1.一种快速测定金霉素预混剂中金霉素含量的方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1、标准曲线的绘制
1)盐酸金霉素标准曲线的绘制:
取盐酸金霉素的标准品并配制成一系列效价梯度的标准溶液,每个效价设置多组标准溶液,取其中一组作为第一标准对照组,所述第一标准对照组用于校正的参比溶液,第一标准对照组的处理方式如下:加入n摩尔量的盐酸;
其余各组作为第一标准实验组,所述第一标准实验组的处理方式如下:加入n摩尔量的盐酸后进行加热处理;
测定各个第一标准实验组的吸光度并取平均值,然后根据平均吸光度与第一标准实验组效价的对应关系建立盐酸金霉素的标准曲线;
2)盐酸四环素标准曲线的绘制:
取盐酸四环素的标准品并配制成一系列效价梯度的标准溶液,每个效价设置多组标准溶液,取其中一组作为第二标准对照组,所述第二标准对照组用于校正的参比溶液,第二标准对照组的处理方式如下:加入体积VEDTA的EDTA混合液,静置后,再加入n摩尔量的盐酸;
其余各组作为第二标准实验组,所述第二标准实验组的处理方式如下:加入体积VEDTA的EDTA混合液,静置后,再加入n摩尔量的盐酸,然后进行同S1 1)中的加热处理;
测定各个第二标准实验组的吸光度并取平均值,然后根据平均吸光度与第二标准实验组效价的对应关系建立盐酸四环素的标准曲线;
S2、金霉素预混剂样品溶液的配制
1)将金霉素预混剂样品研磨后取M,经溶解处理使样品中的抗生素成分充分释放后,过滤取滤液,滤液体积为V0,即得V0的金霉素预混剂样品溶液;
S3、金霉素预混剂样品溶液总效价的检测
1)设置第一对照组和第一实验组,第一对照组和第一实验组各取V1的步骤S2所配制的金霉素预混剂样品溶液,第一对照组的处理方式同第一标准对照组,第一实验组的处理方式同第一标准实验组,第一对照组和第一实验组均用水稀释至相同体积V11;
2)分光光度计检测:以第一对照组为参比溶液,校正后,测得第一实验组的吸光度A;
3)计算:对照步骤S1所得盐酸金霉素的标准曲线,吸光度A对应于效价N1,则
金霉素预混剂样品溶液的总效价R1=N1×V11/V1;
金霉素预混剂样品的总效价=V0×R1/M;
S4、金霉素预混剂样品溶液中四环素效价的检测
1)设置第二对照组和第二实验组,第二对照组和第二实验组各取V2的步骤S2所配制的金霉素预混剂样品溶液,第二对照组的处理方式同第二标准对照组,第二实验组的处理方式同第二标准实验组,第二对照组和第二实验组均用水稀释至相同体积V22;
2)分光光度计检测:以第二对照组为参比溶液,校正后,测得第二实验组的吸光度B;
3)计算:对照步骤S1所得盐酸四环素的标准曲线,吸光度B对应于效价N2,则
金霉素预混剂样品溶液中的四环素效价R2=N2×V22/V2;
金霉素预混剂样品中的四环素效价=V0×R2/M;
S5、金霉素预混剂样品中的金霉素效价RCTC=V0×R1/M-V0×R2/M;
S6、取多个不同金霉素含量的金霉素预混剂样品,经过步骤S1至S5分别测得金霉素效价RCTC,同时利用高效液相色谱法分别测定金霉素含量,然后将所得金霉素效价RCTC与高效液相色谱法检测的金霉素含量进行线性拟合,得到回归方程;
S7、取待测金霉素预混剂样品,经过步骤S1至S5得到金霉素效价RCTC后,代入回归方程即得该待测金霉素预混剂样品中的金霉素含量。