,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,木肩粉0. 3g/L,VB1O. Olg/ L,余量为水,pH值6.0 ;
[0091] 所述摇瓶培养基组成为:黄豆饼粉60g/L,葡萄糖10g/L,蛋白胨5g/L,中草药提取 物I. 0g/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,木肩粉0. AgA^VB10.0 1g/L,余量为水,pH值 6. 0 ;
[0092] 所述种子罐培养基组成为:黄豆饼粉60g/L,葡萄糖10g/L,蛋白胨5g/L,中草药提 取物I. 2g/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,木肩粉0. 5g/L,VB10.0 1g/L,余量为水,pH 值 6. 0 ;
[0093] 所述发酵培养基的组成为:黄豆饼粉60g/L,葡萄糖10g/L,蛋白胨5g/L,中草药提 取物2g/L,木肩粉I. 0g/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,VB10.0 1g/L,余量为水,pH值 6. 0 ;
[0094] 所述发酵培养基的制备方法为:按照培养基配方准确称量各原料,首先取黄豆饼 粉质量6倍的水,用乳酸调节pH值为6,加入5u/g黄豆饼粉的耐高温a-淀粉酶,边搅拌边 加入黄豆饼粉,升温至95°C,保温,液化15min,然后降温至60°C,保温,边搅拌边加入40u/ g黄豆饼粉的糖化酶和30u/g黄豆饼粉的蛋白酶水解30min,边搅拌边加入剩余水和其它原 料,均匀混合,调整pH值为6. 0,121°C灭菌30min即得发酵培养基。
[0095] 经上述方法制备的高密度液体菌种菌丝球密度为4. 8 X IO5个/L,菌丝球直径为 0. 5mm,菌丝球干重为92g/L,胞外多糖为3. lg/L。
[0096] 实施例5
[0097] 一种高密度液体菌种的发酵方法,包括如下步骤:
[0098] 步骤1)至4)同实施例2 ;
[0099] 5)首先将种子罐种子以5%接种量接种于30L发酵罐,发酵培养基装液量15L,于 32°C、通气量3L/min恒温发酵24h,然后以0. 3°C /min的速率降温至22°C,向发酵罐中加入 8g包被壳聚糖和900mL种子罐种子,在通气量8L/min条件下恒温发酵10h,最后以0. 4°C / min的速率升温至24°C,在通气量7L/min条件下恒温发酵45h即得高密度液体菌种; [0100] 所述平板培养基组成同实施例2 ;
[0101] 所述液体种子培养基组成为:葡萄糖30g/L,酵母浸出汁5g/L,蛋白胨2g/L,琼脂 2g/L,中草药提取物0. 3g/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,木肩粉0. 3g/L,VB1O. Olg/ L,余量为水,pH值6.0 ;
[0102] 所述摇瓶培养基组成为:黄豆饼粉60g/L,葡萄糖10g/L,蛋白胨5g/L,中草药提取 物0. 5g/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,木肩粉0. 4g/L,VB10.0 1g/L,余量为水,pH值 6. 0 ;
[0103] 所述种子罐培养基组成为:黄豆饼粉60g/L,葡萄糖10g/L,蛋白胨5g/L,中草药提 取物0. 8g/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,木肩粉0. 5g/L,VB10.0 1g/L,余量为水,pH 值 6. 0 ;
[0104] 所述发酵培养基的组成为:黄豆饼粉60g/L,葡萄糖10g/L,蛋白胨5g/L,中草药提 取物I. 5g/L,木肩粉I. 0g/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,VB10.0 1g/L,余量为水,pH 值 6. 0 ;
[0105] 所述发酵培养基的制备方法为:按照培养基配方准确称量各原料,首先取黄豆饼 粉质量4倍的水,用乳酸调节pH值为6,加入5u/g黄豆饼粉的耐高温a-淀粉酶,边搅拌边 加入黄豆饼粉,升温至90°C,保温,液化15min,然后降温至50°C,保温,边搅拌边加入40u/ g黄豆饼粉的糖化酶和30u/g黄豆饼粉的蛋白酶水解30min,边搅拌边加入剩余水和其它原 料,均匀混合,调整pH值为6. 0,121°C灭菌40min即得发酵培养基。
[0106] 经上述方法制备的高密度液体菌种菌丝球密度为4. 6 X IO5个/L,菌丝球直径为 0. 7mm,菌丝球干重为90g/L,胞外多糖为3. lg/L。
[0107] 实施例6
[0108] -种高密度液体菌种的发酵方法,包括如下步骤:
[0109] 步骤1)至4)同实施例2 ;
