适的分析软件来确定。然后可以从分析细胞的中值荧光强度确定在给定的辐射样品中γΗ2ΑΧ的量。
[0079]通过LIBS用于磷定量的生物芯片的分析
[0080]在卡普顿-环氧树脂支持物上固定的蛋白质然后可以通过LIBS分析，例如通过激光微探针装置，以及用于快速和精确地移动支持物的XY移动装置进行分析。选择使用的消融激光束的波长，使其接近于形成加合物的化合物的波长:对于所描述的实施例，使用具有266纳米波长和4毫焦耳能量/5纳秒脉冲的掺钕的钇铝榴石脉冲激光器，或Nd:YAG激光器。两个反射镜可以引导激光束扫描支持物的表面。在其光学路径的开始，激光束可以通过光圈然后通过折射显微镜的物镜聚焦在待分析样品的表面上。样品的位置可以使用由CCD相机提供的图片通过移动装置来显示和调整，所述CCD相机位于激光微探针上面。样品可以通过固定装置(例如通过螺钉)定位和固定在XY移动装置上。移动装置可以10赫兹的频率操作，所述10赫兹的频率对应于在外部同步方式下激光发射的频率，在两个连续的激光发射之间以30微米移动。
[0081]对于等离子体的分析，光纤可以是，例如，放置于尽可能地接近等离子体的一端，光纤引导来自等离子体的光到分光计的入口狭缝，所述分光计配备有脉冲加强CCD相机(或ICXD相机)。例如，光谱分辨率对于100微米入口狭缝在410纳米处可以等于0.032。移动装置和ICCD相机可以例如通过适合的控制装置(例如由单个微计算机形成的)来控制。
[0082]脉冲激光和ICCD相机可以经由控制整个分析设备的控制装置来控制。
[0083]可以应用激光发射，并且可以获得例如扩展至波长范围从248纳米至258纳米的光谱窗口，该波长范围在固有磷(253.563纳米)的光谱谱线周围，并将该光谱窗口数字化，然后通过合适的装置存储在存储器中。然后控制装置可以影响移动装置移动样品到新的位置。
[0084]有利地，可以将管固定至激光微探针的固定部分，并使其有可能形成用于产生气流(如氩气)的装置，接近样品的表面，在所述样品上产生等离子体。以这种方式，等离子体发射的幅度可以增大，并且自动吸收的现象减少。
[0085]磷谱谱线在253.563纳米(IP253)所选择的强度是通过减去对应于254.120纳米和254.700纳米测量的强度的平均值的光谱背景强度来处理为锐值。靶蛋白质可以通过IP253谱线的所有锐值的和进行定量。
[0086]磷和硼的光谱可以可靠性因子Cdb来过滤，所述可靠性因子Cdb通过以下关系来确定:
[0087]Cdb= [((I β-Νβ)-σΝ)/( (Ib-Nb) + σ Ν) ] (I),
[0088]其中&表示硼的强度，NjP ο 1<分别表示波长大约249.084纳米和250.363纳米的基础强度的平均值和标准偏差，在所有的光谱上计算。
[0089]然后可以使用下面的关系从所选择的光谱定量对于靶蛋白的磷值:
[0090]值Ρ=Σ[(IP253-nP253)/(IB249-nB249)] (2)
[0091]其中IB249和IP 253分别表示硼和磷谱线的强度值，并且ηΡ253和ηΒ249分别表示在给定的光谱中硼和磷周围背景的平均强度，对应于由LIBS介质表面的扫描像素。
【主权项】
1.一种通过等离子体发射光谱用于定量分析的方法，所述等离子体是由激光束诱发的包含在生物芯片上的至少一个靶(201)的等离子体，其特征在于其包含佐剂(202)的使用，所述佐剂允许形成能够与所述至少一个靶(201)同时被消融的干燥基质(203)，配置所述干燥基质(203)以改善等离子体的分析性质，所述佐剂(202)具有发射光谱，佐剂的发射光谱谱线具有的波长与用于所述至少一个靶(201)的定量分析的光谱谱线的波长不同。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述至少一个靶(201)通过至少一个探针(211)在生物芯片上隔离，使得在每个探针(211)和与其对应的靶(201)之间形成探针-靶复合物。
