ti)
[0044] 取对数生长期细胞，接种于96孔板，每孔190yL，细胞密度约为105个/孔，设平行培 养液对照，培养48h后，每孔加入不同浓度EGCG溶液I OyL，对照孔加入IOyL培养液。每种药物 浓度设6个重复。加入药物后继续培养48h，取出后每孔加入20yL MTT，放入CO2培养箱继续 培养4h。取出96孔板，弃孔内液体，每孔加入150yL DMSO，迅速用水平振荡器摇动，使孔内紫 色结晶物充分溶解，30min内用酶标仪读取492nm的吸光度值。每孔的吸光度值减去并列平 行孔的吸光度值，得到绝对吸光度值，阳性对照减去阴性对照吸光度值，为正常细胞的绝对 吸光度值，将正常细胞存活率设为100 %，各孔绝对吸光度值与正常细胞绝对吸光度值之比 为各自的细胞存活率。
[0045] 2.实验结果 [0046] MTT实验结果如下：
[0049]研究表明，EGCG作用48小时，PC-3细胞的生长受到抑制，变化曲线呈剂量依赖性， 随着EGCG含量的增加，显现较好的抑制生长效果，细胞存活率呈直线下降趋势，其中绿茶提 取物中EGCG含量90 %效果最佳。
[0050] 实施例三:本发明公开的一种防控肿瘤细胞的组合物，包括绿茶提取物、柠檬酸、 红甜椒粉，各成分在组合物中的重量份数分别为，绿茶提取物在组合物中的重量份数为100 份，柠檬酸在组合物中的重量份数为〇. 1份，甜椒粉在组合物的重量份数为5份。
[0051] 进一步的，绿茶提取物包括表没食子儿茶素没食子酸酯，其在绿茶提取物中的质 量浓度为95 %。
[0052]可将该组合与药学可接受的载体混合制备而成的任何药剂形式，例如，可将该组 合物制成片剂、胶囊、颗粒或粉末形式制备组合物，则可使用赋形剂如乳糖、蔗糖、葡萄糖、 淀粉、糊精和/或麦芽糖糊精、硫酸钙、碳酸钙、磷酸钙和/或磷酸氢钙、微晶纤维素作为运载 体;粘合剂如水、乙醇、淀粉和/或经水解的淀粉溶液、明胶溶液、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤 维素、甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮；崩解剂如干淀粉、交联羧甲纤维素、羧甲 基淀粉钠、低取代羟丙基甲基纤维素和交联聚乙烯吡咯烷酮；润滑剂如硬脂酸镁、微粉硅 胶、纯化的滑石粉、氢化植物油、聚乙二醇和月桂醇硫酸镁等。
[0053]其制备方法可采用现有的方法，例如：
[0054] (1)配料:按配方称取绿茶提取物、有机酸、红甜椒粉以及辅料，混合均匀，优选采 用等量递增混合方式进行混合均匀；
[0055] (2)制粒：将（1)中配制好的物料用75 %乙醇溶液制软材，湿法制粒，45~60 °C干 燥，整粒；
[0056] (3)包装、检验，即得本发明含有EGCG、维生素C和红甜椒粉的颗粒剂，也可采用现 有方法可将上述颗粒剂灌装于空心胶囊壳中得到胶囊剂，或者将上述颗粒剂通过压片工艺 压制成片剂。
[0057] 采用本发明的组合物对肺癌细胞、食管癌细胞、胃癌细胞、肝癌细胞、结直肠癌细 胞、胰腺癌细胞、子宫颈癌细胞、前列腺癌细胞、皮肤癌细胞、口腔癌细以及白血病肿瘤细胞 都具有防控作用，可采用下述方法对防控作用进行测验。
[0058] 本组合物对不同肿瘤细胞株生长的抑制作用：
[0059] 1.材料与方法
[0060] 1 · 1材料与试剂
[00611 EGCG购自美国sigma公司；二甲基亚砜(DMS0)、四甲基偶氮噻唑盐(MTT)、胰蛋白酶 购自上海生物工程有限公司；DMEM培养基和RPMI 1640培养基粉剂购自GIBCO公司；新生牛 血清购自杭州四季青试剂公司；其余试剂均为国产分析纯。
[0062] 1.2细胞及培养
[0063] 肿瘤细胞株购自中国科学院上海细胞所。EC109细胞，HepG2细胞，MCF7细胞， MIAPaCa-2细胞，A431细胞，MGC803细胞，人口腔癌细胞HB均用DMEM完全培养基培养，A549细 胞，Hela细胞，SWl 16细胞，HL-60人急性早幼粒细胞白血病细胞用RPMI 1640完全培养基培 养，置于37 °C，5 % C02恒温培养箱中培养，每3-4天传代一次，消化液为0.25 %胰蛋白酶溶 液。
[0064] 1 · 3细胞存活率测定(MTIti)
