一种芦荟多糖指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种芦荟多糖指纹图谱的构建方法，具体涉及一种芦荟多糖的GPC指 纹图谱的构建方法以及由此方法所得到的芦荟多糖标准指纹图谱，属于中药及其制品和功 能食品、化妆品原料及其制品的指纹图谱技术领域。
【背景技术】
[0002] 库拉索芦荟（Aloe barbadensis Mill或Aloe vera L.)是百合科芦荟属植物 [China Rural Technology Development Center, Aloe Industry Committee of China Association for Promotion of Non-Governmental Sci-Tech Enterprises. Development report of aloe industry in China. Beijing:China Labour and Social Security Publishing House，2011·]，具有杀菌、消炎、抗福射[Saini D K，Saini R M. Environ Toxicol Pharmacol, 2011，（31) :427.]、抗肿瘤、抗衰老、抗内毒素、免疫调节等多种药 理作用[Hamman J H. Molecules, 2008，（13) :1599 ;Choi S，Chung Μ H. Semin Integr Med, 2003, 1 (1) :53 ；Lee E M, Bai H ff, Lee S K, et al. Radiat Phys Chem, 2012, (2) :33.], 已广泛用于药品、食品、化妆品和洗涤用品等行业[Maenthaisong R,Chaiyakunapruk N，Niruntraporn S,et al. BURNS, 2007, (33) :713 ;Dal'Belo S E,Gaspar L R,Maia Campos P Μ B G. Skin Res Technol, 2006,（12):241 ;任海毅，王巧娥，董银卯，等.药物评价研 究，2012, 35 (6):431 ;周伟东，中国农村科技，2014,（8):56.]。然而，由于芦荟活性成分复 杂，芦荟产品的质量鉴定与品质分析一直是困扰芦荟行业的难题，建立芦荟产品的质量控 制与科学评价方法也一直是我国芦荟产业急需解决的关键技术问题[万金志，钟英，黄运 喜，等.天然产物研究与开发，2014, 26 (6) : 970.]。
[0003] 研究表明，芦荟的多重功效来源于其中多种成分的协同作用，其中最重要的是 芦荟苷、芦荟大黄素等蒽醌类成分以及以乙酰化甘露聚糖为主的多糖类成分[万金志， 徐新军，钟佳胜，等.今日药学，2012, 22(12) :753;陈国和，刘玉鑫，张新申，等.化学 研究与应用，2002, 14(2) : 133.]。芦荟蒽醌类物质主要存在于芦荟叶皮中，是芦荟药品 的活性成分，其质量分析与评价方法已有很多报道[陈国和，刘玉鑫，张新申，等.化学 研究与应用，2002, 14(2):133 ;Wu X F，Ding W J，Zhong J S，et al.J Pharm Biomed Anal，2013,（80) :94 ;陈金东，李蔚，李素云.色谱，2002, 20(4) :367 ;陈欣霞，张宇航，林 颖，等.天然产物研究与开发，2009, 21 (5) :817.]，而芦荟多糖主要存在于芦荟凝胶中[陈 国和，刘玉鑫，张新申，等.化学研究与应用，2002, 14(2) :133.]，是芦荟保健食品、普通食 品、化妆品、洗涤用品的主要活性成分[魏洋，王革辉.针织工业，2012,（2):46 ;卫生部 等6部局关于含库拉索芦荟凝胶食品标识规定的公告.(2009-02-06). http: //www. moh. gov. cn/mohbgt/s9506/200902/39137. shtml:甘丽萍，刘其元，吴应梅，等.安徽农学通 报，2009, 15 (5) : 198 ;钟英，董银卯，段盛林.中国农业科技导报，2008, 10 (5) : 35.]，因此芦 荟多糖的分析与检测是评价芦荟食品、化妆品和洗涤用品等非药用产品质量的主要依据。
