[0224]
[0225] 3)生成对照指纹图谱
[0226] 选择合格的多批坤灵丸色谱图导入相似度评价系统，计算得相似度结果，并生成 标准对照指纹图谱；将多批坤灵丸样品的指纹图谱中8个峰为共有峰，W与丹皮酪对照品 峰保留时间相同的色谱峰为参照峰，其他7个色谱峰的相对保留时间分别为；0. 08、0. 13、 0. 14、0. 57、0. 79、1.00、1.08、1. 13,各峰的相对保留时间在 ±3%~±10%W内。
[0227] 实施例11，一种坤灵丸高效液相标准对照指纹图谱，其建立方法如下：
[022引 1)供试品溶液制备：
[0229] 取坤灵丸适量，研成细粉，精密称取0. 3g至5ml容量瓶中，加30%甲醇适量，超声 处理20min，冷却至室温，定容至刻度，摇匀，过0. 45 μ m微孔滤膜，取续滤液即得；
[0230] 丹皮酪标准对照品溶液，制备方法为；精密称取丹皮酪对照品适量，加30%甲醇 溶解制成每1ml含8 μ g的溶液，即得；
[0231] 2)获得色谱图：
[0232] 供试品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，其中高效液相色谱的色谱条件如 下：
[0233] 色谱柱固定相W十八烷基娃焼键合硅胶为填料，Agilent ZORBAX;流动相为己 腊-甲酸水溶液梯度洗脱，甲酸水溶液的浓度为0. 1 % ;流速为0. 6ml/min ;柱温为25°C ;进 样量为5 μ L ;检测波长为272皿，
[0234] 梯度洗脱表：
[0235]
[0236]
[0237] 3)生成对照指纹图谱
[023引选择合格的多批坤灵丸色谱图导入相似度评价系统，计算得相似度结果，并生成 标准对照指纹图谱；将多批坤灵丸样品的指纹图谱中8个峰为共有峰，W与丹皮酪对照品 峰保留时间相同的色谱峰为参照峰，其他7个色谱峰的相对保留时间分别为；0. 08、0. 13、 0. 14、0. 57、0. 79、1. 00、1. 08、1. 13,各峰的相对保留时间在 ±3%~±10% W 内。
[0239] 实施例12, 一种坤灵丸高效液相标准对照指纹图谱，其建立方法如下：
[0240] 1)供试品溶液制备：
[0241] 取坤灵丸适量，研成细粉，精密称取0. 7g至15ml容量瓶中，加70 %甲醇适量，超声 处理40min，冷却至室温，定容至刻度，摇匀，过0. 45 μ m微孔滤膜，取续滤液即得；
[0242] 丹皮酪标准对照品溶液，制备方法为；精密称取丹皮酪对照品适量，加70 %甲醇 溶解制成每1ml含20 μ g的溶液，即得；
[0243] 2)获得色谱图：
[0244] 供试品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，其中高效液相色谱的色谱条件如 下：
[0245] 色谱柱固定相W十八烷基娃焼键合硅胶为填料，Agilent Z0RBAX;流动相为己 腊-甲酸水溶液梯度洗脱，甲酸水溶液的浓度为5% ;流速为1. 5ml/min ;柱温为4(TC ;进样 量为20 μ L ;检测波长为276皿，
[0246] 梯度洗脱表：
[0247]
[024引 3)生成对照指纹图谱
[0249] 选择合格的多批坤灵丸色谱图导入相似度评价系统，计算得相似度结果，并生成 标准对照指纹图谱；将多批坤灵丸样品的指纹图谱中8个峰为共有峰，W与丹皮酪对照品 峰保留时间相同的色谱峰为参照峰，其他7个色谱峰的相对保留时间分别为；0. 08、0. 13、 0. 14、0. 57、0. 79、1.00、1.08、1. 13,各峰的相对保留时间在 ±3%~±10%W内。
【主权项】
1. 一种坤灵丸高效液相标准对照指纹图谱，其建立方法如下： 1) 供试品洛液制备： 取坤灵丸，加入甲醇或乙醇水溶液，超声溶解，再加入溶剂调整溶液浓度，微孔滤膜滤 过，取滤液，既得； 2) 获得色谱图： 供试品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图； 3) 生成对照指纹图谱 选择合格的多批坤灵丸色谱图导入相似度评价系统，计算得相似度结果，并生成标准 对照指纹图谱； 其中高效液相色谱的色谱条件如下： 色谱柱固定相以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相为乙腈-甲酸水溶液梯度洗 脱，其中甲酸水中甲酸的浓度为〇. 1%~5%;流速为0. 6~I. 5ml/min ;柱温为25~40°C; 进样量为5~20 μ L ;检测波长为272~276nm， 梯度洗脱表： 时间/分:钟 0, 1%~5%甲酸 乙廳 0 90 ~99 m~1 6-10 90~卵 10-1 25~40 60-80 猶~涕 .4? ~55 5--1? 95-85 50~紐 5~15 95-85 恥~側 1!)-1 根据需要可以加入有效成分的标准对照品以作为参照物峰。2. 根据权利要求1所述的标准对照指纹图谱，其建立方法如下： 1) 供试品溶液的制备，方法如下： 取坤灵丸适量，研成细粉，精密称取〇. 3~0. 7g至5~15ml容量瓶中，加30%~70% 甲醇适量，超声处理20~40min，冷却至室温，定容至刻度，摇匀，过0. 