] 精密吸取步骤（2)制备的芦荟多糖GPC分析供试液，经凝胶渗透色谱仪分离检测； 其中，将Shodex SUGAR KS-805色谱柱和KS-803色谱柱串联使用，流动相为NaN03溶液，采 用等度洗脱得到芦荟多糖的指纹图谱。
[0015] 在本发明中，优选的，步骤（1)中所述的浓缩为60°C旋蒸浓缩；所述的浓缩液冷却 后加入乙醇溶液为浓缩液冷却后边搅拌边加入无水乙醇至其体积分数为80% ;所述的离心 为 10000rad/min 离心 15min。
[0016] 在本发明中，优选的，步骤（2)中所述的芦荟多糖GPC分析供试液的制备为：精确 称取步骤⑴制备的芦荟多糖适量，用含质量分数为0. 2%。似队的0.1mol/LNaNO 3溶液定 容到7. 0mg/mL，在4°C冰箱放置12h后取出，恢复至室温后用0. 22 μπι滤膜过滤，即得芦荟 多糖GPC分析供试液。
[0017] 在本发明中，优选的，步骤（3)中所述的芦荟多糖的GPC分析的条件为：色谱柱为 按照Shodex SUGAR KS-805色谱柱在前，KS-803色谱柱在后的顺序将两色谱柱串联使用； 流动相为含质量分数为〇. 2%。似队的0. lmol/L NaN03溶液，洗脱速度为0. 8ml/min ;色谱柱 和凝胶渗透色谱仪的示差折光检测器的温度分别为60°C和50°C ;进样量为50 μ L。
[0018] 本发明还提供了由上述构建方法得到的芦荟多糖标准指纹图谱，其特征在于，比 较同一产地不同批次或不同产地芦荟多糖样品的指纹图谱，确定共有特征峰4个，以2号峰 作为参照峰，计算指纹图谱中各特征峰的相对保留时间，各特征峰的相对保留时间的相对 标准偏差RSD均小于3% ;即：
[0019] 1号峰，平均相对保留时间为0· 468, RSD为0· 8~2. 24% ;
[0020] 2号峰，平均相对保留时间为0· 490, RSD为0 ;
[0021] 3号峰，平均相对保留时间为0· 508, RSD为0· 01~0· 02% ;
[0022] 4号峰，平均相对保留时间为0· 523, RSD为0· 02~0· 06%。
[0023] 与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：
[0024] (1)本发明供试液制备简便，GPC色谱条件容易实现；
[0025] (2)本发明串联使用Shodex SUGAR KS-805色谱柱和KS-803色谱柱（KS-805色谱 柱在前，KS-803色谱柱在后），保证了芦荟凝胶多糖中的4个多糖成分得到分离，且峰形对 称，满足GPC指纹图谱制作的要求；
[0026] (3)本发明指纹图谱测定方法精密度高，重现性和稳定性好；
[0027] (4)本发明所建立的芦荟多糖标准指纹图谱可作为检测库拉索芦荟多糖的一种工 具，用于同一产地不同批次或不同产地库拉索芦荟凝胶制品的内在质量控制。
【附图说明】
[0028] 图1为10批次北京产芦荟凝胶多糖的GPC指纹图谱；
[0029] 图2为库拉索芦荟凝胶多糖成分标准GPC指纹图谱；
[0030] 图3为10个产地芦荟凝胶多糖的GPC指纹图谱。
【具体实施方式】
[0031] 下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而 更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术 人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式 进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
[0032] 本发明中所出现的缩略语的说明：
[0033] GPC凝胶渗透色谱
[0034] RSD相对标准偏差
[0035] RID示差折光检测器
[0036] 实施例1北京产芦荟多糖标准指纹图谱的建立方法
[0037] 1仪器、试剂与材料
[0038] 1. 1实验仪器
[0039] Waters 2695凝胶色谱仪及Waters 2414示差折光检测器（美国沃特斯公司），数 据由Empower 3数据处理软件（美国沃特斯公司）和中药色谱指纹图谱相似度评价系统 (国家药典委员会，2004A版）记录和处理；CP224S分析天平（德国赛多利斯有限公司）； JHBE-50T闪式提取器（河南金鼐科技发展有限公司）；RE-2000旋转蒸发器（上海亚荣生 化仪器厂）；BM253榨汁机（美的集团有限公司）；Bench Top 4K真空冷冻干燥机（美国 Virtis 公司）。
