一种盐酸缬更昔洛韦杂质的分析检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及分析化学技术领域，具体涉及一种盐酸缬更昔洛韦杂质的HPLC分析检测方法，更具体地说，涉及一种分析检测鸟嘌呤、更昔洛韦、甲氧基甲基鸟嘌呤、更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯、单乙酰氧基更昔洛韦、单氯代更昔洛韦或含上述6中杂质的药物或其制剂的方法。
【背景技术】
[0002]盐酸缬更昔洛韦原料药在合成工艺过程中和在盐酸缬更昔洛韦固体制剂放置过程中可能产生六种主要杂质，分别为鸟嘌呤、更昔洛韦、甲氧基甲基鸟嘌呤、更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯、单乙酰氧基更昔洛韦、单氯代更昔洛韦。
[0003]上述6种杂质，其含量的多少直接影响了盐酸缬更昔洛韦或其制剂的质量，容易引起人体不良反应及药物刺激性，也决定了药品的保质期长短。美国药典中盐酸缬更昔洛韦片剂有关物质检测方法采用特殊的苯基柱，粒径为3.0?3.5 μ m，在实际应用中色谱柱压力高，容易堵塞，需要添加预柱处理，造成色谱系统压力更大，成本增加，不适合在实际生产中推广应用，即不具有广泛适用性；现有的盐酸缬更昔洛韦及其制剂文献中没有明确报道该6种杂质的定量和定性方法，也无文献报道采用一种普通色谱柱就能准确分离检测该6种杂质的方法。
【发明内容】
[0004]针对现有技术中存在的不足，本发明所要解决的技术问题是如何采用一般的苯基色谱柱准确地分析检测盐酸缬更昔洛韦原料药及其制剂中上述6种杂质。本发明为解决以上技术问题，首次在流动相中创造性地加入一定浓度的含铵的甲酸盐或乙酸盐，彻底解决了主峰与杂质峰以及相邻杂质峰之间分离困难的难题，操作简便、灵敏度高、准确性好。提供了一种盐酸缬更昔洛韦的有关物质检测方法，用于分析检测盐酸缬更昔洛韦原料药或其制剂中的杂质，本方法特别适合使用一般的硅烷键合硅胶柱、尤其是苯基硅烷键合硅胶色谱柱分析检测盐酸缬更昔洛韦原料药或其制剂中的6种杂质，经文献检索，尚无类似文献报道。
[0005]本发明提供的技术方案是:
[0006]一种盐酸缬更昔洛韦有关物质的分析检测方法，包括如下步骤:
[0007]a.取盐酸缬更昔洛韦药物或其制剂，用水、稀盐酸、有机溶剂的水溶液或流动相溶解，配制成含盐酸缴更昔洛韦400?600 μ g/ml的溶液，优选500 μ g/ml ；
[0008]所述有机溶剂的水溶液选自醇类或腈类的水溶液，优选甲醇或乙腈水溶液。
[0009]优选用稀盐酸或流动相溶解，所述稀盐酸浓度为0.0005?0.002mol/L，最优选0.001mol/L ；
[0010]b.取步骤a所得溶液适量，注入到高效液相色谱仪中，用流动相进行冲洗，所述高效液相色谱仪中的高效液相色谱柱以硅烷键合硅胶为填充剂，优选以苯基硅烷键合硅胶为填充剂；
[0011]C.使用波长为240?260nm的紫外光检测，最佳检测波长为254nm。
[0012]所述盐酸缬更昔洛韦药物或其制剂选自盐酸缬更昔洛韦原料药、盐酸缬更昔洛韦片、盐酸缬更昔洛韦胶囊、盐酸缬更昔洛韦颗粒剂等。
[0013]所述盐酸缬更昔洛韦药物或其制剂中含有如下六种杂质中的一种或两种以上，优选五种或六种:鸟嘌呤、更昔洛韦、甲氧基甲基鸟嘌呤、更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯、单乙酰氧基更昔洛韦、单氯代更昔洛韦。
[0014]所述流动相由胺类-无机盐混合溶液和色谱纯有机溶剂组成，所述胺类-无机盐混合溶液与色谱纯有机溶剂的体积比为99:1?90:10，体积比优选为98:2?92:8，更优选为97:3?93:7，最优为为95:5。
[0015]所述色谱纯有机溶剂优选甲醇或乙腈，最优为甲醇。
[0016]所述胺类-无机盐混合溶液的pH值为5.0?6.0，优选5.2?5.8。所述胺类-无机盐混合溶液中含胺类0.1 %?0.5% (v/v)、含无机盐0.01?0.05mol/L，所述胺类-无机盐混合溶液中还含有用于调节PH值的有机酸。
[0017]所述胺类-无机盐混合溶液可以理解为缓冲溶液。
[0018]所述胺类优选二乙胺、三乙胺，最优为三乙胺。
[0019]所述无机盐优选甲酸铵、乙酸铵，最优为乙酸铵。
[0020]所述有机酸优选甲酸、三氟乙酸，最优为三氟乙酸。
[0021]与现有技术相比，本发明分析检测方法的优点和有益效果在于:
[0022]本发明的盐酸缬更昔洛韦有关物质的分析检测方法，经文献检索，为首次在流动相中创造性地加入一定浓度的含铵的甲酸盐或乙酸盐，彻底解决了主峰与杂质峰以及相邻杂质峰之间分离困难的难题，操作简便、灵敏度高、准确性好。用于分析检测盐酸缬更昔洛韦或其制剂杂质时，主峰与杂质、相邻杂质之间均有较满意的分离度，各个杂质均有低的检测限，最低检测限约为0.02 μ g/ml，定量限约为0.05 μ g/ml ο在各杂质浓度在0.05?20 μ g/ml的范围内有良好的线性关系，相关系数尚达0.9999。
【附图说明】
[0023]图1为实施例1中盐酸缬更昔洛韦原料药的HPLC分析图；
[0024]图2为实施例1中盐酸缬更昔洛韦片剂的HPLC分析图；
[0025]图3为实施例2中盐酸缬更昔洛韦原料药加六个杂质的HPLC分析图；
