克隆质粒pEASY-Tl-H质粒图谱。
[0028] 图4是实施例1中重组克隆质粒pEASY-Tl-L质粒图谱。
[0029] 图5是实施例1中重组克隆质粒pEASY-Tl-H的菌液PCR鉴定结果，图中Μ是DNA marker lk; 1，2,8,10,11，14是阳性克隆重组子;3~7，9,12~13,15~18是阴性克隆。
[0030] 图6是实施例1中重组克隆质粒PEASY-T1-L的菌液PCR鉴定结果，图中Μ是DNA markerlk; 1，6，7是阳性克隆重组子;3~5，8~9是阴性克隆。
[0031] 图7是重组克隆质粒pEASY-Tl-L/pEASY-Tl-H及其Xho頂每切产物电泳图，图中Μ是 DNA marker III;G1 是pEASY-Tl-L质粒;G2是pEASY-Tl-H质粒；Ρ1，Ρ2是pEASY-Tl克隆；Η是 重链基因 H ;L是轻链基因 L。
[0032]图8是抗pl85CTbB2人鼠嵌合抗体ChAb26重链基因 Η测序及其核苷酸同源性比对分析 结果。
[0033]图9是抗pl85CTbB2人鼠嵌合抗体ChAb26轻链基因 L测序及其核苷酸同源性比对分析 结果。
[0034] 图10是Xho頂每切pBCl骨架的电泳图，图中Μ是λ DNA marker;l~6是pBCl质粒（线 性）；7是pBCl质粒(环状)。
[0035] 图11是Xhol酶切重组克隆质粒pEASY-Tl-L电泳图，图中Μ是lk DNA marker;Pl，P2 是pEASY-Tl克隆质粒;LI，L2是嵌合抗体轻链基因 L。
[0036] 图12是Xhol酶切重组克隆质粒pEASY-Tl-Η电泳图，图中Μ是lkDNA marker;Pl~P4 是pEASY-Tl克隆质粒;HI~H4是嵌合抗体重链基因 Η。
[0037] 图13是实施例1中乳腺特异性表达载体pBCl-L质粒图谱。
[0038]图14是实施例1中乳腺特异性表达载体pBCl-Η质粒图谱。
[0039] 图15是乳腺特异性表达载体pBCl-L菌液PCR鉴定结果，图中Μ是DNA markerllI; 2， 9是阳性克隆；1，3~8,10~15是阴性克隆。
[0040] 图16是乳腺特异性表达载体pBCl-Η菌液PCR鉴定结果，图中Μ是DNA markerllI; 2， 3,7,9，11是阳性克隆；1，4~6,8，10是阴性克隆。
[0041 ] 图17是乳腺特异性表达载体pBCl-L电泳图，图中Μ是DNA λ marker;l，2是pBCl-L 质粒。
[0042] 图18是乳腺特异性表达载体pBCl-Η电泳图，图中Μ是DNA λ marker;l，2是pBCl-Η 质粒。
[0043] 图19是乳腺特异性表达载体pBCl-L抗pl85eibB2中嵌合抗体ChAb26轻链基因 L核酸 序列同源比对分析图，图中红色下划线为Xhol多克隆位点。
[0044]图20是乳腺特异性表达载体pBCl-Η抗pl85eibB2中嵌合抗体ChAb26重链基因 Η核酸 序列同源比对分析图，图中红色下划线为Xhol多克隆位点。
[0045] 图21是乳腺特异性表达线性化载体pBCl-L-linear质粒图谱。
[0046] 图22是乳腺特异性表达线性化载体pBCl-H-linear质粒图谱。
[0047]图23是乳腺特异性表达载体?8(：1-!1质粒线性化电泳图，图中1(4)，2以)是?8(：1-!1-111^^1片段 ；1(8)，2(8)是口81?322+舳口丨(^11丨11片段；3是口8(：1-!1质粒;]\1是人]\&^1?^。
