一种检测膜融合蛋白在脂质体中定位的核磁共振方法

文档序号:24635125发布日期:2021-04-09 20:45阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种检测膜融合蛋白在脂质体中定位的核磁共振方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)对膜融合蛋白进行15n标记,得到标记蛋白,将所述标记蛋白与脂质体反应,得到蛋白-脂质体复合物;

2)对所述步骤1)得到的蛋白-脂质体复合物进行固体核磁共振,采集一维1h-15n固体核磁图谱,根据一维1h-15n固体核磁图谱,分析膜融合蛋白在脂质体中的定位。

2.根据权利要求1所述的核磁共振方法,其特征在于,利用600mhzbrukeravanceiii固体核磁共振仪进行固体核磁共振,魔角转速设置为10khz。

3.根据权利要求1所述的核磁共振方法,其特征在于,所述膜融合蛋白包括psi蛋白。

4.根据权利要求1所述的核磁共振方法,其特征在于,所述步骤1)脂质体中含有磷脂和顺磁磷脂。

5.根据权利要求4所述的核磁共振方法,其特征在于,所述脂质体中磷脂的质量百分含量为50-90%。

6.根据权利要求4所述的核磁共振方法,其特征在于,所述脂质体中顺磁磷脂的质量百分含量为0.5-10%。

7.根据权利要求4或6所述的核磁共振方法,其特征在于,所述顺磁磷脂包括gd3+,cu2+,tm3+,tb3+,dy3+,mn2+,fe3+,co3+等修饰的磷脂,本案例中用的为gd3+-dmpe-dtpa。

8.根据权利要求1所述的核磁共振方法,其特征在于,所述步骤1)标记蛋白与脂质体的摩尔比为1:5~1:35。

9.根据权利要求1所述的核磁共振方法,其特征在于,所述步骤1)反应的条件包括:所述反应的时间为8~60min,所述反应的温度为4~37℃。

10.根据权利要求1所述的核磁共振方法,其特征在于,所述步骤1)膜融合蛋白的纯度在90%以上。


技术总结
本发明提供了一种检测膜融合蛋白在脂质体中定位的固体核磁共振方法,属于生物物理和生物化学技术领域,包括:对膜融合蛋白进行15N稳定同位素标记,将15N标记蛋白分别与顺磁脂质体和非顺磁脂质体反应,得到蛋白‑脂质体复合物。其中顺磁脂质体含有一定比例的络合镧系金属离子的顺磁磷脂分子,而非顺磁脂质体不含有顺磁磷脂分子。通过采集蛋白‑脂质体复合物的固体核磁共振谱图,对比在顺磁和非顺磁脂质体中的一维15N固体核磁共振图谱,进而利用信号强度的对比获取膜融合蛋白在脂质体中的定位,即区分膜融合蛋白在脂质体内部或在其表面。采用本发明提供的核磁共振方法能够检测膜融合蛋白在脂质体中的定位。

技术研发人员:王申林;赵晓丽;钱朝晖;欧秀元;邹梦冰;马常兴
受保护的技术使用者:北京大学;中国医学科学院病原生物学研究所
技术研发日:2020.12.28
技术公布日:2021.04.09
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