将浓度 为l-2mg/mL的所述IgG二抗的溶液喷点在所述C线上。
[0044] 其中，所述的衔接为本领域常规意义上的衔接，按本领域常识，所述样品垫和所述 结合垫，所述结合垫和所述的层析膜，以及所述层析膜和所述吸水垫的衔接处一般有Imm 左右的叠合。
[0045] 本发明中，所制得的磁性免疫层析试纸条可以根据实际情况，在后续使用时进行 裁剪，以适用于磁性分析仪(MR)进行读卡分析。
[0046] 本发明还提供了一种所述磁性免疫层析试纸条的使用方法，其包括以下步骤：将 样本于所述的样品垫处加入，静置5-15min后，观察所述T线和所述C线处的颜色；在静置 35min后，用磁性分析仪检测所述磁性免疫层析试纸条在所述T线和所述C线处的磁信号 值，即可。
[0047] 其中，所述磁性分析仪(MAR)可为本领域常规使用的磁性分析仪。
[0048] 按本领域常识，所述T线和所述C线处的颜色变化和判断标准如下：以肉眼观察， 若T线和C线处有两条明显的条带或者T线的条带浅于C线条带，则样本为阳性；若仅C线 处出现一条条带，T线处无条带，则样本为阴性。检测时若C线处无条带，则试纸条体系有 问题，其检测结果视为无效。
[0049] 本发明中，将测得的样本在所述T线3处的定量磁信号与一阴性样本在所述T线 3处的定量磁信号进行比较，也可对检测结果进行评价，T样本/T阴值多2. 1的样品其结果 视为阳性，T样本/T阴值< 2. 1的样品其结果视为阴性。
[0050] 在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实 例。
[0051] 本发明所用试剂和原料均市售可得。
[0052] 与现有技术相比，本发明的有益效果是： 本发明以表面修饰有羧基的磁性纳米颗粒为载体，通过EDC和NHS将HBV preSl的抗 体连接到磁性纳米颗粒表面建立了用于检测HBV preSl抗原的磁性纳米颗粒生物探针制备 方法。并以此生物探针为标记物，以靶向标记物的抗体为捕获抗体，建立了三明治夹心式免 疫层析检测体系。本发明的磁性纳米颗粒生物探针特异性强，信号灵敏且稳定性好。本发 明的磁性免疫层析试纸条一方面可通过肉眼观察实现HBV preSl抗原的快速定性检测，另 一方面通过所捕获探针的定量磁信号实现HBV preSl抗原的定量检测。 上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可 依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明。本发明的 【具体实施方式】由以下实施例及其附图详细给出。 【附图说明】
[0053] 此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本申请的一部分，本发 明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中： 图1表示本发明的磁性纳米颗粒的TEM照片； 图2表示本发明的磁性纳米颗粒的比饱和磁化强度曲线图； 图3表示本发明的磁性免疫层析试纸条的结构示意图。 【具体实施方式】
[0054] 下面将参考附图并结合实施例，来详细说明本发明。
[0055] 下述实施例中，所制得的或采用的磁性纳米颗粒的粒径均在100_200nm的范围 内。
[0056] 实施例1磁性纳米颗粒 磁性纳米颗粒的制备方法，其包括下述步骤： (1) 用溶剂热法制备磁性粒子：将〇.85g FeC13,6H20和0.4033g PAA分别溶解在40ml 乙二醇中，再加入尿素1.2g溶解，混合后加入带四氟乙烯内胆的不锈钢反应釜中，旋紧反 应釜，在220°C下加热反应16h后，在磁分离辅助下，用乙醇和去离子水各洗涤3次，得到平 均粒径为90nm的磁性粒子； (2) 氧化硅包被磁性粒子：将90mg磁性粒子和1.0 mol/L的盐酸溶液混合，超声30分 钟，在磁分离辅助下，用去离子水洗涤5次，然后将磁性粒子与醇水体积比为70:30的醇水 混合液125mL混合，在搅拌下加入正硅酸乙酯200 μ L和氨水2. lmL，反应18小时，在磁分离 的辅助下用乙醇洗涤3次，真空干燥，即得。
[0057] 该些磁性纳米颗粒为具有核壳结构的磁性粒子/氧化硅复合材料，其内核为磁性 粒子，其壳层为氧化硅。参见图1所示，图1为磁性纳米颗粒的TEM照片，其平均粒径为 100nm，参见图2所示，磁性纳米颗粒的比饱和磁化强度为29. 2emu/g〇