[0048]图24是乳腺特异性表达载体pBCl-L质粒线性化电泳图，图中1(A)是pBCl-L-1：[116&1'片段；1(13)是口131?322+細口;[(3；[11;[11片段；2是口13(]1-1^质粒;]\1是人]/[&11^1·。
[0049]图25是实施例2中F0代转基因小鼠鼠尾直接PCR电泳图，图中N是野生型FVB小鼠；1 ~8是小鼠编号;W是ddH20;Μ是DNA Marker III;NC是FVB小鼠内参;TgL是嵌合抗体轻链基 因 L部分DNA片段;TgH是嵌合抗体重链基因 Η部分DNA片段。
[0050]图26是实施例2中Fl(FO-l)代转基因小鼠鼠尾直接PCR电泳图，图中N是野生型FVB 小鼠；1~10是小鼠编号；W是ddH2〇;Ml是DNA Marker III;M2是DNA Marker I;NC是FVB小鼠 内参;TgL是嵌合抗体轻链基因 L部分DNA片段;TgH是嵌合抗体重链基因 Η部分DNA片段。
[0051 ]图27是实施例2中F2代(F0-1)转基因小鼠鼠尾直接PCR电泳图，图中Ν是野生型FVB 小鼠；1 ~9是小鼠编号；W是ddH20;Ml是DNA Marker ΙΙΙ;Μ1 是DNA Marker 100;NC是FVB小 鼠内参;TgL是嵌合抗体轻链基因 L部分DNA片段;TgH是嵌合抗体重链基因 Η部分DNA片段。 [0052]图28是实施例2中F3代(F0-1)转基因小鼠鼠尾直接PCR电泳图，图中N是野生型FVB 小鼠；1~11是小鼠编号;W是ddH20;M是DNA Marker III;NC FVB小鼠内参;TgL是嵌合抗体 轻链基因 L部分DNA片段;TgH是嵌合抗体重链基因 Η部分DNA片段。
[0053]图29是实施例2中F4代(F0-1)转基因小鼠鼠尾直接PCR电泳图，图中Ν是野生型FVB 小鼠；1~9是小鼠编号;W是ddH20;M是DNA Marker I;NC是FVB小鼠内参;TgL嵌合抗体轻链 基因 L部分DNA片段;TgH是嵌合抗体重链基因 Η部分DNA片段。
[0054]图30是实施例2中TR-PCR产物琼脂糖凝胶电泳图，图中：Ν是FVB野生型小鼠乳腺组 织cDNA; F0是F0转基因双阳性小鼠乳腺组织cDNA; F1是F1代转基因双阳性小鼠乳腺组织 cDNA;F2是F2代转基因双阳性小鼠乳腺组织cDNA;M是DNA Marker I; 1是FVB野生型小鼠/转 基因小鼠乳腺组织cDNA的内参产物;2嵌合抗体重链基因 Η部分cDNA片段的RT-PCR产物;3是 嵌合抗体轻链基因 L部分cDNA片段的RT-PCR产物。
[0055]图31是实施例2中荧光定量PCR实验内参引物的溶解曲线。
[0056]图32是实施例2中抗pl85el:bB2中嵌合抗体ChAb26轻链基因 L的溶解曲线。
[0057]图33是实施例2中抗pl85eibB2中嵌合抗体ChAb26重链基因 Η的溶解曲线。
[0058]图34是实施例2中嵌合抗体的mRNA相对表达量图。
[0059]图35是实施例2中免疫组化Western Blot鉴定嵌合抗体ChAb26的表达图，图中， 50KDa是50KDa重链；25KDa是25KDa轻链;mlgG是鼠 IgG; hlgG是人IgG; Tg是转基因小鼠乳汁； NC是野生型FVB鼠乳汁。
[0060]图36是实施例3中夹心ELISA鉴定嵌合抗体ChAb26的表达的浓度结果图，IgG是人 IgG; P是PBS溶液;N是FVB野生型小鼠乳汁;Tg是转基因小鼠乳汁；1-3是复孔编号。
[0061 ]图37是实施例2中Western Blot检测嵌合抗体ChAb26的表达免疫组化鉴定嵌合抗 体ChAb26的表达图（Nikon 200 X )，图中A是FVB野生型小鼠乳腺组织;B是F0代转基因双阳 性小鼠乳腺组织;C是F1代转基因双阳性小鼠乳腺组织;D是F2代转基因双阳性小鼠乳腺组 织。