[0004] 目前，芦荟多糖含量的测定方法主要有分光光度法[杜海燕，孙家跃.轻工标准与 质量，2004,（3) :42 ;许芳萍，顾文秀，高燕，等.分析试验室，2007, 26 (12) :64.]、气相色谱 法[崔莉凤，王微·色谱，2003, 21 (1):88.]、核磁共振波谱法[Bozzi A, Perrin C, Austin S，et al. Food Chem, 2007, (103) :22.]、高效薄层色谱法[Lobo R,Prabhu K S,Shirwaikar A, et al. Fitoterapia, 2010, (81) :231.]等。分光光度法包括苯酸-硫酸法、刚果红法[杜 海燕，孙家跃.轻工标准与质量，2004,（3):42.]和茜红素法[许芳萍，顾文秀，高燕，等.分 析试验室，2007, 26(12) :64.]，其中苯酚硫酸法的特异性、选择性差，不能有效地区别麦芽 糖、淀粉、糊精等非芦荟多糖成分，而这些常被用于掺杂在芦荟制品中以替代芦荟多糖[杜 海燕，孙家跃.轻工标准与质量，2004,（3):42.];刚果红法可避免芦荟制品的常见掺假物 环糊精和葡萄糖等的干扰，但不能排除麦芽糊精的干扰[杜海燕，孙家跃.轻工标准与质 量，2004,（3) :42.];茜红素法[许芳萍，顾文秀，高燕，等·分析试验室，2007, 26(12) :64.] 可避免麦芽糊精、环糊精、淀粉、蔗糖和葡萄糖等常见芦荟制品掺假物的干扰，但只能给出 芦荟多糖的总量，不能提供与芦荟多糖的活性密切相关的分子量及其分布等信息。此外，气 相色谱法[崔莉凤，王微.色谱，2003, 21 (1):88.]采用柱前衍生的方法将芦荟多糖水解 为单糖，只能给出芦荟多糖的单糖组成；核磁共振波谱法[Bozzi A, Perrin C, Austin S，et al. Food Chem，2007,（103):22.]设备昂贵，不适合大范围推广；高效薄层色谱法[Lobo R，Prabhu K S，Shirwaikar A，et &1.卩;11:0七6抑卩1&，2010，（81):231.]虽然能特异性的测 定乙酰化甘露聚糖的含量，但操作繁琐，而且也不能提供与芦荟多糖的活性密切相关的分 子量及其分布等信息。中药指纹图谱可全面反映中药材或注射剂的化学成分信息，是从整 体相似性角度定性或定量评价中药材或注射剂质量的有效方法[国家食品药品监督管理 总局.中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行））.(2008-08-15). http: //www. sda. gov. cn/WS01/CL0237/15768. html:李强，朴思邈,张忠亮，等.中草药，2013, 44 (22) : 3095 ; 孙国祥，豆小文，杨兰萍，等.色谱，2013, 31 (5): 456;游佳莉，王毓杰，张艺，等.中国中药 杂志，2015, 40(2) : 362 ;甘秀梅，梁志远，姜金仲，等.中药材，2015, 38(2) : 275 ;王亮，张 振秋，邓仕任，等.中国实验方剂学杂志，2015, 21 (2) :80 ;王静，王强，唐军，等.分析试验 室，2013, 32(3) : 68 ;张兴旺，文怀秀，赵晓辉，等.分析试验室，2010, 29 (suppl) : 173 ;傅宇 飞，张佩佩，潘再法，等.分析试验室，2013, 32 (8) : 103.]。鉴于芦荟凝胶具有和中药相似的 整体性和模糊性，本发明专利借鉴中药指纹图谱的技术和方法，以库拉索芦荟凝胶为研究 对象，建立芦荟凝胶多糖成分凝胶渗透色谱（GPC)指纹图谱的技术和方法，旨在为芦荟产 品的真伪鉴别和品质评价提供参考依据。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种芦荟多糖指纹图谱的构建方法，借此可将芦荟多糖指纹 图谱作为芦荟食品、保健品、洗涤用品等终端产品的真伪鉴别和品质评价的主要指标之一。 本发明还同时提供了芦荟多糖的标准指纹图谱。
[0006] 为达到上述目的本发明采用了以下技术手段：
[0007] -种芦荟多糖指纹图谱的构建方法，其特征在于，从芦荟叶中提取芦荟多糖，将提 取的芦荟多糖制备成GPC分析供试液，经凝胶渗透色谱仪分离检测，获得芦荟多糖的指纹 图谱。
[0008] 在本发明中，优选的，包括如下步骤：
[0009] (1)芦荟多糖的制备
[0010] 取库拉索芦荟鲜叶适量，洗净后去皮，芦荟凝胶清洗、切块，用搅拌机初步破碎后 置于闪式提取器进一步匀浆处理，得凝胶匀浆液；凝胶匀浆液减压抽滤，收集滤液进行浓 缩，浓缩液冷却后加入乙醇溶液，4°C冷藏过夜，离心得沉淀；待沉淀中的乙醇挥干后，放 入-40°C冰箱冷冻，然后置于真空冷冻干燥机中冻干，冻干粉研磨，即得芦荟多糖；
[0011] ⑵芦荟多糖GPC分析供试液的制备
[0012] 精确称取步骤（1)制备的芦荟多糖适量，用NaN03溶液溶解后，在4°C冰箱放置12h 后取出，恢复至室温后用滤膜过滤，即得芦荟多糖GPC分析供试液；
[0013] (3)芦荟多糖的GPC分析
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