g/ml、更昔洛韦10 μ g/ml以及甲氧基甲基鸟嘌呤、更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯、单乙酰氧基更昔洛韦均I μ g/mi，加流动相溶解并稀释至刻度，作为盐酸缬更昔洛韦胶囊混合溶液。
[0083]取50 μ I盐酸缬更昔洛韦胶囊混合溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0084]第二个盐酸缬更昔洛韦峰的理论塔板数为7639，分离度为:鸟嘌呤与更昔洛韦为5.45，更昔洛韦与甲氧基甲基鸟嘌呤为13.74，甲氧基甲基鸟嘌呤与第一个盐酸缬更昔洛韦主峰为2.69，第二个盐酸缬更昔洛韦主峰与第一个更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯峰为1.76，第二个更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯峰与单乙酰氧基更昔洛韦峰为1.53。各个杂质最低检测限约为0.03 μ g/ml，定量限约为0.08 μ g/ml。在各杂质浓度在0.08?20 μ g/ml的范围内有良好的线性关系，相关系数为0.9996?0.9999。
[0085]盐酸缬更昔洛韦胶囊加五个杂质的HPLC分析图见附图7所示，其中保留时间
3.065min为鸟嘌呤色谱峰，3.950min为更昔洛韦色谱峰，7.068min为甲氧基甲基鸟嘌呤色谱峰，7.922min和8.642min为盐酸缬更昔洛韦两个色谱主峰，9.500min和10.498min为更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯两个色谱峰，11.242min为单乙酰氧基更昔洛韦色谱峰。
[0086]实施例7
[0087]色谱条件:以苯基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为pH = 5.7的二乙胺乙酸铵缓冲液(除水以外含有三种组分二乙胺、乙酸铵以及三氟乙酸，其含量分别为:0.45% (v/v)二乙胺、0.05mol/L乙酸铵及适量的三氟乙酸，其中适量的三氟乙酸用以调节所述缓冲液的pH至5.7)-乙腈，所述缓冲液与乙腈体积比为94:6，流速1.0ml/min，检测波长254nm，色谱柱:COSMOS IL 5PE-MS 150 X 4.6mm，5 μ m，柱温 35°C，进样量:50 μ I。
[0088]供试品溶液的制备:
[0089]取盐酸缬更昔洛韦颗粒，研细，精密称取适量(约相当于含盐酸缬更昔洛韦主药50mg)置10ml容量瓶中，加入鸟嘌呤、更昔洛韦、甲氧基甲基鸟嘌呤、更昔洛韦1_N_甲基缬氨酸酯、单乙酰氧基更昔洛韦五个杂质各适量，配制成鸟嘌呤5 μ g/ml、更昔洛韦10 μ g/ml以及甲氧基甲基鸟嘌呤、更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯、单乙酰氧基更昔洛韦均I Ug/ml，加流动相溶解并稀释至刻度，作为盐酸缬更昔洛韦颗粒混合溶液。
[0090]取50 μ I盐酸缬更昔洛韦颗粒混合溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0091]第二个盐酸缬更昔洛韦峰的理论塔板数为8107，分离度为:鸟嘌呤与更昔洛韦为
4.81，更昔洛韦与甲氧基甲基鸟嘌呤为13.08，甲氧基甲基鸟嘌呤与第一个盐酸缬更昔洛韦主峰为2.70，第二个盐酸缬更昔洛韦主峰与第一个更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯峰为1.86，第二个更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯峰与单乙酰氧基更昔洛韦峰为0.92。各个杂质最低检测限约为0.02 μ g/ml，定量限约为0.06 μ g/ml。在各杂质浓度在0.06?20 μ g/ml的范围内有良好的线性关系，相关系数为0.9995?0.9999。
[0092]盐酸缬更昔洛韦颗粒加五个杂质的HPLC分析图见附图8所示，其中保留时间
2.857min为鸟嘌呤色谱峰，3.557min为更昔洛韦色谱峰，6.167min为甲氧基甲基鸟嘌呤色谱峰，6.902min和7.475min为盐酸缬更昔洛韦两个色谱主峰，8.185min和8.979min为更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯两个色谱峰，9.328min为单乙酰氧基更昔洛韦色谱峰。
[0093]实施例8
[0094]色谱条件:以苯基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为pH = 5.4的三乙胺乙酸铵缓冲液(除水以外含有三种组分三乙胺、乙酸铵以及三氟乙酸，其含量分别为:0.45% (v/v)三乙胺、0.05mol/L乙酸铵及适量的三氟乙酸，其中适量的三氟乙酸用以调节所述缓冲液的pH至5.4)-甲醇，所述缓冲液与甲醇体积比为94:6，流速1.0ml/min，检测波长254nm，色谱柱:COSMOS IL 5PE-MS 150 X 4.6mm，5 μ m，柱温 35°C，进样量:50 μ I。
[0095]供试品溶液的制备:
[0096]取盐酸缬更昔洛韦颗粒，研细，精密称取适量(约相当于含盐酸缬更昔洛韦主药40mg)置10ml容量瓶中，加入鸟嘌呤、更昔洛韦、甲氧基甲基鸟嘌呤、更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯、单乙酰氧基更昔洛韦五个杂质各适量，配制成鸟嘌呤5 μ g/ml、更昔洛韦10 μ g/ml以及甲氧基甲基鸟嘌呤、更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯、单乙酰氧基更昔洛韦均I Ug/ml，加流动相溶解并稀释至刻度，作为盐酸缬更昔洛韦颗粒混合溶液。