[0062]图38是实施例2中夹心ELISA鉴定嵌合抗体ChAb26的表达(测定嵌合抗体的浓度） 结果图，图中1是200ng/ml人]^6;2是10〇1^/1111人]^6;3是5〇1^/1111人]^6 ;4是251^/1111人]^6; 5是12·5ng/ml人IgG;6是6·25ng/ml人IgG;7是3·125ng/ml人IgG;8是Ong/ml人IgG;9是FVB 野生型小鼠乳汁；10是转基因小鼠乳汁;a-c是复孔编号。
[0063]图39是实施例3中转基因双阳性小鼠乳汁中嵌合抗体的ELI SA定量标准曲线与回 归方程图，图中F = 29.331(P<0.05);R2 = 0.83;t = 5.416(P<0.05)。
[0064]图40是实施例3中直接ELISA测定嵌合抗体的抗原特异性，图中A图是直接ELISA测 定嵌合抗体的抗原特异性图，1是鼠抗人erbB2单抗;2是人IgG; 3是鼠 IgG; 4是PBS; 5是转基 因双阳性小鼠乳汁;6是FVB野生型小鼠乳汁;a-c是复孔编号;B图是直接ELISA测定嵌合抗 体的抗原特异性图，1是鼠抗人erbB2单抗;2是人IgG; 3是鼠 IgG; 4是PBS; 5是转基因双阳性 小鼠乳汁;6是FVB野生型小鼠乳汁;a-c是复孔编号。
[0065] 图41是实施例3中western blot分析嵌合抗体ChAb26的人源性结果图，图中hlgG 是人I gG; F0是转基因双阳性F0代小鼠乳汁;F1是转基因双阳性F1代小鼠乳汁;F2是转基因 双阳性F2代小鼠乳汁;F3是转基因双阳性F3代小鼠乳汁;NC: FVB野生型小鼠乳汁;mlgG是鼠 IgG〇
[0066] 图42是实施例3中SK0V3细胞生长曲线。
[0067] 图43是实施例3中SK0V3细胞凋亡的形态学特征（24h，HE染色，NikonX400)图，图 中A是细胞空白对照组;B是FVB野生型小鼠乳汁处理组;C是0.48mg. I^ChAbSe处理组;D是 0 · 50mg · L-herceptin 处理组。
[0068] 图44是实施例3中SK0V3细胞凋亡的超微结构特征（24h，H-7650)图，图中A是细胞 空白对照组；B是FVB野生型小鼠乳汁处理组；C是0 · 48mg · L-khAbSe处理组；D是0 · 50mg · L- herceptin 处理组。
[0069]图45是流式细胞术(FCM)检测SK0V3的细胞凋亡（24h)图，图中A是细胞空白对照 组；B是FVB野生型小鼠乳汁处理组；C是0 · 48mg · L-khAbSe处理组；D是0 · 50mg · L-Percept in 处理组。
[0070] 图46是流式细胞术(FCM)检测SK0V3的细胞周期（24h)图，图中A是细胞空白对照 组；B是FVB野生型小鼠乳汁处理组；C是0 · 48mg · L-khAbSe处理组；D是0 · 50mg · L-Percept in 处理组。
【具体实施方式】
[0071] 实施例1抗pl85el:b B2人鼠嵌合抗体ChAb26转基因小鼠乳腺特异性表达载体的构建
[0072] 1、目的基因的获取
[0073] 以含有抗pl85eibB2人鼠嵌合抗体ChAb26重链Η和轻链基因 L的pUC57/pBCN-H-F2A-L-ployA-EGFP-Neo质粒为模板（图1)，在LA Taq DNA聚合酶作用下，分别以H-F/H-R (SEQ · ID · N0 · 1/SEQ · ID · N0 · 2)和L-F/L-R( SEQ · ID · N0 · 4/SEQ · ID · N0 · 5)为引物扩增出抗 pl