本发明涉及一种检测方法，具体是一种牛奶中抗生素残留的检测方法。
背景技术：
牛奶富含除了膳食纤维外的人体所需要的所有营养物质，其营养之高是其他食物不可替代的。新鲜牛奶和奶制品已经成为人们(尤其是老人和儿童)生活食品中的重要组成部分。近年来，随着我国畜牧养殖业的迅速发展，奶产量大幅度提高，为了预防疾病的发生和治疗乳房炎等疾病，养殖者会在牛饲料中及饮用水中添加含有一定比例抗生素的饲料添加剂，然而，这样将不可避免地造成牛奶中抗生素的残留。若长期饮用含有抗生素的牛奶，牛奶中的抗生素可通过食物链进入人体，无疑是等于长期服用小剂量的抗生素。对抗生素过敏体质的人服用残留抗生素的牛奶后可引发过敏反应。正常饮用者，会导致体内的某些条件性致病菌易产生耐药性，一旦患病再用同种抗生素治疗很难奏效。抗生素残留不仅危害人类健康，同时也影响牛奶的品质。世界粮农组织(FAO)、世界卫生组织(WHO)的食品法对牛奶中抗生素最高残留量作了详细的规定。我国农业部2001年颁布实施了《无公害食品生鲜牛乳行业标准》。因此，建立一种，简单、快速、有效地检测牛奶中多种抗生素残留的方法是非要必要的。
由于磺胺类、喹诺酮类、β-内酰胺类、四环素类、氯霉素类共5大类33种兽药的药物，其化学分子结构和化学性质差异较大，同时对牛奶中多种抗生素残留的同时检测有一定困难，目前还没有文献报道。对于牛奶中抗生素残留分析，固相萃取技术、固相微萃取技术以及基质固相分散等前处理技术已经被应用到样品前处理步骤中，以用来解决样品分析测试中的基质干扰问题。其中，固相萃取技术的应用最为广泛，但是应用在牛奶中抗生素残留检测的前处理中，固相萃取技术却普遍存在样品处理过程复杂、有毒试剂接触多、耗材消耗量大、需要额外氮吹、重现性差和无法实现全自动联机等问题。特别是四环素类等药物，由于其与蛋白质或者矿物质结合，形成结合态，因此更加加重了牛奶中残留抗生素的检测难度。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种牛奶中抗生素残留的检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种牛奶中抗生素残留的检测方法，(1)量取2-4mL的牛奶于离心管中，加入0.3-0.5g的破乳剂，超声振荡15-30分钟后，加入10-20mL乙酸乙酯，分散均匀后，加入10-30mL的磷酸盐缓冲溶液，超声提取10-20分钟，离心后，移取5mL上清液，加5mL磷酸盐缓冲溶液混匀后，在氢氧化钠或氢氧化钾溶液中溶解，再加甲苯萃取，取上层溶液作为标准溶液；(2)将步骤（1）中的标准溶液转移至固相萃取柱中，依次用5mL水，5mL甲醇水溶液淋洗，弃去流出液，减压抽干后，用5mL甲醇洗脱，收集洗脱液。在50℃水浴中用氮气吹至近干，加入5mL乙腈水溶液，在涡旋混合器上混合后，过微孔滤膜后滤液待测；(3)将滤液加入气相色谱仪中进行测定，外标法定量；
色谱条件如下：进样方式：直接进样；色谱柱：非极性、弱极性或中等极性填料的毛细管柱；柱温：30～50℃保持4～5min，按20～60℃/min升温至200℃，保持2min；检测器温度：150～250℃；进样口温度：110～200℃。
作为本发明进一步的方案：所述破乳剂为聚氧乙烯。
作为本发明再进一步的方案：所述固相萃取柱为HLB萃取柱。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明能够有效提高检测结果的准确性， 为食品安全提供有益保障。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
