部对照 峰曲线下面积的积分；
[0232] (e)将标记抗-TNFa药物含量除以标记内部对照含量测得第一比率；
[0233] (f)除以步骤（C)和步骤（d)得到的积分测得第二比率；和
[0234] (g)比较步骤（e)测得的第一比率与步骤（f)测得的第二比率，从而通过参比内部 对照测得存在的自身抗体或其水平。
[0235] 在一相关实施方式中，步骤（e)测得的第一比率为约80:1-约100:1。在另一 相关实施方式中，步骤（e)测得的第一比率为约100:1。在一相关实施方式中，标记内部 对照是生物胞素 -Alexa 488。在某些实施方式中，所分析样品中标记内部对照（如生物胞 素 -Alexa 488)含量约50-200pg/100yL。在某些其他实施方式中，所分析样品中标记内部 对照（如生物胞素 -Alexa 488)含量约 100-约 200pg/100 yL、约 150-约 200pg/100 yL、约 50-约150pg/100yL或约50-约100pg/100yL。在其他实施方式中，所分析样品中标记内 部对照（如生物胞素的-Alexa 488)含量约为50、75、100、125、150、175或200?8/10(^匕
[0236] 在一相关实施方式中，抗-TNF α药物选自：REMICADE?(英夫利昔单抗）、 ENBREL?(依那西普）、HUMIRA?(阿达木单抗）、CMMZIA? (赛妥珠单抗）和其组合。在 一相关实施方式中，抗-TNFa药物是英夫利昔单抗（REMICADE?)。在一相关实施方式中， 抗-TNF α药物是阿达木单抗（HUMIRAtm)。在一相关实施方式中，抗-TNF α药物是依那西 普（ENBRELtm)。在一相关实施方式中，抗-TNF α药物是CIMZIA? (赛妥珠单抗）。在一 相关实施方式中，定量检测自身抗体。在一相关实施方式中，标记的复合物先洗脱，然后是 游离的标记抗-TNFa抗体。在一相关实施方式中，样品是血清。在一相关实施方式中，样 品获自接受抗-TNFa药物治疗的对象。在一相关实施方式中，分子大小排阻层析是分子 大小排阻高效液相层析（SE-HPLC)。在一相关实施方式中，自身抗体选自：人抗-小鼠抗体 (HAM)、人抗-嵌合抗体（HACA)、人抗-人源化抗体（HAHA)和其组合。在一相关实施方式 中，定量检测自身抗体。
[0237] 在一相关实施方式中，本发明提供确定后续疗程的方法。该后续疗程包括：当 抗-TNF α药物水平高和自身抗体水平低时共同给予免疫抑制药物和抗-TNF α药物。在 另一相关实施方式中，所述后续治疗方案包括：当抗-TNFa药物水平中等和自身抗体水 平低时，提高抗-TNF α药物的水平和同时给予免疫抑制药物。在另一相关的实施方式中， 所述后续治疗方案包括：当抗-TNFa药物水平中等和自身抗体水平中等时，给予不同的 抗-TNFa药物。在另一相关的实施方式中，所述后续治疗方案包括：当抗-TNFa药物水平 低和自身抗体水平高时，给予不同的抗-TNFa药物。在另一相关的实施方式中，给予阿达 木单抗（HUMIRA tm)代替英夫利昔单抗（REMICADE?)。
[0238] 在某些实施方式中，本发明提供检测样品中抗-TNFa药物的存在或水平和存在 抗-TNF α药物自身抗体的存在或水平的试剂盒，该试剂盒包括：
[0239] (a)含一定量的标记TNF α的第一检测底物；
[0240] (b)含一定量的标记抗-TNFa药物的第二检测底物；
[0241] (c)任选的第三检测底物，其含一定量的标记TNF a和一定量的标记内部对照；
[0242] (d)任选的第四检测底物，其含一定量的标记抗-TNFa药物和一定量的标记内部 对照；
[0243] (e)任选包括用于提取对象样品的工具；和
[0244] (f)任选包括如何使用该试剂盒的说明书小册子。
