本发明涉及生物发酵组合物技术领域，尤其涉及一种可提高肠道免疫的发酵沙棘组合物的制备方法。
背景技术：
肠道，不仅是人体内营养物质消化和吸收的主要场所，而且是多脏器功能障碍综合征、全身炎症反应综合征中最易受损的靶器官。正常人体的肠道粘膜屏障由机械屏障、生物膜屏障以及免疫屏障组成。完善的肠道粘膜防御体系可以有效阻止肠道内的有害物质进入体循环。目前来看，当人体在应激状态下，其肠道会产生大量的自由基，从而会导致肠道粘膜损伤。进一步地，在大量使用抗生素、出血、休克、持续全胃肠外营养、创伤、严重烧伤、急性重症胰腺炎、肝硬化、放化疗等情况下也均有可能出现肠粘膜屏障损伤的临床表现，从而降低肠道的免疫能力。
在现有技术中，关于修复肠道粘膜损伤的研究及技术方案也有很多，其中，CN103349153A公开了一种具有动物肠道修复功能的菌体复合物及其生产方法；CN100502940公开了一种肠粘膜损伤修复剂及其制备方法。事实上，益生菌可以改变肠道健康是本领域技术人员已知的，其中，具体包括改善肠道中菌群比例并转化某些肠内物质、拮抗结合位点从而阻止致病菌定植、调节抗炎与生炎因子之间的平衡进而促进肠道损伤上皮的修复以及增强上皮紧密连接、加强肠道粘膜屏障保护作用从而阻止细菌移位等。以上现有技术及相关研究成果都是采用益生菌群来对一般性的胃肠道损伤进行保护或修复，而针对氧化应激所造成的肠道损伤，尤其对于大量自由基的产生所造成的肠道粘膜损伤，目前来看尚没有很好的修复方法。
黄酮是应用最广泛的生理活性物质之一，沙棘的大部分药理学功效是通过黄酮的作用来实现的。沙棘黄酮抗氧化作用明显，刘锡建利用从沙棘果渣中提取的黄酮，经精制后对其进行还原能力、清除超氧阴离子自由基和清除经基自由基实验，实验结果表明沙棘黄酮有良好的抗氧化能力沙棘黄酮具有良好的抗癌作用，刘圆等开究沙棘黄酮对亚确基化合物在大鼠体内合成及诱发肿瘤的抑制情况，试验结果证明，沙棘黄酮防癌效果优良，甚至好于同剂量的维生素延长了大鼠的成活时间，有效预防了肿瘤的形成，缩小了癌变范围。沙棘黄酮还有调节血脂的作用，王振宇等将从沙棘果中提取的黄酮作用于小鼠体内，对小弓亡鼠的血脂指标和胆闹醇等各类指标进行了监测，结果表明，沙棘黄酮能增加小鼠体内的高密度脂蛋白，降低低密度脂蛋白和胆固醇等，作用效果明显。沙棘黄酮能增加小鼠吞唆细胞的吞喷功能，将黄酮给大鼠连续灌胃两周，能显著地增强其体液免疫力，可使大鼠血清中免疫球蛋白含量及补体水平显著升高，明显提高抗体生成数和抗菌作用效价。
将沙棘有效成分提取物与益生菌有机结合，全面提供有益于肠道吸收的有益菌群和高效的抗氧化物质的研究及相关产品还不多。
技术实现要素：
本发明克服了现有技术的不足，提供了一种可提高肠道免疫的发酵沙棘组合物的制备方法，是将沙棘叶和沙棘果经过酶解和生物发酵，提取有效成分并得到有利于肠道吸收的具有抗氧化作用的成分，将其与益生菌有机结合，可应用于提高肠道免疫力。
为了达到上述目的，本发明是通过如下技术方案实现的。
一种可提高肠道免疫的发酵沙棘组合物的制备方法，包括以下步骤。
a）将重量比为1:1-3的沙棘叶和沙棘果混合后磨浆，加入0.5-2倍重量的水充分搅拌后加入沙棘叶和沙棘果总重量1-3%的复合酶制剂，35-65℃下酶解4-12h后，过滤得到酶解液；所述的复合酶制剂为纤维素酶、葡聚糖酶、甘露聚糖酶的其中任意两种或三种。
