min的速率离心5 min，取12 mL左右上清液沿管壁慢 慢加入超滤管中，5000 r/min离心10min，将离心出的液体取出10 mL用氮气吹干，流动相 定容成1.0 mL，供HPLC-MS/MS测定分析。
[0012] 2.液相色谱条件 本实施例米用的色谱柱为 Waters Xbridge C18, 3. 5 μ m 2. I X 150mm，Agilent Zorbax SB-C18、XDB-C18等十八烷基键合相硅胶也可以满足分离要求。
[0013] 进样量：20 μ L ;流动相：A: 0. 1%甲酸溶液；B:乙腈；流速：0. 2 mL/min ;梯度洗 脱条件见表1。
[0014] 表1液相色谱梯度洗脱程序 3质谱条件
电喷雾电离源正离子扫描（ESI+);多反应监测模式（MRM);电喷雾电压：5.0 kV;离 子源温度：500 °C ;雾化气压力（GSl) : 70 psi ;辅助气流速（GS2) : 55 psi ;气帘气压力 (⑶R): 20psi;碰撞室入口电压（EP) : 10 V ;碰撞室出口电压（CXP): 10 V。监测离子对、 去簇电压（DP)、碰撞能量（CE)如表2所示。
[0015] 表210种喹诺酮优化的质谱分析参数
*定量离子 4方法学验证 4. 1标准曲线 制备不含待测组分的空白基质溶液，配制成一系列基质标准工作溶液，浓度分别为 5. 0、10. 0、25. 0、50. 0、100. 0 μ g/kg上机测定，以峰面积（Y轴）对相应的喹诺酮的浓度（X 轴)绘制标准曲线。结果表明，喹诺酮在5. 0~100 μ g/kg (相当于样品)浓度范围内，10种喹 诺酮的标准校正曲线的线性良好，相关系数r均大于0.99 (见表3)。
[0016] 4. 2方法的检出限和定量限 方法的检出限（LOD)是以空白样品基质稀释标准曲线上的最低浓度出峰时，取信噪比 S/N=3和样品处理过程的稀释倍数计算得出。定量限（LOQ)是样品基质加标标准曲线上的 最低浓度出峰时，取信噪比S/N=10和样品处理过程的稀释倍数计算得出。各种喹诺酮药物 的定量限为〇· 49-2. 59 μ g/kg。
[0017] 表310种喹诺酮的线性回归方程、相关系数
4. 3回收率和精密度 选用不含分析物的空白样品，分别添加5. 0、10和50 μ g/kg 3个浓度水平的混合标 准溶液，按前处理方法进行处理，做回收率实验，每个水平重复6次，测精密度，结果见表 4-5,4-6,4-7。测得平均回收率在71. 4%~85. 9%之间，变异系数在3. 9%~10. 7%之间。 说明该方法具有较好的回收率、稳定性和重复性，完全可以满足动物源性食品中10种喹诺 酮的日常检测要求。
[0018] 表4猪肝中10种喹诺酮的平均回收率和变异系数（n=6)
表5猪肾中10种喹诺酮的平均回收率和变异系数（n=6)
表8鱼肉中10种喹诺酮的平均回收率和变异系数（n=6)
5.实际样品 从市面上购得猪肝、猪肾、猪肉、鸡肉、牛肉、鱼肉等15份以及本实验室保留的阳性样 品3份分别用本方法和《GBT 21312-2007动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法 液相色谱-质谱质谱法》进行检测，除本实验室的阳性样品外，其余样品皆未检出，本实验 室的阳性样品分别检出恩诺沙星（101. 〇 ug/kg)、环丙沙星（36. 5 ug/kg)和诺氟沙星（18. 6 ug/kg)，结果数据的偏差范围在10%以内。
[0019] 本研究通过对超滤管体积、截留分子量的选择、离心时间的确定等，建立了超滤 管-高效液相色谱-质谱的检测方法，同时对10种喹诺酮进行了检测，对猪肉、鸡肉、牛肉、 鱼肉、猪肝、猪肾等动物组织进行了添加分析，结果表明：该方法定量准确、灵敏度高、重现 性好、基质效应小，能满足这10种喹诺酮类药物的残留检测任务，但QNs的种类还有很多， 其它种类的QNs值得进一步研究。
【主权项】
1. 一种动物组织中喹诺酮类药物残留的检测方法，其特征在于，其包括步骤：将待测 组织样品经预处理后，提取上清液加入超滤管中，超滤管放入离心机中离心，离心出的液体 取出用氮气吹干，流动相定容，供仪器测定分析； 其中，所述预处理步骤为：准确称取5. OO g粉碎好的样品，加入20 mLl%乙酸酸化乙 腈，混勾，超声20 min，加烘好后的无水硫酸钠5 g混勾，8000 r/min的速率离心5 min; 所述超滤管为50 mL，截留分子量3kD ; 所述离心为低温离心，5000 r/min离心10min。2. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述喹诺酮类为恩诺沙星、环丙沙 星、恶喹酸、沙拉沙星、双氟沙星、氟甲喹、萘啶酸、氧氟沙星、诺氟沙星、丹诺沙星中的一种 或几种。3. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述仪器测定分析采用HPLC-MS/MS， 其液相色谱柱采用Waters Xbridge C18, 3.5 ym 2. 1X150 mm，流动相：0.1%甲酸溶液 A-乙臆 B，流速：0.2 mL /min，梯度洗脱：t= 0 min, 80%A, 20% B ; t= I min, 80%A, 20%B ; t=6min, 40%A, 60% B ；t=10 min, 20%A, 80% B ；t=14 min, 20%A, 80% B ； t=14. I min, 80%A, 20% B ; t=20min, 80%A, 20% B ;其质谱条件为：电喷雾电离源正离子扫描（ESI+)，多 反应监测模式（MRM);电喷雾电压：5.0 kV;离子源温度：500 °C，雾化气压力（GSl): 70 psi ;辅助气流速（GS2) : 55 psi，气帘气压力（⑶R) : 20psi ;碰撞室入口电压（EP) : 10 V ; 碰撞室出口电压（CXP): 10 V，监测分析物的离子对进行药物残留确证分析。
【专利摘要】本发明公开了一种动物组织中喹诺酮类药物残留的检测方法，是将测组织样品经预处理后，提取上清液加入超滤管中，超滤管放入离心机中离心，离心出的液体取出用氮气吹干，流动相定容，供仪器测定分析。该方法可同时检测10喹诺酮类药物残留，具有较好的回收率、稳定性和重复性。大分子杂质被截留，因此大大降低了基质效应。该方法完全可以满足动物源性食品中10种喹诺酮的日常检测要求。
【IPC分类】G01N30/06
【公开号】CN105044250
【申请号】CN201510389065
【发明人】李兆杰, 王静, 鞠玲燕, 胡巧茹, 杨丽君
【申请人】威海出入境检验检疫局检验检疫技术中心
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年7月6日