3.如前述权利要求中任一项所述的分析方法，其特征在于所述佐剂(202)的使用允许非晶形结构的干燥基质(203)的形成。
4.如前述权利要求中任一项所述的分析方法，其特征在于所述佐剂(202)的使用允许晶体结构的干燥基质(203)的形成。
5.如权利要求2至4中任一项所述的分析方法，其特征在于形成所述干燥基质(203)以使得所述探针-靶复合物位于支持物(200)的表面，并且由一定数量的所述干燥基质(203)全部或部分地包住。
6.如权利要求2至4中任一项所述的分析方法，其特征在于所述干燥基质(203)和所述探针(211)固定至支持物(200)。
7.如权利要求2至4中任一项所述的分析方法，其特征在于形成干燥基质(203)的佐剂分子直接复合至探针(211)。
8.如权利要求2至4中任一项所述的分析方法，其特征在于形成干燥基质(203)的佐剂分子固定至支持物(200)，探针(211)固定至佐剂分子，佐剂分子固定至支持物(200)。
9.如权利要求2至4中任一项所述的分析方法，其特征在于通过在支持物(200)表面放置一层佐剂来形成一层干燥基质(203)，然后将探针(211)放置在因此形成的支持物(200)表面上的干燥基质(203)的表面上。
10.如前述权利要求中任一项所述的分析方法，其特征在于所述干燥基质(203)由吸收波长接近激光束波长的化合物来形成，从而激光使用的波长包括在所述干燥基质(203)的吸收光谱中。
11.如前述权利要求中任一项所述的分析方法，其特征在于所述佐剂(202)包含水和来自糖、多糖和二糖成分的溶液。
12.如前述权利要求中任一项所述的分析方法，其特征在于每个探针(211)用形成内部标准的标准化元素(405)标记。
13.如权利要求11所述的分析方法，其特征在于每个探针(211)通过接枝由标准化元素(405)标记。
14.如权利要求11或12所述的分析方法，其特征在于标准化元素(405)由硼构成。
15.—种包含支持物(200)的设备，所述支持物(200)包含多个位点，每个位点包含多个探针(211)，所述探针(211)同时接枝至允许干燥基质(203)形成的佐剂(202)分子。
16.如权利要求15所述的设备，其特征在于所述支持物(200)包含有机化合物、单片化合物或有机金刚石化合物。
17.用于进行如权利要求1至14中任一项所述的方法的溶液，其特征在于所述溶液包含允许干燥基质(203)形成的佐剂(202)。
18.如权利要求17所述的溶液，其特征在于所述溶液包含确定比例的由激光束诱导的等离子体光学信号的标准化元素(405)。
【专利摘要】一种通过等离子体发射光谱用于定量分析的方法，所述等离子体是由激光束诱发的包含在生物芯片上的至少一个靶(201)的等离子体，其特征在于所述方法包含佐剂(202)的使用，所述佐剂允许形成能够与所述至少一个靶(201)同时被消融的干燥基质(203)，配置所述干燥基质(203)以改善等离子体的分析性质，所述佐剂(202)具有发射光谱，佐剂的发射光谱谱线具有的波长与用于所述至少一个靶(201)的定量分析的光谱谱线的波长不同。
【IPC分类】G01N21-73, G01N21-71, G01N33-543
【公开号】CN104737001
【申请号】CN201380054861
【发明人】N·库隆, N·乌林, C·法尔克, E·勒菲弗, S·舍维拉尔
【申请人】原子能和能源替代品委员会
【公开日】2015年6月24日
【申请日】2013年9月13日
【公告号】CA2884867A1, EP2895845A1, US20150233837, WO2014041145A1