[0058] 实施例2磁性纳米颗粒 磁性纳米颗粒的制备方法，其包括下述步骤： (1) 用溶剂热法制备磁性粒子：将〇. 81g FeC13 · 6H20和2. 66g柠檬酸钠分别溶解在 30ml乙二醇中，混合后加入带四氟乙烯内胆的不锈钢反应釜中，旋紧反应釜，在200°C下加 热反应24h后，在磁分离辅助下，用乙醇和去离子水各洗涤3次，得到平均粒径为250nm的 磁性粒子； (2) 氧化硅包被磁性粒子：将IlOmg磁性粒子和1.0 mol/L的盐酸溶液混合，超声15分 钟，在磁分离辅助下，用去离子水洗涤7次，然后将磁性粒子与醇水体积比为90:10的醇水 混合液125mL混合，在搅拌下加入正娃酸乙酯100 μ L和氨水2. lmL，反应12小时，然后再加 入80 μ L的正硅酸乙酯，继续反应12小时，在磁分离的辅助下用乙醇洗涤3次，真空干燥， 即得。
[0059] 这些磁性纳米颗粒为具有核壳结构的磁性粒子/氧化硅复合材料，其内核为磁性 粒子，其壳层为氧化娃。该些磁性纳米颗粒的平均粒径为280nm，比饱和磁化强度为42emu/ g，氧化硅壳层的平均厚度为15nm。
[0060] 实施例3磁性纳米颗粒生物探针 磁性纳米颗粒生物探针的制备方法，其包括下述步骤： 步骤1)在50g醇水体积比为70:30的乙醇水溶液中加入15mg实施例1或2所制得的 磁性纳米颗粒，加入50 μ L氨水和35 μ L氨丙基三乙氧基硅烷，常温下搅拌2h，于70 °C水浴 条件下继续搅拌3h，用乙醇洗涤，得表面氨基化的磁性纳米颗粒；将表面氨基化的磁性纳 米颗粒与二甲亚砜（DMSO)混合，加入5. 5mg 丁二酸酐反应24h，在磁分离辅助下用DMSO洗 涤3次，再用去离子水洗涤3次，得表面羧基化的磁性纳米颗粒，该些表面羧基化的磁性纳 米颗粒的羧基含量为〇. 9-1. 5mmol/g ; 步骤2)用500 μ L的MEST溶液(该MEST溶液中含0. 25v%的吐温-20,pH为5. 0-5. 5) 洗涤2mg表面羧基化的磁性纳米颗粒，该洗涤具体地为：将该MEST溶液和表面羧基化的磁 性纳米颗粒置于2mL离心管中，在漩涡振荡器上混合均匀，然后磁分离；洗涤2次后，将表面 羧基化的磁性纳米颗粒、〇· 5mol/L的EDC溶液5 μ L和0· 25mol/L的NHS溶液10 μ L混合， 反应30min，用MEST溶液(组分同前）洗涤2次，再用pH值为9. 0的BST溶液(该BST溶液 中含0. 07v%的吐温-20)洗涤2次，得反应物A ; 步骤3)在BST溶液(组分同前）中，将反应物A和150 μ g的HBV前Sl抗原的特异性单 抗混合，室温下反应3h，得反应物B ; 步骤4)将反应物B与500 μ L的0. 5~lmg/mL的BSA溶液于室温下封闭反应30min，反 应后用BST溶液(组分同前）洗涤3次，即得。
[0061] 制得的磁性纳米颗粒生物探针用保存液重悬，于4°C下储存备用。
[0062] 实施例4磁性免疫层析试纸条 参见图3所示，图3为本发明的磁性免疫层析试纸条的结构示意图，该磁性免疫层析试 纸条包括一样品垫1、一结合垫2、一层析膜7、一吸水垫6和一底板5,结合垫2上喷涂有实 施例3所制得的磁性纳米颗粒生物探针，层析膜7上有一 T线3和一 C线4,样品垫1、结合 垫2、层析膜7和吸水垫6依次衔接于底板5上，T线3位于靠近结合垫2的一侧，C线4位 于靠近吸水垫6的一侧，T线3和C线4相距0. 8cm ;T线3含有HBV表面抗原的特异性单 抗，C线4含有山羊抗兔IgG抗体，层析膜7为硝酸纤维素膜。
[0063] 所述磁性免疫层析试纸条的制备方法，其包括下述步骤：将实施例3所制得的 磁性纳米颗粒生物探针用保存液2倍体积的层析缓冲液进行重悬，该层析缓冲液为含有 0. Ι-lwt%的BSA、0. 05-0. 5wt%的Tween-20和0. 02-0. 2wt%的蔗糖的硼酸盐缓冲液，该层析 缓冲液的pH值为6. 5-9. 0均可；取5 μ L重悬后的悬浮液喷点于结合垫2上，该悬浮液中的 磁性纳米颗粒生物探针的含量为5 μ g ;用点膜仪以0. 8 μ L/cm的速度将lmg/mL的HBV表 面抗原的特异性单抗固定在层析膜7的T线3上，用点膜仪将2mg/mL的山羊抗兔IgG抗体 固定在层析膜7的C线4上，该层析膜7为硝酸纤维素膜，T线3和C线4相距0. 8cm ;将样 品垫1、结合垫2、层析膜7和吸水垫6依次衔接于底板5上，样品垫1和结合垫2,结合垫2 和