[0245] 在一相关实施方式中，所述基质包括能沉积本发明化学物质的任何材料，包括但 不限于：硝化纤维素、硅胶、薄层层析基质、木制小棍、纤维素、棉花、聚乙烯、其组合等等。在 另一相关实施方式中，可将本发明所用的化学物质以有序的阵列、矩阵或矩阵阵列形式沉 积在上述材料上。
[0246] 在一相关实施方式中，所述试剂盒还包括检测标记TNF a、标记抗-TNF a药物和/ 或标记内部对照的方法。在一相关实施方式中，该试剂盒还包括检测方法，包括但不限于： 焚光标记检测，UV-幅射光检测或放射性碘暴光。在一相关实施方式中，该试剂盒还包括分 子大小排阻高效液相层析（SE-HPLC)仪器。在一相关实施方式中，所述第一、第二、第三和 第四检测底物选自：硝化纤维素、硅胶和分子大小排阻层析的介质。在一相关实施方式中， 抗-TNF a药物选自：REMICADE?(英夫利昔单抗）、ENBREL?(依那西普）、HUMIRA?(阿达木 单抗）、CIMZIA? (赛妥珠单抗）和其组合。在一相关实施方式中，标记TNFa是荧光标记 TNFa。在一相关实施方式中，样品是血清。在一相关实施方式中，样品获自接受抗-TNFa 药物治疗的对象。在一相关实施方式中，所述自身抗体选自：人抗-小鼠抗体（HAM)、人 抗-嵌合抗体（HACA)、人抗-人源化抗体（HAHA)和其组合。
[0247] 本发明有关物质的生理范围和水平
[0248] 用REMICADE?治疗的患者中REMICADE ?的治疗有效水平范围约为I-IOmg REMICADE?/每kg患者体重。在一些实施方式中，REMICADE?的治疗有效水平范围约为3-8mg REMICADE?/每kg患者体重。在一些实施方式中，REMICADE?的治疗有效水平范围约为5mg REMICADE?/每kg患者体重。
[0249] 典型的REMICADE? (英夫利昔单抗）剂量范围为约0.05-约80 μ g/ml。在一些实施 方式中，REMICADE?的剂量范围为约0. 05-约50 μ g/ml。在一些其他实施方式中，REMICADE? 的剂量范围为约〇. 05-约30 μ g/ml。在一些实施方式中，REMICADE?的剂量约为30 μ g/ml。 在一些其他实施方式中，REMICADE?的剂量约为50 μ g/ml。
[0250] 用HUMIRA?治疗的患者中HUMIRA ?的治疗有效水平范围为约0. 1-约IOmg HUMIRA?/每kg患者体重。在一些实施方式中，HUMIRA?的治疗有效水平范围为约0. 1-约 8mg HUMIRA?/每kg患者体重。在一些其他实施方式中，HUMIRA?的治疗有效水平范围约 为Img HUMIRA?/每kg患者体重。在一些实施方式中，HUMIRA?的治疗有效水平范围约为 0· 8mg HUMIRA?/ 每 kg 患者体重。
[0251] 典型的HUMIRA?剂量范围为约0. 05-约150 μ g/ml。在某些实施方式中，HUMIRA? 的剂量范围为约0.05-约100μg/ml。在某些其他实施方式中，HUMIRA?的剂量为约 0.05-约50 μ g/ml。在某些实施方式中，HUMIRA?的剂量约为30 μ g/ml。在某些实施方式 中，HUMIRA?的剂量约为32 μ g/ml。在某些其他实施方式中，HUMIRA ?的剂量约为50 μ g/ ml 〇
[0252] V.示例疾病和用于治疗其的治疗抗体
[0253] 在某些实施方式中，本发明采用单克隆抗体治疗剂。表1提供了已获批准 或目前正在开发中的治疗用单克隆抗体的示例名单。在2006年PhRMA的题目为 "418Biotechnology Medicines in Testing Promise to Bolster the Arsenal Against DiseaSe(允许测试以加强针对疾病的储备的418种生物技术药物）"的报告中披露了临床 开发和已获批准的单克隆抗体产品的扩大名单。
