一种防控肿瘤细胞的组合物及其用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体而言，是一种防控肿瘤细胞的组合物及其用途。
【背景技术】
[0002] 绿茶约占世界茶叶消费量的20 %，在中国、日本、韩国等亚洲国家比较受欢迎。儿 茶素占绿茶干重的10 %-15 %，表儿茶素（Epica tech in，EC)、表没食子儿茶素 (Epigallocatechin，EGC)、表儿茶素没食子酸酯(Epicatechingal late，ECG)和表没食子儿 茶素没食子酸酯(Epigal locatechingal late，EGCG)是最主要的四种儿茶素，其中EGCG是绿 茶儿茶素主要成分，占儿茶素总量的50%-75%。1987年富田勋首次报道了 EGCG对人体肿瘤 细胞具有较高体外抑制作用。随后大量研究表明，EGCG具有抗突变，抗氧化，抗血管形成，抗 粘附，抗肿瘤浸润，抗炎，抗病毒等一系列生物学活性。这些作用使EGCG具有非常广阔的应 用前景和市场价值。然而，EGCG具有多酚类化学结构，与空气接触极易被氧化分解，并不能 真正有效的做成药物、保健品或者其它能够保存的产品供人类使用。
【发明内容】
[0003] 为解决现有技术中表没食子儿茶素没食子酸酯易分解，很难实现产品化的技术缺 陷，本发明公开了一种防控肿瘤细胞的组合物，实现能够将表没食子儿茶素没食子酸酯成 分固化到产品中目的，降低分解率，使表没食子儿茶素没食子酸酯作为有效成分作为药物、 保健品或其它形式的产品应用到市场中。
[0004] 实现上述目的采用的技术方案为，本发明提供的一种防控肿瘤细胞的组合物，该 组合物包括绿茶提取物、有机酸、红甜椒粉。本发明发现，将绿茶提取物与有机酸组合，能显 著提高EGCG的稳定性，另一方面，将绿茶提取物与红甜椒组合，具有良好的协同作用，尤其 抗肿瘤方面效果显著。
[0005] 优选的，绿茶提取物在组合物中的重量份数为50-100份，有机酸在组合物中的重 量份数为0.1-1份，红甜椒粉在组合物的重量份数为1-5份。所优选的重量份数为调配充分 发挥效果、成本最低的选择。
[0006] 进一步的，绿茶提取物包括表没食子儿茶素没食子酸酯，其在绿茶提取物中的质 量浓度为1〇%_98%。进一步，更优选的，本发明中没食子儿茶素没食子酸酯在绿茶提取物 中的质量浓度为85-95%。进一步，绿茶提取物中的没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)含量 90%效果最佳，防控肿瘤细胞的作用最强，所选择的浓度与有机酸、红甜椒粉混合稳定性最 强、防空肿瘤细胞的作用也是最强的。
[0007] 进一步的，有机酸包括苹果酸、柠檬酸、维生素 C的一种或一种以上。上述有机酸与 绿茶提取物组合均可提尚绿茶提取物的稳定性。
[0008] 进一步的，该组合物还包括药学可接受的载体，制成各种剂型的药物组合物，可将 该组合物采用现有技术方法制备成各种剂型的混合物，方法包括如下步骤(1)配料:按配方 称取绿茶提取物、有机酸、红甜椒粉以及辅料，混合均匀，优选采用等量递增混合方式进行 混合均匀；
[0009] (2)制粒：将（1)中配制好的物料用75 %乙醇溶液制软材，湿法制粒，45~60 °C干 燥，整粒；
[0010] (3)包装、检验，即得本发明含有EGCG、维生素C和红甜椒粉的颗粒剂，也可采用现 有方法可将上述颗粒剂灌装于空心胶囊壳中得到胶囊剂，或者将上述颗粒剂通过压片工艺 压制成片剂。
[0011] 本发明还公开了上述组合物的用途，作为防控乳腺肿瘤细胞、肺癌细胞、食管癌细 胞、胃癌细胞、肝癌细胞、结直肠癌细胞、胰腺癌细胞、子宫颈癌细胞、前列腺癌细胞、皮肤癌 细胞、口腔癌细胞以及白血病肿瘤细胞的组合物用途。
[0012] 综上，本发明的有益效果为，基于绿茶提取物具有的抗肿瘤作用，开发了一种防控 肿瘤细胞的组合物，在制备过程中，加入了有机酸和红甜椒粉。有机酸能抑制绿茶提取物氧 化，使绿茶提取物处于稳定状态。红甜椒中的抗癌色素与绿茶提取物具有协同作用，最大程 度的发挥其效价，增加其抗癌效果。
【具体实施方式】
[0013] 下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细描述。