[0026]图4为实施例3中盐酸缬更昔洛韦片剂加五个杂质的HPLC分析图；
[0027]图5为实施例4中盐酸缬更昔洛韦片剂加五个杂质的HPLC分析图；
[0028]图6为实施例5中盐酸缬更昔洛韦胶囊剂内容物加五个杂质的HPLC分析图；
[0029]图7为实施例6中盐酸缬更昔洛韦胶囊剂内容物加五个杂质的HPLC分析图；
[0030]图8为实施例7中盐酸缬更昔洛韦颗粒剂加五个杂质的HPLC分析图；
[0031]图9为实施例8中盐酸缬更昔洛韦颗粒剂加五个杂质的HPLC分析图。
【具体实施方式】
[0032]为便于本领域技术人员理解本
【发明内容】
，下面申请人将结合具体实施例进一步描述本发明的技术方案，但以下内容不以任何方式限制本发明。
[0033]以下诸实施例中，所用主要试剂及原材料介绍如下:
[0034]Methoxymethylguanine (甲氧基甲基鸟嘌呤)标准品；
[0035]Ganciclovir Mono-N-Methyl Valinate (更昔洛韦 1-N-甲基结I氨酸醋)标准品；
[0036]Isomonochloro Ganciclovir (单氯代更昔洛韦)标准品；
[0037]Monoacetoxy Ganciclovir (单乙酰氧基更昔洛韦)标准品，CAS Number:88110-89-8 ；
[0038]盐酸缬更昔洛韦原料药、片剂、胶囊剂、颗粒剂均为申请人根据常规现有技术自制。
[0039]其他均为常规试剂和原材料。
[0040]以下诸实施例中，未注明单位的百分比均指质量百分比。
[0041]实施例1
[0042]色谱条件:以苯基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为pH = 5.6的三乙胺甲酸铵缓冲液(除水以外含有三种组分三乙胺、甲酸铵以及三氟乙酸，其含量分别为:0.2% (v/v)三乙胺、0.05mol/L甲酸铵及适量的三氟乙酸，其中适量的三氟乙酸用以调节所述缓冲液的pH至5.6)-甲醇，所述缓冲液与甲醇体积比为95:5，流速1.0ml/min，检测波长254nm，色谱柱:COSMOS IL 5PE-MS 150 X 4.6mm，5 μ m，柱温 35°C，进样量:50 μ I。
[0043]供试品洛液制备:
[0044]取盐酸缬更昔洛韦原料药约50mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加0.0Olmol/L盐酸溶解并稀释至刻度，作为盐酸缬更昔洛韦供试品溶液。
[0045]取盐酸缬更昔洛韦片，研细，精密称取适量(约相当于含盐酸缬更昔洛韦主药50mg)置10ml容量瓶中，加0.0Olmol/L盐酸溶解并稀释至刻度，作为盐酸缬更昔洛韦片供试品溶液。
[0046]混合杂质对照品溶液制备:
[0047]取鸟嘌呤、更昔洛韦及其他四种杂质各适量，精密称定，置10ml容量瓶中，用
0.001mol/L盐酸作稀释剂，配制成鸟嘌呤5 μ g/ml、更昔洛韦10 μ g/ml以及甲氧基甲基鸟嘌呤、更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯、单乙酰氧基更昔洛韦、单氯代更昔洛韦均I μ g/ml的混合杂质对照品溶液。
[0048]以上三种溶液各取50 μ I注入液相色谱仪，记录色谱图，按面积以外标法计算鸟嘌呤和更昔洛韦的含量，按面积归一化法计算其他杂质的含量。
[0049]测得盐酸缬更昔洛韦原料药中各杂质含量为鸟嘌呤0.007%，更昔洛韦0.416%,更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯0.120%，单乙酰氧基更昔洛韦0.117%，其余两个杂质未检出。盐酸缬更昔洛韦原料药的HPLC分析图见附图1所示，其中保留时间3.036min为鸟嘌呤色谱峰，3.826min为更昔洛韦色谱峰，7.550min和8.21 Imin为盐酸缬更昔洛韦两个色谱主峰，8.950min和9.978min为更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯两个色谱峰，10.777min为单乙酰氧基更昔洛韦色谱峰。
[0050]盐酸缬更昔洛韦片中各杂质含量为鸟嘌呤0.019%，更昔洛韦0.278%，更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯0.175%，单乙酰氧基更昔洛韦0.068%，其余两个杂质未检出。盐酸缬更昔洛韦片的HPLC分析图见附图2所示，其中保留时间3.038min为鸟嘌呤色谱峰，3.834min为更昔洛韦色谱峰，7.570min和8.232min为盐酸缬更昔洛韦两个色谱主峰，8.992min和9.997min为更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯色谱峰，10.789min为单乙酰氧基更昔洛韦色谱峰。
[0051]实施例2
[0052]色谱条件:以苯基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为pH = 5.3的三乙胺乙酸铵缓冲液(除水以外含有三种组分三乙胺、乙酸铵以及甲酸，其含量分别为:0.25%