[0254] 特别优选的治疗用抗体包括但不限于抗-TNFa单克隆抗体，例如⑴小鼠-人 IgGl-κ轻链抗-TNFa单克隆抗体REMICADE?(英夫利昔单抗），（2)人TNF受体2与人 IgGl的融合蛋白ENBREL?(依那西普）和（3)完全的人IgGl-κ轻链抗-TNFa单克隆抗 体HUMIRA?(阿达木单抗）。构建的其他二种抗-TNF a抗体在关键的III期临床试验中对 患同样疾病的一些患者显示出可靠性，这二种抗体是：(4) PEG化的人源化抗-TNFa单克隆 抗体Fab片段一Cl MZI A?i CD870 (赛妥珠单抗）和（5)完全的人IgGl- κ轻链抗-TNF a 单克隆抗体一CNTO 148 (戈利木单抗（golimlunab))。
[0255] 治疗用的一类优选抗体是抗-TNFa单链单克隆抗体，可用于治疗许多自 身免疫疾病，如类风湿关节炎、青少年特发性关节炎、强直性脊柱炎（白赫铁列夫症 (Bechterew))、炎性肠病（克罗恩病和溃疡性结肠炎）、严重的银肩病、慢性眼葡萄膜炎、严 重的结节病和韦格纳肉芽肿病。
[0256] 除了用于检测抗-TNF α抗体的生物利用度/浓度外，本发明也适合用于检测机体 内所用的任何治疗抗体的生物利用度/浓度，例如为治疗和诊断目的。以下表1也提供了 与体内应用的各种治疗性单克隆抗体相关的医学指示症状（indication)名单。
[0257] 在其他实施方式中，本发明方法适合用于检测治疗性抗体的自身抗体的存在或浓 度水平。
[0258] 因此，本发明的方法可用于最优化包括给予对象治疗性抗体的治疗（或诊断）。 所述方法可用于最优化治疗（或诊断）一种或多种疾病或失调，包括以下疾病的一种或多 种：
[0259] 传染病，如呼吸道合胞病毒（RSV)、HIV、炭疽、念珠菌病、葡萄球菌感染、丙型肝炎。
[0260] 自身免疫疾病，如类风湿关节炎、克罗恩病、B-细胞非何杰金淋巴瘤、多发性硬化 症、SLE、强直性脊柱炎、狼疮、银肩病关节炎、全身性红斑狼疮。
[0261] 炎性疾病，如类风湿关节炎（RA)、青少年特发性关节炎、强直性脊柱炎（白赫铁列 夫症）、炎性肠病（克罗恩病和溃疡性结肠炎）、严重的银肩病、慢性眼葡萄膜炎、结节病、韦 格纳肉芽肿病和其他炎性为主要特征的疾病。
[0262] 血液病，如败血病、败血病休克、突然发作的夜间血红蛋白尿和溶血性尿毒综合 征。
[0263] 癌症，如结肠直肠癌、非何杰金氏淋巴瘤、慢性B-淋巴细胞白血病、可复原的大细 胞淋巴瘤、头颈鳞状上皮细胞癌、治疗HER2-过表达的转移性乳腺癌、急性髓样白血病、前 列腺癌（如腺癌）、小细胞肺癌、甲状腺癌、恶性黑色素瘤、实体瘤、乳腺癌、早期HER2-阳性 乳腺癌、一线非鳞状上皮NSCLC癌、AML、毛细胞白血病、神经母细胞瘤、肾癌、脑癌、骨髓瘤、 多发性骨髓瘤、骨转移、SCLC，头颈癌、一线胰腺癌、SCLC、NSCLC、头颈癌、血癌和实体瘤、晚 期实体瘤、胃肠癌、胰腺癌、皮肤T-细胞淋巴瘤、非皮肤T-细胞淋巴瘤、CLL、卵巢癌、前列腺 癌、肾细胞癌、表达间皮素的肿瘤、恶性胶质细胞瘤、转移性胰腺癌、血液恶性肿瘤、可复原 的皮肤大细胞Mb淋巴瘤、AML、骨髓异常增生综合症。
[0264] 心血管疾病，如动脉粥样硬化急性心肌梗塞、心肺分流术、心绞痛。
[0265] 代谢疾病，如糖尿病、I型糖尿病。
[0266] 消化道疾病，如克罗恩病、艰难梭菌（C. difficile)病，溃疡性结肠炎。
[0267] 眼睛疾病，如葡萄膜炎。
[0268] 遗传疾病，如阵发性夜间血红蛋白尿（PNH)。
[0269] 神经障碍性疾病，如骨关节炎疼痛和阿尔茨海默病。
[0270] 呼吸道疾病，如哮喘、慢性阻塞性肺病（COPD)、鼻息肉病、儿童哮喘病。
[0271 ] 皮肤病，如银肩病，包括慢性中等至严重的斑块状银肩病。
[0272] 移植物排斥，如急性肾移植排斥、逆转心肝移植物排斥、预防肾移植物排斥、预防 急性肾移植物排斥、肾移植排斥。
