肾病生物标记的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及肾病以及用于诊断肾病的方法。
[0002] 发明背景
[0003] 肾病是一般术语，其描述肾无法过滤和去除血液中的废物产物的一类病症。存在 两种形式的肾病：急性肾损伤（AKI)和慢性肾病（CKD)。除非处于其最晚期的状态，否则CKD 通常是无症状的。因此，一般需要血液测试和/或尿测试来作出诊断。
[0004] 由肾病结果质量预后倡议（Kidney Disease Outcomes Quality Initiative， KDOQI)形成的CKD的定义是：
[0005] I.出现至少3个月的、由结构异常或功能异常（最通常基于白蛋白尿（例如尿白 蛋白/肌酸酐比率[UACR] > 30mg/g)升高）定义的肾损伤，和/或
[0006] 2.出现至少3个月的肾小球过滤速率（GFR) <60mL/min/l· 73m2。
[0007] 在该框架下，KDOQI然后将CKD分成五个期，如下：
[0008] · 1 期：GFR 彡 90mL/min/l. 73m2的肾损伤。
[0009] · 2 期：GFR 为 60-89mL/min/l. 73m2的肾损伤。
[0010] · 3 期：GFR 为 30-59mL/min/l. 73m2。
[0011] · 4 期：GFR 为 15-29mL/min/l. 73m2。
[0012] · 5期：GFR〈15mL/min/l. 73m2,或者通过透析或移植治疗的肾衰竭。
[0013] 在美国，基于1999-2006年国家健康与营养调查（National Health and Nutrition Examination Survey，NHANES)研究的数据，估计 11.1% (2240 万）20 岁以上的 成年人患有1-3期的CKD。还有80万20岁以上的美国成年人患有4期的CKD，并且多于30 万患有5期的CKD，并且接受血液透析。
[0014] 分析1988-1994年与1999-2004年之间的NHANES数据显示，CKD的流行度在每期 CKD中都在上升，但是分类为3期的CKD个体的流行度具有特别的升高。需要透析的患有 5期的CKD患者数也升高了。据估计，到2015年，将有多于700, 000位个体患有末期肾病 (ESRD)。
[0015] 虽然CKD可由原发性肾病（例如肾小球病、肾小管间质病、阻塞疾病以及多囊肾疾 病），但是在绝大多数患有CKD的患者中，肾损伤与例如糖尿病和高血压等医学症状有关。 在2008年，除了患有ESRD的患者外，48%的患有CKD的医疗保险患者患有糖尿病，91 %的 患有高血压，并且46%的患有动脉粥样硬化性心脏病。其他风险因素包括年龄、肥胖症、家 庭病史和人种。
[0016] CKD已经与多种不良健康结果有关。许多研究报道，30-59mL/min/l. 73m2的GFR与 死亡、心血管疾病、骨折、骨质疏松、感染、认知损害和虚弱的风险升高有关。类似地，蛋白尿 或白蛋白尿的严重程度与包括死亡、ESRD和心血管疾病在内的不良健康结果之间似乎存在 分级的关系。此外，由GFR降低和白蛋白尿（或蛋白尿）升高导致的不良结果的风险似乎 是独立的和倍增的。
[0017] 用于考虑筛选早期CKD的根据包括CKD的高并且上升的流行度、其已知的风险因 素、其众多不良健康结果、其长的无症状期、CKD的潜在筛选测试的有效性，以及可改变早期 CKD病程和减轻早期CKD并发症或其相关健康状况的治疗有效性。
