液样品的血培养瓶置于美国BD公司BACTEC9050全自动血培养仪中35°C培养，并用590nm/750nm双波长光波检测血培养瓶底部硅橡胶富氧膜的光反射强度。
[0029](5)培养13小时，检测信号显示光反射强度超过阈值，且光反射曲线有明显的“S”形曲线(如图1)，由此说明血培养瓶中有微生物生长。
[0030]实施例2 (本发明使用了 TTC作为检测微生物的指示剂方法)
[0031](1)取35mL肉汤培养基、2g Amberlite XAD-4非离子型大孔树脂粒(罗门哈斯公司生产)和1.05g TTC (TTC先用1.05g的单蒸水溶解)于容器中混合均匀，加入到血培养瓶中并于121。。，灭菌20min ；
[0032](2)于上海市华东医院住院部采集有发热(彡38°C )或低温((36°C )，寒战，白细胞增多(细胞密度大于10.0X109个/L)体征的患者的血液标本用于实验。向血培养瓶中加入5mL血液样品；
[0033](3)将加入血液样品的血培养瓶置于美国BD公司BACTEC9050全自动血培养仪中37°C培养，并于590nm/750nm波长光波监测距离培养基表层2_3cm处培养基。
[0034](4)培养13左右，检测信号显示光反射强度超过阈值，且光反射曲线有明显的“S”形曲线(如图2)，此两项信号表明培养结果为阳性，由此说明血培养瓶中有微生物生长。
[0035]实施例3 (比色法)
[0036](1)取“珠海迪尔需氧血培养瓶(比色法)”进行试验。
[0037](2)于上海市华东医院住院部采集有发热(彡38°C )或低温((36°C )，寒战，白细胞增多(计数大于10.0X107L)体征的患者的血液标本用于实验。血液标本由临床微生物实验室技师采集临床病人血液样本。向血培养瓶中加入5mL血液样品；
[0038](3)将加入血液样品的血培养瓶置于美国BD公司BACTEC9050全自动血培养仪中35°C培养，并用BACTEC9050全自动血培养仪配套检测设备检测；
[0039](4)培养62小时，检测信号显示光反射强度超过阈值(如图3)，且光反射曲线有明显的“S”形曲线，此两项信号表明培养结果为阳性，由此说明血培养瓶中有微生物生长。
[0040]上述对比实验共选取105例来自于从上海市华东医院各科住院疑似病例患者采集的血液培养标本，血培养结果显示本发明的阳性检出时间为13小时，珠海迪尔血培养瓶的阳性检出时间为62小时；本发明检出21例阳性，阳性检出率为20%，珠海迪尔血培养瓶检出6阳性，阳性检出率为5%。
[0041]以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
【主权项】
1.检测血液中微生物的方法，其特征在于，该方法包括下列步骤: (1)将2，3，5-三苯基氯化四氮唑TTC与血培养基加入血培养瓶，再加入35-40mL血培养基及2-4g树脂粒，所述2，3，5-三苯基氯化四氮唑在血培养基及树脂粒混合物中浓度为0.01-0.03g/mL ;或 2，3，5-三苯基氯化四氮唑TTC混合到硅橡胶富氧膜中，制备成固体指示剂，并固定在血培养瓶底部，再加入35-40mL血培养基及2_4g树脂粒；所述2，3，5-三苯基氯化四氮唑在硅橡胶富氧膜中浓度为0.01-0.03g/mL ； (2)血培养瓶于121。。，灭菌20min； (3)向血培养瓶中加入血液样品，在34-36°C条件下培养0-5天； (4)检测血培养瓶中指示带的光反射强度，绘制光反射强度曲线，根据光反射强度曲线确定微生物生长结果。2.根据权利要求1所述检测血液中微生物的方法，其特征在于，步骤(1)硅橡胶富氧膜为:23-27mL的聚二甲基硅氧烷、730-770 μ L正桂酸乙酯、90-110 μ L 二月桂酸二丁基锡和1-1.5mL环己烧的混合物。3.根据权利要求1所述检测血液中微生物的方法，其特征在于，所述步骤(1)2，3，5-三苯基氯化四氮唑先用等质量的单蒸水溶解。4.根据权利要求4所述检测血液中微生物的方法，其特征在于，所述步骤(2)血培养基选自肉汤培养基、大豆酪蛋白培养基或胰酪胨大豆肉汤培养基。5.根据权利要求1所述检测血液中微生物的方法，其特征在于，所述步骤(2)的树脂粒选自0.2-0.8mm的阳离子交换树脂粒或非离子吸附树脂粒。6.根据权利要求5述检测血液中微生物的方法，其特征在于，所述步骤(2)所述阳离子交换树脂粒选自732阳离子交换树脂粒、强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂、超强性苯乙烯系阳离子交换树脂、大孔强碱性季铵型阳离子交换树脂；非离子吸附树脂粒选自聚苯乙烯型吸附树脂、Amberlite XAD-4非离子型大孔树脂。7.据权利要求1所述检测血液中微生物的方法，其特征在于，所述步骤(4)将2，3，5 -三苯基氯化四氮唑T T C直接加入血培养瓶中的培养样品检测时的光波为590nm/750nm 双波长。8.根据权利要求1所述检测血液中微生物的方法，其特征在于，所述步骤(4)将2，3，5-三苯基氯化四氮唑混合到硅橡胶富氧膜培养的样品检测时的光波为570-610nm波长。9.根据权利要求1所述检测血液中微生物的方法，其特征在于，所述步骤(4)所述的指示带为:将2，3，5-三苯基氯化四氮唑直接加入培养基的血培养瓶，是指距离培养基表层2-3cm处的培养基。10.据权利要求1所述检测血液中微生物的方法，其特征在于，所述步骤(4)所述的指示带为:将2，3，5-三苯基氯化四氮唑混合到硅橡胶富氧膜，再加入培养基的血培养瓶是指培养瓶底部的硅橡胶富氧膜。
【专利摘要】本发明提供一种检测血液中微生物的方法，该方法包括下列步骤：(1)将2,3,5‐三苯基氯化四氮唑(TTC)直接加入血培养瓶；或2,3,5‐三苯基氯化四氮唑混合到硅橡胶富氧膜中，制备成固体指示剂，并固定在血培养瓶底部；所述TTC浓度为0.01‐0.03g/mL；(2)向血培养瓶中加入血培养基，并于121℃，灭菌20min；(3)向血培养瓶中加入血液样品，在35℃条件下培养0‐5天后；(4)检测血培养瓶中指示带的光反射强度，绘制光反射强度曲线，根据光反射强度曲线确定微生物生长结果。本发明在临床应用上具有成本低、操作流程简单、检测时间短、阳性检出率高等优点，有较大的应用价值。
【IPC分类】G01N21/31, G01N1/28
【公开号】CN105372186
【申请号】CN201410404534
【发明人】王龙, 胡维, 冉苇
【申请人】上海复星长征医学科学有限公司, 上海星佰生物技术有限公司
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2014年8月18日