[0110] 5)首先将种子罐种子以5%接种量接种于30L发酵罐,发酵培养基装液量15L,于 30°C、通气量5L/min恒温发酵12h,然后以0. 5°C /min的速率降温至18°C,向发酵罐中加入 IOg包被壳聚糖和900mL种子罐种子,在通气量6L/min条件下恒温发酵16h,最后以0. 2°C / min的速率升温至26°C,在通气量5L/min条件下恒温发酵52h即得高密度液体菌种;
[0111] 所述平板培养基组成同实施例2 ;
[0112] 所述液体种子培养基组成为:葡萄糖30g/L,酵母浸出汁5g/L,蛋白胨2g/L,琼脂 2g/L,中草药提取物0. 5g/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,木肩粉0. lg/L,VB1O. Olg/ L,余量为水,pH值6.0 ;
[0113] 所述摇瓶培养基组成为:黄豆饼粉60g/L,葡萄糖10g/L,蛋白胨5g/L,中草药提取 物1.0 g/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,木肩粉0. ZgA^VB10.0 1g/L,余量为水,pH值 6. 0 ;
[0114] 所述种子罐培养基组成为:黄豆饼粉60g/L,葡萄糖10g/L,蛋白胨5g/L,中草药提 取物I. 2g/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,木肩粉0. 3g/L,VB10.0 1g/L,余量为水,pH 值 6. 0 ;
[0115] 所述发酵培养基的组成为:黄豆饼粉60g/L,葡萄糖10g/L,蛋白胨5g/L,中草药提 取物2g/L,木肩粉0. 6g/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,VB10.0 1g/L,余量为水,pH值 6. 0 ;
[0116] 所述发酵培养基的制备方法为:按照培养基配方准确称量各原料,首先取黄豆饼 粉质量6倍的水,用乳酸调节pH值为5,加入5u/g黄豆饼粉的耐高温a-淀粉酶,边搅拌边 加入黄豆饼粉,升温至95°C,保温,液化10min,然后降温至60°C,保温,边搅拌边加入40u/ g黄豆饼粉的糖化酶和30u/g黄豆饼粉的蛋白酶水解20min,边搅拌边加入剩余水和其它原 料,均匀混合,调整pH值为6. 0,123°C灭菌30min即得发酵培养基。
[0117] 经上述方法制备的高密度液体菌种菌丝球密度为5. 2 X IO5个/L,菌丝球直径为 0. 6mm,菌丝球干重为98g/L,胞外多糖为3. 4g/L。
[0118] 实施例7
[0119] -种高密度液体菌种的发酵方法,包括如下步骤:
[0120] 步骤1)至4)同实施例2 ;
[0121] 5)首先将种子罐种子以5%接种量接种于30L发酵罐,发酵培养基装液量15L,于 31°C、通气量4L/min恒温发酵18h,然后以0.4°C /min速率降温至20°C,向发酵罐中加入 9g包被壳聚糖和900mL种子罐种子,在通气量7L/min条件下恒温发酵13h,最后以0. 3°C / min速率升温至25°C,在通气量6L/min条件下恒温发酵48h即得高密度液体菌种;
[0122] 所述平板培养基组成为:马铃薯200g/L,葡萄糖20g/L,蛋白胨5g/L,磷酸二氢钾 3g/L,硫酸镁 I. 5g/L,琼脂 20g/L,VB10.0 2g/L,余量为水,pH 值 6. 0 ;
[0123] 所述液体种子培养基组成为:葡萄糖30g/L,酵母浸出汁5g/L,蛋白胨2g/L,琼脂 2g/L,中草药提取物0. 4g/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,木肩粉0. 2g/L,VB1O. Olg/ L,余量为水,pH值6.0 ;
[0124] 所述摇瓶培养基组成为:黄豆饼粉60g/L,葡萄糖10g/L,蛋白胨5g/L,中草药提取 物0. 8g/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,木肩粉0. 3g/L,VB10.0 1g/L,余量为水,pH值 6. 0 ;
[0125] 所述种子罐培养基组成为:黄豆饼粉60g/L,葡萄糖10g/L,蛋白胨5g/L,中草药提 取物I. 0g/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,木肩粉0. 4g/L,VB10.0 1g/L,余量为水,pH 值 6. 0 ;
[0126] 所述发酵培养基的组成为:黄豆饼粉60g/L,葡萄糖10g/L,蛋白胨5g/L,中草药提 取物I. 8g/L,木肩粉0. 8g/L,磷酸二氢钾0. 5g/L,硫酸镁0. 5g/L,VB10.0 1g/L,余量为水,pH 值 6.0。
[0127] 经