1.一种体细胞胚胎途径的槲蕨种苗组培快繁方法,包括如下步骤:外植体的获得;外植体预培养;外植体继代培养;体细胞胚胎分离和接种培养。
2.如权利要求1所述的体细胞胚胎途径的槲蕨种苗组培快繁方法,其特征在于,外植体的获得步骤包括:将槲蕨孢子无菌播种于孢子萌发培养基中,置于培养室,待孢子萌发并发育至配子体时期,在培养容器中添加无菌水,促进幼孢子体的形成。
3.如权利要求2所述的体细胞胚胎途径的槲蕨种苗组培快繁方法,其特征在于,所述的孢子萌发培养基为添加3%蔗糖的1/2ms培养基。
4.如权利要求1所述的体细胞胚胎途径的槲蕨种苗组培快繁方法,其特征在于,外植体预培养步骤包括:将幼孢子体叶片剪下接种至诱导体细胞胚的培养基,置于培养室预培养7天。
5.如权利要求4所述的体细胞胚胎途径的槲蕨种苗组培快繁方法,其特征在于,所述的诱导体细胞胚的培养基为添加0-3mg/l6-ba、3%蔗糖的1/2ms培养基,优选的,所述的诱导体细胞胚的培养基为添加0.5-2mg/l6-ba、3%蔗糖的1/2ms培养基,更优选的,所述的诱导体细胞胚的培养基为添加1mg/l6-ba、3%蔗糖的1/2ms培养基。
6.如权利要求1所述的体细胞胚胎途径的槲蕨种苗组培快繁方法,其特征在于,外植体继代培养步骤包括:将预培养7天的叶片外植体转接于含有3~5%蔗糖的1/2ms培养基中,置于培养室培养。
7.如权利要求1所述的体细胞胚胎途径的槲蕨种苗组培快繁方法,其特征在于,体细胞胚胎分离和成苗培养步骤包括:将产生的体细胞胚从外植体上剥离,接种至1/2ms+3%蔗糖+0.3%ac培养基,置于培养室培养。
8.如权利要求1-7任一项所述的体细胞胚胎途径的槲蕨种苗组培快繁方法,其特征在于,叶片外植体面积为0.4~0.8cm2。
9.如权利要求1-7任一项所述的体细胞胚胎途径的槲蕨种苗组培快繁方法,其特征在于,培养条件为:培养室温度为25±1℃,光照强度为50~60μmol/(m2·s),光周期为16/8h,湿度为30%。