分离、测定泊沙康唑Z2及其杂质的方法与流程

分离、测定泊沙康唑z2及其杂质的方法
技术领域
1.本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种分离、测定泊沙康唑z2及其杂质的方法。


背景技术：

2.泊沙康唑(posaconazole)是伊曲康唑的衍生物，适用于念珠菌属、隐球菌属真菌引起的真菌血症，呼吸、消化道、尿路真菌病，腹膜炎、脑膜炎等。在制备泊沙康唑原料药时，杂质的定性及定量分析对控制原料药的质量有着重大影响。不过现有定性、定量检测泊沙康唑及其杂质的方法要么杂质单一，要么定量分析精确度不高，那么检测限高，灵敏度低。
3.专利cn201810992890.7公开了一种泊沙康唑杂质检测方法，该方法包括1)分别取不同的杂质和泊沙康唑溶解于流动相中配置成终浓度为0.1
‑
0.2mg/ml的对照品溶液，将对照品溶液进行高效液相色谱仪检测，生成不同杂质情况下的对照品图谱，将图谱曲线进行合并制成对照图谱；2)将待测样品溶于流动相中得到与对照品溶液相同浓度的待测溶液，在相同高效液相色谱仪检测条件下检测生成待测样品图谱，采用待测样品图谱与对照图谱对比即可得到杂质的种类和含量。该方法未明确针对某种杂质，而且实施例未明确记载其解决技术问题的有益效果。
4.专利cn201811098699.4公开了一种泊沙康唑中起始物料杂质的检测方法，该方法测定泊沙康唑中起始物料bskz
‑
1((5r
‑
cis)
‑
甲苯
‑4‑
磺酸5
‑
(2，4
‑
二氟苯基)
‑5‑
(1h
‑
1，2，4
‑
三氮唑
‑1‑
基)甲基四氢呋喃
‑3‑
基甲基酯)的检测方法，采用液相色谱法，色谱柱为agilent zorbax
‑
phenyl色谱柱(150mm
×
4.6mm，3.5um)，以乙腈
‑
水(50∶50)为流动相；流速为每分钟1.0ml；柱温为40℃；检测波长为225nm。精密量取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，采用外标法计算。该方法使用液相色谱外标法进行检测与计算杂质含量，精确度不够高。
5.而且，现有技术没有公开液质联用定性、定量分析泊沙康唑z2及其杂质(sm
1l
、sm
1k
、z
2d
和z
2h
)的方法。


技术实现要素：

6.有鉴于此，本发明在于提供一种分离、测定泊沙康唑z2及其杂质sm
1l
、sm
1k
、z
2d
和z
2h
中的一种或多种的方法，该方法是基于液质联用先进行色谱分离，然后进行质谱定量分析，该检测方法精确度高，检测限低(0.35ng/ml的极低浓度)，灵敏度高。
7.实现本发明的技术方案如下：
8.分离泊沙康唑z2及其杂质sm
1l
、sm
1k
、z
2d
和z
2h
中的一种或多种的方法包括：使用液相色谱进行梯度洗脱，所述液相色谱的流动相为流动相a和流动相b的混合溶液；所述流动相a为乙酸铵
‑
甲酸
‑
水溶液；所述流动相b为有机溶剂；所述泊沙康唑z2的结构式如式i所示，杂质sm
1l
的结构式如式ii所示，杂质sm
1k
的结构式如式iii所示，杂质z
2d
的结构式如式ⅳ所示，杂质z
2h
的结构式如式v所示；
[0009][0010]
进一步，所述梯度洗脱的程序为：
[0011]
0≤t＜7min，流动相a的体积分数为48
‑
52％，流动相b的体积分数为48
‑
52％；
[0012]
7≤t＜23min，流动相a的体积分数为28
‑
32％，流动相b的体积分数为68
‑
72％；
[0013]
23≤t≤30min，流动相a的体积分数为3
‑
7％，流动相b的体积分数为93
‑
97％；
[0014]
＞30min，流动相a的体积分数为48
‑
52％，流动相b的体积分数为48
‑
52％。
[0015]
优选地，所述梯度洗脱的程序为：
[0016]
0≤t＜7min，流动相a的体积分数为50％，流动相b的体积分数为50％；
[0017]
7≤t＜23min，流动相a的体积分数为30％，流动相b的体积分数为70％；
[0018]
23≤t≤30min，流动相a的体积分数为5％，流动相b的体积分数为95％；
[0019]
＞30min，流动相a的体积分数为50％，流动相b的体积分数为50％
[0020]
进一步，所述流动相a中，乙酸铵的浓度为8
‑
12mm，甲酸的质量百分数为0.04
‑
0.06％。