[0065]取对数生长期细胞，接种于96孔板，每孔190yL，细胞密度约为IO5个/孔，设平行培 养液对照，培养48h后，每孔加入不同浓度本组合物溶液10yL，对照孔加入IOyL培养液。每种 药物浓度设6个重复。加入药物后继续培养48h，取出后每孔加入20yL MTT，放入⑶2培养箱 继续培养4h。取出96孔板，弃孔内液体，每孔加入150yL完全培养基，迅速用水平振荡器摇 动，使孔内紫色结晶物充分溶解，30min内用酶标仪读取492nm的吸光度值。每孔的吸光度值 减去并列平行孔的吸光度值，得到绝对吸光度值，阳性对照减去阴性对照吸光度值，为正常 细胞的绝对吸光度值，将正常细胞存活率设为100 %，各孔绝对吸光度值与正常细胞绝对吸 光度值之比为各自的细胞存活率。
[0066] 2.实验结果
[0067] MTT实验结果如下：
[0070] 研究表明，本组合物作用不同肿瘤细胞48小时时，各肿瘤细胞的生长受到抑制效 果明显。
[0071] 实施例四：本发明公开的一种防控肿瘤细胞的组合物，包括绿茶提取物、柠檬酸、 红甜椒粉，各成分在组合物中的重量份数分别为，绿茶提取物在组合物中的重量份数为70 份，柠檬酸在组合物中的重量份数为〇. 5份，甜椒粉在组合物的重量份数为3份。
[0072] 进一步的，绿茶提取物包括表没食子儿茶素没食子酸酯，其在绿茶提取物中的质 量浓度为10 %。
[0073] 实施例五:本发明公开的一种防控肿瘤细胞的组合物，包括绿茶提取物、柠檬酸、 红甜椒粉，各成分在组合物中的重量份数分别为，绿茶提取物在组合物中的重量份数为60 份，柠檬酸在组合物中的重量份数为〇. 7份，甜椒粉在组合物的重量份数为2.5份。
[0074] 进一步的，绿茶提取物包括表没食子儿茶素没食子酸酯，其在绿茶提取物中的质 量浓度为98 %。
[0075] 实施例六:本发明公开的一种防控肿瘤细胞的组合物，包括绿茶提取物、柠檬酸、 红甜椒粉，各成分在组合物中的重量份数分别为，绿茶提取物在组合物中的重量份数为85 份，柠檬酸在组合物中的重量份数为〇. 3份，甜椒粉在组合物的重量份数为4份。
[0076] 进一步的，绿茶提取物包括表没食子儿茶素没食子酸酯，其在绿茶提取物中的质 量浓度为20 %。
[0077] 实施例七:本发明公开的一种防控肿瘤细胞的组合物，包括绿茶提取物、柠檬酸、 红甜椒粉，各成分在组合物中的重量份数分别为，绿茶提取物在组合物中的重量份数为78 份，柠檬酸在组合物中的重量份数为〇. 6份，甜椒粉在组合物的重量份数为2份。
[0078] 进一步的，绿茶提取物包括表没食子儿茶素没食子酸酯，其在绿茶提取物中的质 量浓度为50 %。
[0079] 以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技 术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修 改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种防控肿瘤细胞的组合物，其特征在于，该组合物包括绿茶提取物、有机酸、红甜 椒粉。2. 根据权利要求1所述防控肿瘤细胞的组合物，其特征在于，绿茶提取物在组合物中的 重量份数为50-100份，有机酸在组合物中的重量份数为0.1-1份，红甜椒粉在组合物的重量 份数为1 _5份。3. 根据权利要求1所述的防控肿瘤细胞的组合物，其特征在于，绿茶提取物包括表没食 子儿茶素没食子酸酯，其在绿茶提取物中的质量浓度为1〇%_98%。4. 根据权利要求1所述防控肿瘤细胞的组合物，其特征在于，有机酸包括苹果酸、柠檬 酸、维生素 C的一种或一种以上。5. 根据权利要求1所述防控肿瘤细胞的组合物，其特征在于，该组合物还包括药学可接 受的载体。6. 权利要求1所述防控肿瘤细胞组合物的用途，其特征在于，作为防控乳腺肿瘤细胞、 肺癌细胞、食管癌细胞、胃癌细胞、肝癌细胞、结直肠癌细胞、胰腺癌细胞、子宫颈癌细胞、前 列腺癌细胞、皮肤癌细胞、口腔癌细以及白血病肿瘤细胞的组合物用途。
【专利摘要】本发明公开了一种防控肿瘤细胞的组合物，该组合物包括绿茶提取物、有机酸、红甜椒粉。本发明的优点在于，有机酸能抑制绿茶提取物氧化，使绿茶提取物处于稳定状态。红甜椒中的抗癌色素与绿茶提取物具有协同作用，最大程度的发挥其效价，增加其抗癌效果。
【IPC分类】A61K36/82, A61K31/353, A61P35/00, A61K47/12, A61P35/02, A61K47/22, A61K36/81
【公开号】CN105641218
【申请号】
【发明人】丛峰松
【申请人】上海金苇子生物技术有限公司
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年2月1日