[0040] 1. 2实验试剂与材料
[0041] 1.2.1化学试剂
[0042] 硝酸钠、叠氮钠、无水乙醇等常用试剂均为国产分析纯；实验用纯净水为杭州娃哈 哈集团有限公司瓶装水。
[0043] 1. 2. 2芦荟新鲜叶片
[0044] 库拉索芦荟鲜叶购自北京顺义，10个不同批次依次编号为S1~S10。所采库拉索 芦荟鲜叶均为3年生的成熟芦荟叶片。
[0045] 2芦荟鲜叶多糖的制备
[0046] 取库拉索芦荟鲜叶适量，洗净后去皮，芦荟凝胶清洗、切块，用搅拌机初步破碎 后置于闪式提取器进一步匀浆处理，得凝胶匀浆液；凝胶匀浆液减压抽滤，滤液收集并于 60°C旋蒸浓缩，浓缩液冷却后边搅拌边加入无水乙醇至其体积分数为80%，4°C冷藏过夜， 次日10000rad/min离心15min，得沉淀；待沉淀乙醇挥干后，放入-40°C冰箱冷冻，然后置于 真空冷冻干燥机中冻干，冻干粉研磨，即得芦荟凝胶多糖，待分析。
[0047] 3芦荟凝胶多糖GPC分析供试液的制备
[0048] 精确称取待分析芦荟凝胶多糖适量，用0. lmol/L NaN03溶液（含质量分数为 0. 2%〇NaN3)定容到7. Omg/mL，在4°C冰箱放置12h后取出，恢复至室温后用0. 22μπι滤膜 过滤，即得芦荟凝胶多糖GPC分析的供试品溶液。
[0049] 4芦荟凝胶多糖的凝胶渗透色谱（GPC)分析
[0050] 芦荟凝胶多糖成分GPC指纹图谱分析的色谱条件为：色谱柱为Shodex SUGAR KS-805色谱柱和KS-803色谱柱串联使用（KS-805色谱柱在前，KS-803色谱柱在后）， 0. lmol/L似勵3溶液（含质量分数为0. 2%。NaN 3)以0. 8ml/min的速度洗脱，色谱柱和RID 温度分别为60°C和50°C，进样量：50 μ L。在此条件下进样分析同一产地不同批次芦荟鲜叶 多糖及芦荟产品多糖，得到芦荟凝胶多糖的GPC色谱指纹图谱并计算色谱图中各峰的相对 保留时间和各峰的相对峰面积。
[0051] 5标准指纹图谱的建立
[0052] 10批次北京产芦荟凝胶多糖的GPC指纹图谱见图1。库拉索芦荟凝胶多糖成分标 准GPC指纹图谱见图2。对10批次北京产库拉索芦荟凝胶多糖的GPC色谱图进行比较，确 定共有特征峰4个，并将色谱数据导入指纹图谱专用软件（中药色谱指纹图谱相似度评价 系统（2004Α版））得到由其共有特征峰构成的芦荟凝胶多糖的标准色谱GPC指纹图谱（见 图2)。4个共有特征峰的相对保留时间（相对于图2中的2号峰的保留时间）（R t)的相对 标准偏差RSD均小于1 %，相对峰面积（相对于图2中的2号峰的峰面积）的相对标准偏差 RSD为1. 22%~3. 42% (详见表1)，2号峰对应一种特定分子量的芦荟多糖成分。
[0053] 表1 10批次北京产库拉索芦荟凝胶多糖GPC指纹图谱共有峰的相对峰面积和相 对保留时间的RSD
[0054]
[0055] 6指纹图谱重现性试验
[0056] 分别准确称取北京产芦荟鲜叶样品5份，按照上述方法制备芦荟凝胶多糖和芦荟 多糖GPC分析供试液，并在同样的上述色谱条件下进行GPC分析，分别对共有峰的相对保留 时间及相对峰面积（相对于图2中的2号峰）进行统计，RSD均小于3% (详见表2)。
[0057] 表2重现性实验结果（η = 5)
[0058]
[0059] 7指纹图谱精密度试验
[0060] 以北京产库拉索芦荟鲜叶样品为供试品，按照上述方法制备芦荟凝胶多糖和芦荟 多糖GPC分析供试液，并在同样的上述色谱条件下进行GPC分析，分别对共有峰的相对保留 时间及相对峰面积（相对于图2中的2号峰）进行统计，它们的相对保留时间和相对峰面 积的RSD均小于3%。
[0061] 8指纹图谱稳定性试验
[0062] 以北京产库拉索芦荟鲜叶样品为供试品，按照上述方法制备芦荟凝胶多糖和芦荟 多糖GPC分析供试液，并在同样的上述色谱条件下进行GPC分析，每2小时进样一次，考察 24小时样品溶液稳定性，分别对共有峰的相对保留时间及相对峰面积（相对于图2中的2 号峰）进行统计，RSD均小于3%。
[0063] 以上试验结果显示，上述指纹图谱测定方法精密度高、稳定性和重现性好。
[0064] 9库拉索芦荟凝胶多糖GPC色谱标准指纹图谱相似度评价
[0065] 利用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）"进行相似度评价，结果见表 3〇
[0066] 表3 10批次北京产库拉索芦荟凝胶多糖成分相似度评价
[0067]
[0068] 经"