[0021]
优选地，所述流动相a中，乙酸铵的浓度为10mm，甲酸的质量百分数为0.05％。
[0022]
进一步，所述流动相b为乙腈、甲醇中的一种或多种。
[0023]
更优选地，所述流动相b为甲醇。
[0024]
测定沙康唑z2及其杂质sm
1l
、sm
1k
、z
2d
和z
2h
中的一种或多种的含量的方法，包括：(1)使用前任一所述的分离泊沙康唑z2及其杂质sm
1l
、sm
1k
、z
2d
和z
2h
中的一种或多种的方法分离沙康唑z2及其杂质；(2)然后使用质谱仪进行检测。
[0025]
进一步，步骤(2)中，所述质谱仪的离子源相关参数包含：esi离子源、mrm正/负离子模式、雾化气、加热辅助气、门帘气、碰撞气、喷雾电压、离子源温度等。
[0026]
优选地，选用esi离子源；和/或mrm正离子模式；和/或雾化气为50
‑
60psi；和/或加热辅助气为50
‑
60psi；和/或门帘气为30
‑
40psi；和/或碰撞气为8
‑
10psi；和/或喷雾电压为4500
‑
5500v；和/或离子源温度为500
‑
600℃。
[0027]
更优选地，步骤(2)中，选用esi离子源；和/或mrm正离子模式；和/或雾化气为55psi；和/或加热辅助气为55psi；和/或门帘气为35psi；和/或碰撞气为9psi；和/或喷雾电压为5000v；和/或离子源温度为550℃。
[0028]
进一步，步骤(2)中，所述质谱仪选用现有的所有的质量分析器，比如单聚焦、双聚焦、离子肼、四级杆、飞行时间等质量分析器，优选为四级杆。
[0029]
进一步，步骤(2)中，所述质谱仪的驻留时间为80
‑
120msce。
[0030]
进一步，步骤(2)中，所述质谱的分辨率采用resolution q1:unit，resolution q3:unit。
[0031]
进一步，步骤(2)中，使用质荷比270.1
→
135.1作为sm
1l
和sm
1k
检测离子对；或使用质荷比532.3
→
296.1作为z
2d
的检测离子对；或使用质荷比504.4
→
296.4作为z
2h
的检测离子对。
[0032]
进一步，步骤(2)中，还包括去簇电压(dp)、射入电压(ep)、碰撞电压(ce)、碰撞室射出电压(cxp)、等质谱参数。
[0033]
优选地，步骤(2)中，测定sm
1l
和sm
1k
的去簇电压(dp)为30v，碰撞电压(ce)为30v，射入电压(ep)为10v，碰撞室射出电压(cxp)为6v；测定z
2d
的去簇电压(dp)为40v，碰撞电压(ce)为40v，射入电压(ep)为10v，碰撞室射出电压(cxp)为6v；测定z
2h
的去簇电压(dp)为44v，碰撞电压(ce)为44v，射入电压(ep)为10v，碰撞室射出电压(cxp)为6v。
[0034]
本发明目的在于还提供一种组合物在分离泊沙康唑z2及其杂质中的应用，该组合物为液相色谱作为流动相分离泊沙康唑z2及其杂质sm
1l
、sm
1k
、z
2d
和z
2h
中的一种或多种，分离度高，分离时间短。
[0035]
所述泊沙康唑z2的结构式如式i所示，杂质sm
1l
的结构式如式ii所示，杂质sm
1k
的结构式如式iii所示，杂质z
2d
的结构式如式ⅳ所示，杂质z
2h
的结构式如式v所示；
[0036][0037]
所述组合物为组合物a和组合物b构成，所述组合物a为乙酸铵
‑
甲酸
‑
水溶液；所述组合物b为有机溶剂；所述组合物中，组合物a的体积分数为48
‑
52％，组合物b的体积分数为48
‑
52％；或所述组合物中，组合物a的体积分数为28
‑
32％，组合物b的体积分数为68
‑
72％；或所述组合物中，组合物a的体积分数为3
‑
7％，组合物b的体积分数为93
‑
97％；或组合物a的体积分数为48
‑
52％，组合物b的体积分数为48
‑
52％。
[0038]
优选地，所述组合物中，组合物a的体积分数为50％，组合物b的体积分数为50％；或所述组合物中，组合物a的体积分数为30％，组合物b的体积分数为70％；或所述组合物中，组合物a的体积分数为5％，组合物b的体积分数为95％；或组合物a的体积分数为50％，组合物b的体积分数为50％。
[0039]
更优选地，分离泊沙康唑z2及其杂质sm
1l
时，所述组合物中，组合物a的体积分数为48
‑
52％，组合物b的体积分数为48
‑
52％；或分离泊沙康唑z2及其杂质sm