45 μ m微孔滤膜，取续 滤液即得， 2) 获得色谱图： 供试品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，同时以丹皮酚作为参照物； 丹皮酚标准对照品溶液，制备方法为：精密称取丹皮酚对照品适量，加30 %~70 %甲 醇溶解制成每1ml含8~20 μ g的溶液，即得； 3) 生成对照指纹图谱，方法如下： 将多批坤灵丸样品的指纹图谱中8个峰为共有峰，以与丹皮酚对照品峰保留时间相同 的色谱峰为参照峰，其他7个色谱峰的相对保留时间分别为：0. 08、0. 13、0. 14、0. 57、0. 79、 I. 00、1. 08、1. 13,各峰的相对保留时间在±3%~±10%以内。3. 根据权利要求2所述的标准对照指纹图谱，其中，供试品溶液的制备方法如下： 取坤灵丸适量，糖衣丸除去糖衣，研成细粉，精密称取〇. 5g至IOml容量瓶中，加50 %甲 醇适量，超声处理30min，冷却至室温，定容至刻度，摇匀，过0. 45 μ m微孔滤膜，取续滤液即 得；对照品溶液的制备方法为：取丹皮酚，加50%甲醇制成每1ml含15 μ g的溶液。4. 根据权利要求1所述的标准对照指纹图谱，其特征在于，色谱条件为：以乙腈-1 %甲 酸为流动相、流速1.0 ml/分钟、柱温30°C、检测波长：274nm。5. 根据权利要求1所述的标准对照指纹图谱，其特征在于，其中梯度洗脱方式为： 时间/分钟 m平酸 乙黯 〇 m 5 8 95 5 :巧 7Q 30 50 IO 90 10： 90 6：§ 9§: S6. -种坤灵丸的高效液相色谱指纹图谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤： 1) 待测样品洛液的制备： 取坤灵丸样品，加入甲醇或乙醇水溶液，超声溶解，再加入溶剂调整溶液浓度，微孔滤 膜滤过； 2) 待测样品指纹图谱的测定： 取滤液，注入高效液相色谱仪，得到色谱图，色谱条件为： 色谱柱固定相以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相为乙腈-甲酸水溶液梯度洗 脱，甲酸水溶液中甲酸的浓度为〇. 1%~5%、流速为0. 6~I. 5ml/min、柱温为25~40°C、 进样量为5~20 μ L ;检测波长为272-276nm ; 梯度洗脱方式为： 时间/分钟 α ?~St甲酸 乙讀 0 90-99 10~1 6 ~W) 90^99 10^1 23~補： 獅~_ 揚~2δ *15-00 δ-15 95-8? 5U '· β0 δ-'-15 95-85 60 ~?I) 90-99 10-? 3) 待测样品色谱图和标准对照指纹图谱相似度计算： 将待测样品的色谱图导入中国药典委的"中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版"软 件，比较待测样品的色谱图和标准对照指纹图谱相似度。7. 根据权利要求6的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤1)待测样品溶液的制备方 式为： 取坤灵丸适量，研成细粉，精密称取〇. 3~0. 7g至5~15ml容量瓶中，加30%~70% 甲醇适量，超声处理20~40min，冷却至室温，定容至刻度，摇匀，过0. 4-0. 5 μ m微孔滤膜。8. 根据权利要求6的指纹图谱检测方法，其特征在于，其中步骤1)待测样品溶液的制 备方式为：取坤灵丸适量，糖衣丸除去糖衣，研成细粉，精密称取〇. 5g至IOml容量瓶中，加 50%甲醇适量，超声处理30min，冷却至室温，定容至刻度，摇匀，过0. 45 μ m微孔滤膜。9. 根据权利要求6的指纹图谱检测方法，其特征在于，其中步骤2)的色谱条件为：以 乙腈-1 %甲酸水溶液为流动相、流速1.0 ml/分钟、柱温30°C、检测波长：274nm、进样量为 10 μ L010. 根据权利要求6的指纹图谱检测方法，其特征在于，其中梯度洗脱方式为： 时间/分钟 找甲酸 乙鑛 0 9S 5 8 95： 5 36 TO 30 〇{) 10 SO 5S IO 90 65 95 S
【专利摘要】本发明提供了一种坤灵丸的高效液相指纹图谱检测方法，所述方法包括：坤灵丸标准指纹图谱的建立、待测坤灵丸指纹图谱的测定和相似性比较判定等步骤。本发明通过尝试多种不同洗脱条件，最终确定了坤灵丸的指纹图谱分析的色谱条件，考察确定了8个共有峰的对照指纹图谱，具有方法简便、速度快、重现性好等特点，所建立的标准指纹图谱经方法学验证满足相关要求，适用性强，能够更全面的反映产品质量状况，为质量控制及制定标准提供了重要依据。
【IPC分类】G01N30/02, G01N30/06
【公开号】CN105486762
【申请号】CN201410482791
【发明人】阚红玉, 刘海涛, 耿晓梅, 孙玉侠, 曹凤兰, 徐立元, 杨建会, 李建, 杨雪梅, 张淑玉
【申请人】天士力制药集团股份有限公司, 天津天士力（辽宁）制药有限责任公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2014年9月19日