[0273] 其他疾病，如阑尾炎诊断、肾炎、绝经后骨质疏松（骨失调）、嗜酸细胞增多综合 征、嗜酸性细胞食道炎和花生过敏症。
[0274] 在一个实施方式中，所述疾病选自上述特定疾病和失调的一种或多种。
[0275]
【主权项】
1. 一种测定接受抗-TNF α药物治疗的对象中所述抗-TNF α药物有效量的方法， 所述方法包括： (a) 测量所述对象第一样品中的所述抗-TNFa药物的水平，包括： (i) 使所述第一样品接触一定量的标记TNFa，形成含所述标记的TNFa与所述 抗-TNF α药物的第一复合物；和 (ii) 用分子大小排阻层析检测所述第一复合物，从而检测所述抗-TNFa药物的所述 水平； (b) 测定所述对象第二样品中所述抗-TNFa药物的自身抗体的水平，包括： (i) 使第二样品接触一定量的标记抗-TNFa药物，形成含所述标记抗-TNFa药物与所 述自身抗体的第二复合物；和 (ii) 用分子大小排阻层析检测所述第二复合物，从而检测所述自身抗体的所述水平； 和 (c) 从步骤（a)测得的所述抗-TNFa药物水平中减去步骤（b)测得的所述自身抗体水 平，从而确定所述抗-TNF α药物的有效量。
2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（a) (ii)的检测包括： (1) 从作为分子大小排阻层析洗脱时间的函数的信号强度第一图像计算所述标记的 TNFa峰曲线下面积的积分； (2) 从所述第一图像计算所述第一复合物峰曲线下面积的积分； (3) 将步骤（2)得到的积分除以步骤⑴得到的积分确定比率；和 (4) 用所述标记的TNFa的所述量乘步骤（3)的所述比率。
3. 如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步骤（b) (ii)的检测包括： (1) 从作为分子大小排阻层析洗脱时间的函数的信号强度的第二图像计算所述标记 抗-TNF α药物峰曲线下面积的积分； (2) 从所述第二图像计算所述第二复合物峰曲线下面积的积分； (3) 将步骤（2)得到的积分除以步骤⑴得到的积分确定比率；和 (4) 用所述标记抗-TNF α药物的所述量乘步骤（3)的所述比率。
4. 如权利要求1-3任何一项所述的方法，其特征在于，所述第一和第二样品均是血清 样品。
5. 如权利要求1-4任何一项所述的方法，其特征在于，步骤（a) (ii)和/或步骤（b) (ii)的所述检测包括荧光标记检测。
6. -种最优化接受抗-TNF α药物治疗的对象中抗-TNF α药物治疗剂量的方法，所述 方法包括： (a) 按照权利要求1-5任何一项所述的方法测定所述抗-TNFa药物的有效量； (b) 比较所述抗-TNFa药物的该有效量与所述抗-TNFa药物的水平；和 (c) 根据步骤（b)的比较，确定所述对象的所述抗-TNF α药物的后续剂量，从而最优化 抗-TNF α药物的治疗剂量。
7. 如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法还包括： (d) 当所述抗-TNFa药物的有效量低于所述抗-TNFa药物所述水平时，提高所述 抗-TNF α药物的后续剂量。
8. 如权利要求7所述的方法，其特征在于，提高所述抗-TNF α药物的后续剂量，使所述 抗-TNFa药物的有效量约等于所述抗-TNFa药物的所述水平。
9. 如权利要求1-8任何一项所述的方法，其特征在于，所述抗-TNF a药物选自下组： REMICADE?(英夫利昔单抗）、ENBREL?(依那西普）、HUMIRA?(阿达木单抗）和CIMZ丨A? (赛妥珠单抗）和其组合。
10. 如权利要求1-8任何一项所述的方法，其特征在于，所述抗-TNF a药物是英夫利昔 单抗（REMICADE?) 〇
11. 如权利要求1-8任何一项所述的方