本发明实施例中，一种牛奶中抗生素残留的检测方法，(1)量取2-4mL的牛奶于离心管中，加入0.3-0.5g的破乳剂，超声振荡15-30分钟后，加入10-20mL乙酸乙酯，分散均匀后，加入10-30mL的磷酸盐缓冲溶液，超声提取10-20分钟，离心后，移取5mL上清液，加5mL磷酸盐缓冲溶液混匀后，在氢氧化钠或氢氧化钾溶液中溶解，再加甲苯萃取，取上层溶液作为标准溶液；(2)将步骤（1）中的标准溶液转移至固相萃取柱中，依次用5mL水，5mL甲醇水溶液淋洗，弃去流出液，减压抽干后，用5mL甲醇洗脱，收集洗脱液。在50℃水浴中用氮气吹至近干，加入5mL乙腈水溶液，在涡旋混合器上混合后，过微孔滤膜后滤液待测；(3)将滤液加入气相色谱仪中进行测定，外标法定量；色谱条件如下：进样方式：直接进样；色谱柱：非极性、弱极性或中等极性填料的毛细管柱；柱温：30～50℃保持4～5min，按20～60℃/min升温至200℃，保持2min；检测器温度：150～250℃；进样口温度：110～200℃。所述破乳剂为聚氧乙烯。所述固相萃取柱为HLB萃取柱。
实施例1：
一种牛奶中抗生素残留的检测方法，(1)量取2-4mL的牛奶于离心管中，加入0.3g的破乳剂，超声振荡20分钟后，加入10mL乙酸乙酯，分散均匀后，加入10mL的磷酸盐缓冲溶液，超声提取10分钟，离心后，移取5mL上清液，加5mL磷酸盐缓冲溶液混匀后，在氢氧化钠或氢氧化钾溶液中溶解，再加甲苯萃取，取上层溶液作为标准溶液；(2)将步骤（1）中的标准溶液转移至固相萃取柱中，依次用5mL水，5mL甲醇水溶液淋洗，弃去流出液，减压抽干后，用5mL甲醇洗脱，收集洗脱液。在50℃水浴中用氮气吹至近干，加入5mL乙腈水溶液，在涡旋混合器上混合后，过微孔滤膜后滤液待测；(3)将滤液加入气相色谱仪中进行测定，外标法定量；色谱条件如下：进样方式：直接进样；色谱柱：非极性、弱极性或中等极性填料的毛细管柱；柱温：30℃保持4min，按20℃/min升温至200℃，保持2min；检测器温度：150℃；进样口温度：110℃。所述破乳剂为聚氧乙烯。所述固相萃取柱为HLB萃取柱。
实施例2：
一种牛奶中抗生素残留的检测方法，(1)量取4mL的牛奶于离心管中，加入0.5g的破乳剂，超声振荡30分钟后，加入20mL乙酸乙酯，分散均匀后，加入30mL的磷酸盐缓冲溶液，超声提取20分钟，离心后，移取5mL上清液，加5mL磷酸盐缓冲溶液混匀后，在氢氧化钠或氢氧化钾溶液中溶解，再加甲苯萃取，取上层溶液作为标准溶液；(2)将步骤（1）中的标准溶液转移至固相萃取柱中，依次用5mL水，5mL甲醇水溶液淋洗，弃去流出液，减压抽干后，用5mL甲醇洗脱，收集洗脱液。在50℃水浴中用氮气吹至近干，加入5mL乙腈水溶液，在涡旋混合器上混合后，过微孔滤膜后滤液待测；(3)将滤液加入气相色谱仪中进行测定，外标法定量；色谱条件如下：进样方式：直接进样；色谱柱：非极性、弱极性或中等极性填料的毛细管柱；柱温：50℃保持5min，按60℃/min升温至200℃，保持2min；检测器温度：250℃；进样口温度：200℃。所述破乳剂为聚氧乙烯。所述固相萃取柱为HLB萃取柱。
实施例3：
一种牛奶中抗生素残留的检测方法，(1)量取3mL的牛奶于离心管中，加入0.4g的破乳剂，超声振荡20分钟后，加入15mL乙酸乙酯，分散均匀后，加入20mL的磷酸盐缓冲溶液，超声提取15分钟，离心后，移取5mL上清液，加5mL磷酸盐缓冲溶液混匀后，在氢氧化钠或氢氧化钾溶液中溶解，再加甲苯萃取，取上层溶液作为标准溶液；(2)将步骤（1）中的标准溶液转移至固相萃取柱中，依次用5mL水，5mL甲醇水溶液淋洗，弃去流出液，减压抽干后，用5mL甲醇洗脱，收集洗脱液。在50℃水浴中用氮气吹至近干，加入5mL乙腈水溶液，在涡旋混合器上混合后，过微孔滤膜后滤液待测；(3)将滤液加入气相色谱仪中进行测定，外标法定量；色谱条件如下：进样方式：直接进样；色谱柱：非极性、弱极性或中等极性填料的毛细管柱；柱温：40℃保持5min，按50℃/min升温至200℃，保持2min；检测器温度：200℃；进样口温度：150℃。所述破乳剂为聚氧乙烯。所述固相萃取柱为HLB萃取柱。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。