[0014] 实施例一:本发明公开的一种防控肿瘤细胞的组合物，包括绿茶提取物、有机酸、 红甜椒粉。绿茶提取物中主要含有表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)，该成份具有良好防 控肿瘤细胞的作用，但是极易被氧化分解，并不能真正的做成药物、保健品等供人类使用， 将绿茶提取物与有机酸组合，能显著提高EGCG的稳定性，另一方面，将绿茶提取物与红甜椒 组合，具有良好的协同作用，尤其抗肿瘤方面效果显著。
[0015]下述试验说明，有机酸与EGCG混合，能够增强EGCG稳定性的作用，同时也用以说明 选择能够使EGCG稳定时所作的试验选择过程。
[0016]从有机酸中选择抗坏血酸对EGCG的稳定性实验：
[0017] 方法:分别吸取0.5mL EGCG储备液于3支25mL比色管中，再加入4mL水，编号1、2、3、 4、5，1号作为对照液进行定性扫描，向2号比色管中逐滴加入0.10、0.25、0.40、0.55、0.70、 0.85mL抗坏血酸溶液(0.0Imo 1/L)，分别在80°C水浴反应Oh，Ih，2h，4h，6h后，进行HPLC检测 EGCG含量，试验结果如下：
[0020] 以上研究结果表明，添加维生素C后能明显增加EGCG的热稳定性。
[0021] 下述试验说明，红甜椒粉与EGCG混合，能够协同EGCG增强防控肿瘤细胞的作用，同 时也用以说明选择能够使EGCG稳定时所作的试验选择过程。
[0022] EGCG与红甜椒粉的组合物在抗肿瘤方面的显著性作用试验：
[0023]通过建立肺癌移植瘤模型，研究EGCG及其组合物对肿瘤的抑制作用。
[0024] 一、实验动物;BALB/c裸鼠60只，5~6周龄，雄性，（20 ± 2)g，购自必凯实验动物有 限公司【动物合格证号SCXK(沪)】。饲养于上海交通大学药学院实验动物中心SPF级动物房， 室温25°C，湿度40%~70%之间，自由进食与饮水。
[0025]二、方法:人肺腺癌细胞裸鼠移植瘤模型的建立和分组:40只鼠随机分为4组，每组 10只，分别为对照组、EGCG组、红甜椒粉、EGCG与红甜椒粉的组合物组。试验第1周每天各组 小鼠灌胃药物或生理盐水0.2mL(对照组），1周后取人肺癌细胞H460株（I X l〇VmL)0.2mL接 种于裸鼠右腋部皮下，即完成裸鼠肿瘤接种。以后每天向各组小鼠灌胃1次〇.2mL的药物或 生理盐水。21d后，采血后断颈处死荷瘤裸鼠，剥取皮下实体瘤瘤块，剔除筋膜，测量并计算 各组瘤体积和抑瘤率，抑瘤率=(对照组瘤体积-实验组瘤体积)/对照组瘤体积X 100%。 [0026] 对照组:注射生理盐水；
[0027] EGCG组：按EGCG计50mg/Kg，溶解于生理盐水；
[0028]红甜椒粉组:按红甜椒粉计5mg/Kg，溶解于生理盐水；
[0029] EGCG与红甜椒粉的组合物组：按EGCG计50mg/Kg，红甜椒粉计5mg/Kg，溶解于生理 盐水。
[0030] 结果如下：
[0032] 注:*，与EGCG和红甜椒粉相比较，p〈0 · 05。
[0033]结论:本发明EGCG和红甜椒粉的组合物在裸鼠实验动物模型实验中，具有显著抑 制肿瘤生长的作用；与EGCG组、红甜椒粉组比较，具有显著差异(p〈0.05)，说明EGCG和红甜 椒粉的组合物在抗肿瘤方面具有良好的协同作用。
[0034] 实施例二:本发明公开的一种防控肿瘤细胞的组合物，包括绿茶提取物、苹果酸、 红甜椒粉，各成分在组合物中的重量份数分别为，绿茶提取物在组合物中的重量份数为50 份，苹果酸在组合物中的重量份数为1份，甜椒粉在组合物的重量份数为1份。
[0035] 进一步的，绿茶提取物包括表没食子儿茶素没食子酸酯，其在绿茶提取物中的质 量浓度为90 %。
[0036] 以下采用试验说明本发明选择的表没食子儿茶素没食子酸酯质量浓度是根据对 癌细胞抑制作用筛选出来的。
[0037]不同含量的EGCG对前列腺癌细胞株PC-3生长的抑制作用：
[0038] 1.材料与方法
[0039] 1.1材料与试剂
[0040] EGCG购自美国sigma公司；二甲基亚砜(DM S0)、四甲基偶氮噻唑盐(MTT)、胰蛋白 酶购自上海生物工程有限公司:F12培养液购自GIBCO生物技术公司；新生牛血清购自杭州 四季青试剂公司；其余试剂均为国产分析纯。
[0041] 1.2细胞及培养
[0042] 前列腺癌细胞株PC-3购自中国科学院上海细胞所。用含10%新生牛血清，lOOU/mL 青霉素/链霉素的Fl2培养液，置于37°C，5 %C〇2恒温培养箱中培养，每3-4天传代一次，消化 液为0.25 %胰蛋白酶溶液。
[0043] 1 · 3细胞存活率测定(MTI