[0018] 一些组织已经建议在选定的群体中进行CKD筛选。肾病：改进全球肾脏病预后组 织（KDIGO)建议，对所有患有高血压、糖尿病或心血管疾病的患者进行筛选。美国糖尿病协 会基于"专家顾问或临床经验"建议，对患有糖尿病的所有成年人进行每年筛选。高血压的 预防、检测、评价和治疗的联合委员会（JNC7)建议，对患有组合高血压和糖尿病的所有患 者进行每年筛选。国家肾脏基金也提倡筛选，其赞助了对患有高血压、糖尿病的所有成年人 或一名具有肾病、血压或糖尿病历史的主要亲戚进行免费CKD筛选。
[0019] 在患有1-3期CKD的大多数患者中，GFR缓慢降低。但是，根据个体不同，下降速 率会有变化，并且许多因素似乎都影响进程。因为1-3期的CKD通常以无症状形式发展，所 以检测早期CKD需要进行化验。
[0020] 一些组织建议监视患有CKD的患者的肾功能或肾损伤的变化。例如，肾病结果质 量预后倡议（KDOQI)建议，至少每年在患有CKD的成年人中估计GFR测量以预测ESRD的发 作，以及评价CKD治疗的效果。JNC7建议，每年在患有"肾病"的所有患者中定量测量白蛋 白量。KDOQI还建议，对肾功能恶化的CKD患者进行更频繁地监视。
[0021] 血液中出现的组织损伤后释放的细胞蛋白质越来越受重视，因为其在处理具有因 急性局部缺血/再灌注、神经学疾病、癌症、器官排斥或创伤所导致的组织损伤的患者中很 重要。脂肪酸结合蛋白（FABP)是一种这样的组织损伤生物标记。其为相对较小的细胞质 蛋白质（15kDa)，在例如心、肝等具有活性脂肪酸代谢的组织中丰富表达。现在已经鉴定了 九种不同类型的FABP，并且每种类型都表现出特征性组织分布模式。根据第一次发现它们 所处于的组织来对其进行命名，它们包括肝型（L-FABP/FABP1)、肠型（I-FABP/FABP2)、肌 肉和心脏型（H-FABP/FABP3)、脂肪细胞型（A-FABP/FABP4)、表皮型（E-FABP/FABP5)、回肠 型（I-FABP/FABP6)、脑型（B-FABP/FABP7)、髓磷脂型（M-FABP/FABP8)和睾丸型（T-FABP/ FABP9)。
[0022] FABP以高亲和力结合长链脂肪酸（FA)。它们的三级结构包括被视为充当用于FA 进入和离开的口的连接至螺旋-转角-螺旋基序的轻微椭圆的β_桶。它们的主要功能是 促进细胞内的长链脂肪酸运输，而其他功能包括通过介导脂肪酸信号转位至过氧化物酶体 增殖物活化的受体（PPAR)来调控基因表达。
[0023] FABPl在肾的近端小管、肝脏、肠、胰、肺和胃中表达。其被假定涉及由肠细胞进行 的脂质吸收并涉及肝细胞的脂质转运和脂蛋白代谢。其独特的结合特性和表面特性很可能 促进其特定的功能特性。与化学计量的其他FABP结合长链FA不同，每个FABPl分子结合 两个FA分子。其还结合多种其他小的疏水配体，如溶血磷脂、血红素和维生素 Κ。
[0024] US 7, 592, 148Β1公开了一种用于对人的肾病进行诊断或预后的方法，所述方法包 括检测肾组织或尿中的FABPl15Kami jo等（Diabetes Care2011 ;34:691-6)使用 CMIC ELISA 证实，随着肾功能的劣化FABPl的尿分泌升高，但是血清FABPl没有受到显著影响。这些方 法教导了确定尿中的FABPl作为样品基质。所述CMIC ELISA有市售以用于尿的FABPl分 析。US 7, 592, 148B1报道了从CKD患者采集的34种尿样本。此外，还确定了尿样本中的 NAG (N-乙酰-β -D-氨基葡糖苷酶）的量。NAG是存在于肾组织细胞中的标记酶，并且尿中 的NAG水平一般被视为肾组织损伤的指示。据确认，NAG的水平和FABPl的水平在标准情 况下正相关。然而，在15%的情况下，虽然NAG的水平高，但是FABP的水平低。