1k
和/或z
2d
时，所述组合物中，组合物a的体积分数为28
‑
32％，组合物b的体积分数为68
‑
72％；或分离泊沙康唑z2及其杂质z
2h
时，所述组合物中，组合物a的体积分数为48
‑
52％，组合物b的体积分数为48
‑
52％。
[0040]
更优选地，分离泊沙康唑z2及其杂质sm
1l
时，所述组合物中，组合物a的体积分数为
50％，组合物b的体积分数为50％；或分离泊沙康唑z2及其杂质sm
1k
和/或z
2d
时，所述组合物中，组合物a的体积分数为30％，组合物b的体积分数为70％；或分离泊沙康唑z2及其杂质z
2h
时，所述组合物中，组合物a的体积分数为50％，组合物b的体积分数为50％。
[0041]
更优选地，所述组合物可以结合液相色谱固定相进行使用，在不同的时间段，使用不同比例的组合物进行分离。
[0042]
在某些具体实施例中，不同的时间段，使用不同比例的组合物进行分离具体为：
[0043]
0≤t＜7min，组合物a的体积分数为50％，组合物b的体积分数为50％；
[0044]
7≤t＜23min，组合物a的体积分数为30％，组合物b的体积分数为70％；
[0045]
23≤t≤30min，组合物a的体积分数为5％，组合物b的体积分数为95％；
[0046]
＞30min，组合物a的体积分数为50％，组合物b的体积分数为50％。
[0047]
进一步，所述组合物a中，乙酸铵的浓度为8
‑
12mm，甲酸的质量百分数为0.04
‑
0.06％。
[0048]
优选地，所述组合物a中，乙酸铵的浓度为10mm，甲酸的质量百分数为0.05％。
[0049]
进一步，所述组合物b为乙腈、甲醇中的一种或多种。更优选为甲醇。
[0050]
本发明中，“质量百分数”“质量”“体积”等数值范围不包含由于操作误差、仪器误差导致的数值范围变化，即是说，由于操作误差、仪器误差导致的数值范围变化也在本发明技术方案之类。
[0051]
本发明有益效果在于
[0052]
本发明提供的液质联用分离、测定泊沙康唑z2及其杂质sm
1l
、sm
1k
、z
2d
和z
2h
中一种或多种的含量的方法采用三重四极杆质谱进行检测，不同于以往的检测方法，为检测泊沙康唑及其杂质提供了一种新思路。
[0053]
本发明提供的分离、测定泊沙康唑z2及其杂质sm
1l
、sm
1k
、z
2d
和z
2h
中一种或多种的含量的方法检测限度达到了0.35ng/ml的极低浓度。
[0054]
本发明提供的分离、测定泊沙康唑z2及其杂质sm
1l
、sm
1k
、z
2d
和z
2h
中一种或多种的含量的方法可以达到ich的控制要求，将杂质限度需要控制到2.5ppm以下，并且可以使得z2和z
2h
很好分离，提高z
2h
回收率至合格水平。
附图说明
[0055]
图1为sm
1k
二级质谱图。
[0056]
图2为sm
1l
二级质谱图。
[0057]
图3为z
2d
二级质谱图。
[0058]
图4为z
2h
二级质谱图。
[0059]
图5为空白溶剂
‑
sm
1l
通道色谱图。
[0060]
图6为空白溶剂
‑
sm
1k
通道色谱图。
[0061]
图7为空白溶剂
‑
z
2d
通道色谱图。
[0062]
图8为空白溶剂
‑
z
2h
通道色谱图。
[0063]
图9为对照品溶液
‑
sm
1l
通道色谱图(2.5ng/ml)。
[0064]
图10为对照品溶液
‑
sm
1k
通道色谱图(2.5ng/ml)。
[0065]
图11为对照品溶液
‑
z
2d
通道色谱图(2.5ng/ml)。
[0066]
图12为对照品溶液
‑
z
2h
通道色谱图(2.5ng/ml)。
[0067]
图13为sm
1k
和sm
1l
‑
loq色谱图(0.7ng/ml)。
[0068]
图14为z
2d
‑
loq色谱图(0.7ng/ml)。
[0069]
图15为z
2h
‑
loq色谱图(0.7ng/ml)。
[0070]
图16为sm
1k
和sm
1l
‑
lod色谱图(0.35ng/ml)。
[0071]
图17为z
2d
‑
lod色谱图(0.35ng/ml)。
[0072]
图18为z
2h
‑
lod色谱图(0.35ng/ml)。
[0073]
图19为杂质sm
1k
的浓度与峰面积的线性关系。
[0074]
图20为杂质sm
1l
的浓度与峰面积的线性关系。
[0075]
