一种芦荟多糖指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱的制作方法

文档序号:9825330阅读:633来源:国知局
一种芦荟多糖指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种芦荟多糖指纹图谱的构建方法,具体涉及一种芦荟多糖的GPC指 纹图谱的构建方法以及由此方法所得到的芦荟多糖标准指纹图谱,属于中药及其制品和功 能食品、化妆品原料及其制品的指纹图谱技术领域。
【背景技术】
[0002] 库拉索芦荟(Aloe barbadensis Mill或Aloe vera L.)是百合科芦荟属植物 [China Rural Technology Development Center, Aloe Industry Committee of China Association for Promotion of Non-Governmental Sci-Tech Enterprises. Development report of aloe industry in China. Beijing:China Labour and Social Security Publishing House,2011·],具有杀菌、消炎、抗福射[Saini D K,Saini R M. Environ Toxicol Pharmacol, 2011,(31) :427.]、抗肿瘤、抗衰老、抗内毒素、免疫调节等多种药 理作用[Hamman J H. Molecules, 2008,(13) :1599 ;Choi S,Chung Μ H. Semin Integr Med, 2003, 1 (1) :53 ;Lee E M, Bai H ff, Lee S K, et al. Radiat Phys Chem, 2012, (2) :33.], 已广泛用于药品、食品、化妆品和洗涤用品等行业[Maenthaisong R,Chaiyakunapruk N,Niruntraporn S,et al. BURNS, 2007, (33) :713 ;Dal'Belo S E,Gaspar L R,Maia Campos P Μ B G. Skin Res Technol, 2006,(12):241 ;任海毅,王巧娥,董银卯,等.药物评价研 究,2012, 35 (6):431 ;周伟东,中国农村科技,2014,(8):56.]。然而,由于芦荟活性成分复 杂,芦荟产品的质量鉴定与品质分析一直是困扰芦荟行业的难题,建立芦荟产品的质量控 制与科学评价方法也一直是我国芦荟产业急需解决的关键技术问题[万金志,钟英,黄运 喜,等.天然产物研究与开发,2014, 26 (6) : 970.]。
[0003] 研究表明,芦荟的多重功效来源于其中多种成分的协同作用,其中最重要的是 芦荟苷、芦荟大黄素等蒽醌类成分以及以乙酰化甘露聚糖为主的多糖类成分[万金志, 徐新军,钟佳胜,等.今日药学,2012, 22(12) :753;陈国和,刘玉鑫,张新申,等.化学 研究与应用,2002, 14(2) : 133.]。芦荟蒽醌类物质主要存在于芦荟叶皮中,是芦荟药品 的活性成分,其质量分析与评价方法已有很多报道[陈国和,刘玉鑫,张新申,等.化学 研究与应用,2002, 14(2):133 ;Wu X F,Ding W J,Zhong J S,et al.J Pharm Biomed Anal,2013,(80) :94 ;陈金东,李蔚,李素云.色谱,2002, 20(4) :367 ;陈欣霞,张宇航,林 颖,等.天然产物研究与开发,2009, 21 (5) :817.],而芦荟多糖主要存在于芦荟凝胶中[陈 国和,刘玉鑫,张新申,等.化学研究与应用,2002, 14(2) :133.],是芦荟保健食品、普通食 品、化妆品、洗涤用品的主要活性成分[魏洋,王革辉.针织工业,2012,(2):46 ;卫生部 等6部局关于含库拉索芦荟凝胶食品标识规定的公告.(2009-02-06). http: //www. moh. gov. cn/mohbgt/s9506/200902/39137. shtml:甘丽萍,刘其元,吴应梅,等.安徽农学通 报,2009, 15 (5) : 198 ;钟英,董银卯,段盛林.中国农业科技导报,2008, 10 (5) : 35.],因此芦 荟多糖的分析与检测是评价芦荟食品、化妆品和洗涤用品等非药用产品质量的主要依据。
[0004] 目前,芦荟多糖含量的测定方法主要有分光光度法[杜海燕,孙家跃.轻工标准与 质量,2004,(3) :42 ;许芳萍,顾文秀,高燕,等.分析试验室,2007, 26 (12) :64.]、气相色谱 法[崔莉凤,王微·色谱,2003, 21 (1):88.]、核磁共振波谱法[Bozzi A, Perrin C, Austin S,et al. Food Chem, 2007, (103) :22.]、高效薄层色谱法[Lobo R,Prabhu K S,Shirwaikar A, et al. Fitoterapia, 2010, (81) :231.]等。分光光度法包括苯酸-硫酸法、刚果红法[杜 海燕,孙家跃.轻工标准与质量,2004,(3):42.]和茜红素法[许芳萍,顾文秀,高燕,等.分 析试验室,2007, 26(12) :64.],其中苯酚硫酸法的特异性、选择性差,不能有效地区别麦芽 糖、淀粉、糊精等非芦荟多糖成分,而这些常被用于掺杂在芦荟制品中以替代芦荟多糖[杜 海燕,孙家跃.轻工标准与质量,2004,(3):42.];刚果红法可避免芦荟制品的常见掺假物 环糊精和葡萄糖等的干扰,但不能排除麦芽糊精的干扰[杜海燕,孙家跃.轻工标准与质 量,2004,(3) :42.];茜红素法[许芳萍,顾文秀,高燕,等·分析试验室,2007, 26(12) :64.] 可避免麦芽糊精、环糊精、淀粉、蔗糖和葡萄糖等常见芦荟制品掺假物的干扰,但只能给出 芦荟多糖的总量,不能提供与芦荟多糖的活性密切相关的分子量及其分布等信息。此外,气 相色谱法[崔莉凤,王微.色谱,2003, 21 (1):88.]采用柱前衍生的方法将芦荟多糖水解 为单糖,只能给出芦荟多糖的单糖组成;核磁共振波谱法[Bozzi A, Perrin C, Austin S,et al. Food Chem,2007,(103):22.]设备昂贵,不适合大范围推广;高效薄层色谱法[Lobo R,Prabhu K S,Shirwaikar A,et &1.卩;11:0七6抑卩1&,2010,(81):231.]虽然能特异性的测 定乙酰化甘露聚糖的含量,但操作繁琐,而且也不能提供与芦荟多糖的活性密切相关的分 子量及其分布等信息。中药指纹图谱可全面反映中药材或注射剂的化学成分信息,是从整 体相似性角度定性或定量评价中药材或注射剂质量的有效方法[国家食品药品监督管理 总局.中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)).(2008-08-15). http: //www. sda. gov. cn/WS01/CL0237/15768. html:李强,朴思邈,张忠亮,等.中草药,2013, 44 (22) : 3095 ; 孙国祥,豆小文,杨兰萍,等.色谱,2013, 31 (5): 456;游佳莉,王毓杰,张艺,等.中国中药 杂志,2015, 40(2) : 362 ;甘秀梅,梁志远,姜金仲,等.中药材,2015, 38(2) : 275 ;王亮,张 振秋,邓仕任,等.中国实验方剂学杂志,2015, 21 (2) :80 ;王静,王强,唐军,等.分析试验 室,2013, 32(3) : 68 ;张兴旺,文怀秀,赵晓辉,等.分析试验室,2010, 29 (suppl) : 173 ;傅宇 飞,张佩佩,潘再法,等.分析试验室,2013, 32 (8) : 103.]。鉴于芦荟凝胶具有和中药相似的 整体性和模糊性,本发明专利借鉴中药指纹图谱的技术和方法,以库拉索芦荟凝胶为研究 对象,建立芦荟凝胶多糖成分凝胶渗透色谱(GPC)指纹图谱的技术和方法,旨在为芦荟产 品的真伪鉴别和品质评价提供参考依据。