[0097]取50 μ I盐酸缬更昔洛韦颗粒混合溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0098]第二个盐酸缬更昔洛韦峰的理论塔板数为8107，分离度为:鸟嘌呤与更昔洛韦为4.41，更昔洛韦与甲氧基甲基鸟嘌呤为11.78，甲氧基甲基鸟嘌呤与第一个盐酸缬更昔洛韦主峰为1.90，第二个盐酸缬更昔洛韦主峰与第一个更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯峰为1.65，第二个更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯峰与单乙酰氧基更昔洛韦峰为1.46。各个杂质最低检测限约为0.02 μ g/ml，定量限约为0.05 μ g/ml。在各杂质浓度在0.05?20 μ g/ml的范围内有良好的线性关系，相关系数为0.9997?0.9999。
[0099]盐酸缬更昔洛韦颗粒加五个杂质的HPLC分析图见附图9所示，其中保留时间
2.992min为鸟嘌呤色谱峰，3.784min为更昔洛韦色谱峰，6.701min为甲氧基甲基鸟嘌呤色谱峰，7.355min和7.992min为盐酸缬更昔洛韦两个色谱主峰，8.713min和9.632min为更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯两个色谱峰，10.428min为单乙酰氧基更昔洛韦色谱峰。
【主权项】
1.一种盐酸缬更昔洛韦有关物质的分析检测方法，包括如下步骤: a.取盐酸缬更昔洛韦药物或其制剂，用水、稀盐酸、有机溶剂的水溶液或流动相溶解，配制成含盐酸缬更昔洛韦400~600μ8/πι1的溶液； 所述有机溶剂的水溶液选自醇类或腈类的水溶液； 所述稀盐酸浓度为0.0005-0.002mol/L ； b.取步骤a所得溶液，注入到高效液相色谱仪中，用流动相进行冲洗； c.使用波长为240~260nm的紫外光检测； 所述流动相由胺类-无机盐混合溶液和色谱纯有机溶剂组成，所述胺类-无机盐混合溶液与色谱纯有机溶剂的体积比为99:1~90:10，体积比优选为98:2~92:8，更优选为97:3-93:7，最优为为95:5 ; 所述色谱纯有机溶剂优选甲醇或乙腈； 所述胺类-无机盐混合溶液的PH值为5.0-6.0 ;所述胺类-无机盐混合溶液中含胺类0.1%~0.5% (v/v)、含无机盐0.01-0.05mol/L，所述胺类-无机盐混合溶液中还含有用于调节PH值的有机酸； 所述胺类为二乙胺和/或三乙胺； 所述无机盐为甲酸铵和/或乙酸铵； 所述有机酸为甲酸和/或三氟乙酸。
2.根据权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于:所述盐酸缬更昔洛韦药物或其制剂中含有如下六种杂质中的一种或两种以上:鸟嘌呤、更昔洛韦、甲氧基甲基鸟嘌呤、更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯、单乙酰氧基更昔洛韦、单氯代更昔洛韦。
3.根据权利要求2所述的分析检测方法，其特征在于:所述盐酸缬更昔洛韦药物或其制剂中含有如下六种杂质中的五种或六种:鸟嘌呤、更昔洛韦、甲氧基甲基鸟嘌呤、更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯、单乙酰氧基更昔洛韦、单氯代更昔洛韦。
4.根据权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于:所述盐酸缬更昔洛韦药物或其制剂选自盐酸缬更昔洛韦原料药、盐酸缬更昔洛韦片、盐酸缬更昔洛韦胶囊、盐酸缬更昔洛韦颗粒剂。
5.据权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于:所述有机溶剂的水溶液为甲醇或乙腈水溶液。
6.据权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于:用稀盐酸或流动相溶解盐酸缬更昔洛韦药物或其制剂。
7.据权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于:所述高效液相色谱仪中的高效液相色谱柱以硅烷键合硅胶为填充剂。
8.据权利要求7所述的分析检测方法，其特征在于:所述高效液相色谱仪中的高效液相色谱柱以苯基硅烷键合硅胶为填充剂。
9.据权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于:所述胺类-无机盐混合溶液的pH值为 5.2-5.8 ； 或者，所述检测波长为254nm。
10.据权利要求1-9中任一所述的分析检测方法，其特征在于:所述色谱纯有机溶剂为甲醇；或者，所述胺类为三乙胺；或者，所述无机盐为乙酸铵；或者，所述有机酸为三氟乙酸。
【专利摘要】本发明属于分析化学技术领域，具体公开了一种盐酸缬更昔洛韦杂质的HPLC分析检测方法，更具体地说，涉及一种分析检测鸟嘌呤、更昔洛韦、甲氧基甲基鸟嘌呤、更昔洛韦1-N-甲基缬氨酸酯、单乙酰氧基更昔洛韦、单氯代更昔洛韦或含上述6中杂质的药物或其制剂的方法。将待测溶液注入以苯基硅烷键合硅胶为填充剂的高效液相色谱柱中，用含胺类的无机盐水溶液与色谱纯有机溶剂组成的流动相冲洗分离，再用紫外光分析检测。本方法首次在流动相中创造性地加入一定浓度的乙酸铵或甲酸铵，彻底解决了主峰与杂质峰以及相邻杂质峰之间分离困难的难题，操作简便、分离度大、灵敏度高、准确性好，经文献检索，尚无类似文献报道。
【IPC分类】G01N30-34, G01N30-02
【公开号】CN104749286
【申请号】CN201510175583
【发明人】史自东, 刘俊, 陈龙, 洪华云, 周震, 李霞, 余玉静
【申请人】湖北丽益医药科技有限公司
【公开日】2015年7月1日
【申请日】2015年4月14日