图21为杂质z
2d
的浓度与峰面积的线性关系。
[0076]
图22为杂质z
2h
的浓度与峰面积的线性关系。
[0077]
图23为供试品溶液
‑
sm
1l
通道色谱图(1mg/ml)。
[0078]
图24为供试品溶液
‑
sm
1k
通道色谱图(1mg/ml)。
[0079]
图25为供试品溶液
‑
z
2d
通道色谱图(1mg/ml)。
[0080]
图26为供试品溶液
‑
z
2h
通道色谱图(1mg/ml)。
具体实施方式
[0081]
所举实施例是为了更好地对本发明进行说明，但并不是本发明的内容仅局限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
[0082]
本发明实施例中，质谱仪选择triple quand api4500；液相色谱仪选择lc
‑
30a。
[0083]
本发明实施例中，色相色谱的条件为：固定相选择shim
‑
pack vp ods 4.6mm
×
250mm，5μm；流动相选择为：以10mm乙酸铵水溶液(含0.05％甲酸)为流动相a，甲醇为流动相b；梯度洗脱的程序如下表1所示；流速为1.0ml/min；柱温30℃；进样器温度为4℃；进样体积为20μl。
[0084]
表1液相色谱梯度洗脱程序
[0085]
时间(min)流动相a流动相b0.0150502505073070223070235953059530.15050405050
[0086]
本发明实施例中，质谱的条件为：采用串联四极杆质谱检测器，esi离子源，mrm正离子模式，雾化气(gs1)：55psi，加热辅助气(gs2)：55psi，门帘气：35psi，碰撞气：9psi，喷雾电压：5000v，离子源温度：550℃；驻留时间：100msce；扫描速率：10da/sresolution q1:unit，resolution q3:unit；然后取对杂质sm
1l
、sm
1k
、z
2d
和z
2h
各适量，分别用乙腈溶解并稀
释制成每1ml中约含1μg的溶液，取适量溶液，流动注射进入质谱，记录质谱图，如图1
‑
图4所示，确认杂质sm
1l
的母离子为270.1，子离子为135.1，杂质sm
1k
的母离子为270.1，子离子为135.1，杂质z
2d
的母离子为532.3，子离子为296.1，杂质z
2h
的母离子为504.4，子离子为296.4，具体的检测对应杂质的离子对及其他质谱参数如下表2所示。
[0087]
表2质谱检测参数表
[0088]
待测目标物母离子子离子dpceepcxpcadsm
1l
270.1135.130301069sm
1k
270.1135.130301069z
2d
532.3296.140401069z
2h
504.4296.444441069
[0089]
本发明实施例中，供试品浓度为1mg/ml；对照品浓度为2.5ng/ml。供试品溶液配制为：取待测药品100mg，精密称定，加2ml n，n
‑
二甲基乙酰胺溶解并用稀释剂稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液。对照品溶液配制为：取sm
1l
、sm
1k
、z
2d
和z
2h
对照品各适量，精密称定，加稀释剂溶解并稀释制成每1ml中约含杂质2.5ng的溶液，作为对照品溶液。灵敏度溶液配制为：精密量取对照品溶液适量，用稀释剂稀释制成每1ml中约含杂质0.75ng的溶液，作为灵敏度溶液。
[0090]
本发明实施例中，溶剂/稀释剂为乙腈。
[0091]
本发明实施例中，具体操作方法为：照高效液相色谱
‑
质谱法(中国药典2020年版四部通则0512和通则0431)测定。
[0092]
本发明实施例中，液相色谱系统适用性要求为：出峰顺序为sm
1l
、sm
1k
、z
2d
和z
2h
，灵敏度溶液色谱图中，sm
1l
、sm
1k
、z
2d
和z
2h
峰信噪比应不小于10，对照品溶液连续进样6次，杂质峰面积的相对标准偏差应不得过15.0％。
[0093]
本发明实施例中，按外标法以峰面积计算，供试品溶液中含sm
1l
、sm
1k
、z
2d
和z
2h
均不得过2.5ppm。
[0094]
实施例1空白稀释剂验证
[0095]
使用空白溶剂分别与杂质sm
1l
、sm
1k
、z
2d
和z
2h
进入液相色谱进行分析，分析结果如图5
‑