【发明内容】

[0005] 本发明的目的是提供一种芦荟多糖指纹图谱的构建方法,借此可将芦荟多糖指纹 图谱作为芦荟食品、保健品、洗涤用品等终端产品的真伪鉴别和品质评价的主要指标之一。 本发明还同时提供了芦荟多糖的标准指纹图谱。
[0006] 为达到上述目的本发明采用了以下技术手段:
[0007] -种芦荟多糖指纹图谱的构建方法,其特征在于,从芦荟叶中提取芦荟多糖,将提 取的芦荟多糖制备成GPC分析供试液,经凝胶渗透色谱仪分离检测,获得芦荟多糖的指纹 图谱。
[0008] 在本发明中,优选的,包括如下步骤:
[0009] (1)芦荟多糖的制备
[0010] 取库拉索芦荟鲜叶适量,洗净后去皮,芦荟凝胶清洗、切块,用搅拌机初步破碎后 置于闪式提取器进一步匀浆处理,得凝胶匀浆液;凝胶匀浆液减压抽滤,收集滤液进行浓 缩,浓缩液冷却后加入乙醇溶液,4°C冷藏过夜,离心得沉淀;待沉淀中的乙醇挥干后,放 入-40°C冰箱冷冻,然后置于真空冷冻干燥机中冻干,冻干粉研磨,即得芦荟多糖;
[0011] ⑵芦荟多糖GPC分析供试液的制备
[0012] 精确称取步骤(1)制备的芦荟多糖适量,用NaN03溶液溶解后,在4°C冰箱放置12h 后取出,恢复至室温后用滤膜过滤,即得芦荟多糖GPC分析供试液;
[0013] (3)芦荟多糖的GPC分析
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