇使其溶解，作为供试品溶液；

(2)对照药材溶液的制备：取当归对照药材0.5g，加25mL乙醚超声处理25min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1mL使其溶解，作为对照药材溶液；

(3)对照药品溶液的制备：取藁本内酯对照品，加甲醇制成每1mL中含有1mg藁本内酯对照品的溶液，作为对照品溶液；

(4)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液12μL、对照品溶液8μL、供试品溶液8μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯＝5︰2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

实施例3

十全大补酒中当归的鉴别方法，包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取本品20mL，加30mL乙醚振摇提取，得乙醚液，挥干，残渣加1mL甲醇使其溶解，作为供试品溶液；

(2)对照药材溶液的制备：取当归对照药材0.5g，加20mL乙醚超声处理10min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1mL使其溶解，作为对照药材溶液；

(3)对照药品溶液的制备：取藁本内酯对照品，加甲醇制成每1mL中含有1mg藁本内酯对照品的溶液，作为对照品溶液；

(4)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液10μL、对照品溶液10μL、供试品溶液10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯＝4︰1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

实施例4

十全大补酒中当归的鉴别方法，包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取本品24mL，加36mL乙醚振摇提取，得乙醚液，挥干，残渣加2mL甲醇使其溶解，作为供试品溶液；

(2)对照药材溶液的制备：取当归对照药材0.5g，加24mL乙醚超声处理15min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1mL使其溶解，作为对照药材溶液；

(3)对照药品溶液的制备：取藁本内酯对照品，加甲醇制成每1mL中含有1mg藁本内酯对照品的溶液，作为对照品溶液；

(4)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液9μL、对照品溶液10μL、供试品溶液9μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯＝6︰1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。