图8所示，空白溶剂在sm
1l
、sm
1k
、z
2d
和z
2h
峰保留时间处无色谱峰，对杂质检测无干扰。
[0096]
实施例2对照品溶液重复性验证
[0097]
配制sm
1l
、sm
1k
、z
2d
和z
2h
的对照品溶液，并精密量取20μl注入高效液相色谱
‑
质谱联用仪，每种杂质分别进样6次，色谱数据如下表3所示，其中每种杂质第6次进样的色谱图如图9
‑
图12所示，从表3可以看出，对照品溶液进样重复性良好。
[0098]
表3杂质对照品溶液色谱情况
[0099][0100][0101]
实施例3定量限验证
[0102]
对杂质sm
1k
、sm
1l
、z
2d
和z
2h
进行定量限测试，测试结果如下表4所示，其色谱图如图13
‑
15所示，从表中可以看出，sm
1k
、sm
1l
、z
2d
和z
2h
的定量限浓度分别约为0.710ng/ml、0.698ng/ml、0.747ng/ml和0.727ng/ml，定量限分别约为0.710ppm、0.698ppm、0.747ppm和0.727ppm，峰面积的rsd均小于15％，信噪比均大于10。
[0103]
表4杂质的定量限检测情况
[0104][0105][0106]
实施例4检测限验证
[0107]
对杂质sm1k、sm1l、z2d和z2h进行检测线测试，测试结果如下表5所示，其色谱图如
图16
‑
18所示，从表中可以得知，sm1k、sm1l、z2d和z2h的检测限浓度分别约为0.355ng/ml、0.349ng/ml、0.374ng/ml、0.363ng/ml，信噪比均大于3。
[0108]
表5杂质的检测线测试情况
[0109][0110]
实施例5线性关系验证
[0111]
分别对杂质sm1k、sm1l、z2d和z2h的浓度和峰面积做线性分析，各个杂质的分析情况如下表6，线性关系图如图19
‑
图22所示。
[0112]
表6杂质的浓度与峰面积的线性关系
[0113][0114]
从表6和图19可以得知：sm1k的浓度约在0.710
‑
4.733ng/ml范围内线性关系良好，
相关系数r＝0.9999；
[0115]
从表6和图20可以得知：sm1l的浓度约在0.698
‑
4.657ng/ml范围内线性关系良好，相关系数r＝0.9999；
[0116]
从表6和图21可以得知：z2d的浓度约在0.747
‑
4.981ng/ml范围内线性关系良好，相关系数r＝0.9994；
[0117]
从表6和图22可以得知：z2h的浓度约在0.727
‑
4.845ng/ml范围内线性关系良好，相关系数r＝0.9999。
[0118]
实施例6准确度和精密度验证
[0119]
取待测药品100mg，精密称定，置10ml量瓶中，加2ml dma溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品贮备液，精密量取该溶液1ml，置10ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0120]
加标溶液：精密移取杂质混合对照品溶液(约200ng/ml)0.125ml和供试品贮备液1ml，置10ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得(杂质相对含量2.5ppm，平行配制6份)。精密移取杂质混合对照品溶液0.125ml，置10ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，取20μl进样，结果如下表7所示，记录色谱图，如图23
‑
图26所示。
[0121]
表7每种杂质测定的准确度和精密度情况
[0122]
[0123][0124]
实施例7溶液稳定性验证
[0125]
取对照品溶液在室温放置约0、5、11、15、21小时后进样，计算每个时间点样品峰面积的rsd，结果如下表8所示。
[0126]
表8杂质对照品溶液峰面积的rsd情况
[0127][0128]
取供试品溶液和加标供试品溶液分别在室温放置约0、6、10、14、18小时进样，计算每个时间点样品峰面积的rsd，结果如下表9所示。
[0129]
表9杂质供试品溶液和加标供试品溶液峰面积的rsd情况
[0130][0131]
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。