技术特征：
1.一种鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条，其特征在于，所述试纸条自一端至另一端依次设有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；所述硝酸纤维素膜上设有质控线和检测线；所述检测线靠近所述金标垫一端设置，所述质控线靠近所述吸水垫一端设置；所述金标垫上设有与胶体金偶连的单克隆抗体，所述单克隆抗体由保藏号为d8的杂交瘤细胞株分泌产生；所述检测线由保藏号为e8的杂交瘤细胞株分泌产生的单克隆抗体构成；所述质控线由羊抗鼠抗体构成。2.根据权利要求1所述的鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条，其特征在于，还包括一块背衬，所述样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫均承载于所述背衬上。根据权利要求1所述的鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条，其特征在于，在与胶体金偶连的单克隆抗体中，所述胶体金的粒径为30～40nm，所述胶体金与单抗的质量体积比为3μg/ml。3.根据权利要求1所述的鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条，其特征在于，所述胶体金的最适ph确定如下：取多组胶体金溶液，每组溶液中加入不同量的0.2mol/l碳酸钾调整溶液调节所述胶体金溶液的ph，并且加入d8单克隆抗体进行反应，随后加入10μl10％nacl溶液持续反应，进行离心操作，离心后观察到胶体金颜色最红，无聚沉、无褪色或变色现象的该组胶体金溶液为胶体金的最适ph。4.根据权利要求3所述的鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条，其特征在于，d8单克隆抗体与胶体金偶联的最佳结合量为：取多组最适ph的胶体金溶液，每一组加入不同量的d8单克隆抗体，反应后，每一组均加入10μl 10％nacl溶液，取颜色最红且抗体用量最少的为最小结合量xμg/ml，为保证胶体金完全与d8单克隆抗体结合，以x+x
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2为最佳结合量。5.根据根据权利要求4所述的鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条，其特征在于，与胶体金偶连的单克隆抗体制备如下：胶体金ph调节至最佳ph值，按d8单克隆抗体与胶体金偶联的最佳结合量吸取抗体，以40μl/min滴加到胶体金溶液中，同时在磁力搅拌器上搅拌，待抗体加完后于4℃环境中持续搅拌1h，加入所述胶体金溶液1/10体积的含10％bsa的pb溶液，搅拌1h，移入离心管1000rpm离心10min，小心吸取上清至新离心管，将上清12000rpm离心10min，弃上清，沉淀用原胶体金溶液1/10体积的重悬液重悬，混合均匀后4℃保存备用。6.一种鲍氏志贺氏菌的检测方法，使用如权利要求1
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5中任意一项所述的鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条，其特征在于，样品滴在样品垫上，顺着金标垫、硝化纤维素膜和吸水纸的方向层析；若样品中含有目标细菌，目标细菌与金标垫上的胶体金偶联的单克隆抗体结合，形成胶体金偶联抗体—细菌复合物，所述复合物流经检测线时，被检测线的单克隆抗体所捕获，形成胶体金偶联单克隆抗体—细菌—捕获抗体的三元复合物，使检测线出现可视化的颜色；随着继续层析，复合物被质控线上的羊抗鼠抗体捕获，质控线呈现可视化的颜色；若样品不含目标细菌，当样品流经金标垫时，胶体金偶联的单克隆抗体随样品层析，最终到达质控线，被质控线的羊抗鼠抗体捕获，质控线呈现可视化的颜色，检测线不显示颜色。
技术总结
本发明提出一种鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条及其检测方法，试纸条自一端至另一端依次设有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；硝酸纤维素膜上设有质控线和检测线；检测线靠近金标垫一端设置，质控线靠近吸水垫一端设置；金标垫上设有与胶体金偶连的单克隆抗体，单克隆抗体由保藏号为D8的杂交瘤细胞株分泌产生；检测线由保藏号为E8的杂交瘤细胞株分泌产生的单克隆抗体构成；质控线由羊抗鼠抗体构成。本发明的鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条，由于采用了可相互配对的单克隆抗体分别喷涂于金标垫和检测线，对鲍氏志贺氏菌的检测特异性和灵敏度均较高，具有操作简便，低成本快速检测的特点，可实现对大量鲍氏志贺氏菌样品的现场监控。品的现场监控。品的现场监控。
技术研发人员：李斌 吴有雪 吴美娇 刘程 方水琴 田亚晨 刘涛 杨昊 刘箐
受保护的技术使用者：上海理工大学
技术研发日：2021.07.15
技术公布日：2021/10/26