b）将重量比为1-2:1的沙棘叶和沙棘果混合后磨浆，加入0.5-1倍重量的水充分搅拌后接入沙棘叶和沙棘果总重量0.1-0.5%的复合菌制剂在25-35℃下有氧发酵12-48h，发酵后过滤取发酵液；所述的复合菌制剂为巴氏醋杆菌、米根霉、酿酒酵母的其中任意两种或三种。
c）用有机溶剂提取沙棘叶得到沙棘叶提取物。
d）将所述的酶解液、发酵液和沙棘叶提取物分别浓缩至水分含量为20-30%。
e）将浓缩后的酶解液、发酵液和沙棘叶提取物按照重量比1:1-2:1-5混合得到组合物1。
f）将组合物1与混合益生菌制剂按照重量比为1:5-9混合均匀后干燥得到成品。
所述的混合益生菌为干酪乳杆菌和动物双歧杆菌。
优选的所述沙棘叶和沙棘果为鲜品。
优选的所述有机溶剂提取为75%的乙醇提取。
优选的所述干燥为冷冻喷雾干燥。
本发明与现有技术相比具有如下列有益效果：
沙棘叶和沙棘果中含有的丰富的营养物质和生物活性物质，通过酶解的作用，使沙棘叶和沙棘果中的大分子物质被充分降解，多糖类及纤维类物质被降解为有益于微生物生长代谢所利用的低聚糖类，同时，在喷雾干燥的过程中，由于此类物质具有一定的附着力及粘结力，可以将益生菌包裹在其中，保证了有益菌不被胃酸等分泌液破坏从而提高肠道的吸收及其活性。
通过微生物发酵沙棘叶及沙棘果中的营养成分，可以代谢出更丰富的利于肠道吸收利用的小分子有机物以及部分有活性的酶类，同时还包括各类有机酸，维生素、氨基酸类以及甾醇成分等，此类混合物一方面有助于肠道益生菌的生长代谢，另一方面也可以提高肠道的自身的免疫能力。
同时沙棘中含有有效生物活性成分黄酮，其中沙棘叶中黄酮含量最为丰富。采用有机溶剂提取，更为安全，溶剂残留量低，将沙棘叶提取物和益生菌结合使用，在改善肠道功能的同时，提高肠道的抗氧化能力，能够有效地清除体内自由基。
本发明通过生物手段降解沙棘叶和沙棘果中的大分子物质，为有益微生物代谢提供营养及物质基础，同时结合沙棘叶中丰富的抗氧化活性物质，通过干燥的技术，将有益菌牢牢包裹在内，可有效提高有益菌到达肠道的活性并产生有效的抗氧化性。
具体实施方式
为了使本发明所要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。下面结合实施例详细说明本发明的技术方案，但保护范围不被此限制。
实施例1
a）将重量比为1:1的沙棘叶和沙棘果混合后磨浆，加入0.5倍重量的水充分搅拌后加入沙棘叶和沙棘果总重量1%的纤维素酶和葡聚糖酶的混合酶，35℃下酶解4h后，过滤得到酶解液。
b）将重量比为1:1的沙棘叶和沙棘果混合后磨浆，加入0.5倍重量的水充分搅拌后接入沙棘叶和沙棘果总重量0.1%的巴氏醋杆菌（CICC20056）和米根霉（CICC3010）的混合菌在25℃下有氧发酵12h，发酵后过滤取发酵液。
c）用75%的乙醇在40℃下浸提12h，得到沙棘叶提取物。
d）将所述的酶解液、发酵液和沙棘叶提取物分别浓缩至水分含量为20%。
e）将浓缩后的酶解液、发酵液和沙棘叶提取物按照重量比1:1:1混合得到组合物1。
f）将组合物1与干酪乳杆菌（CICC6117）和动物双歧杆菌（CICC21711）的混合菌制剂按照重量比为1:5混合均匀后通过冷冻喷雾干燥得到成品。
实施例2
a）将重量比为1:3的新鲜沙棘叶和沙棘果混合后磨浆，加入2倍重量的水充分搅拌后加入沙棘叶和沙棘果总重量3%的纤维素酶和甘露聚糖酶的混合酶，65℃下酶解12h后，过滤得到酶解液。
b）将重量比为2:1的新鲜沙棘叶和沙棘果混合后磨浆，加入1倍重量的水充分搅拌后接入沙棘叶和沙棘果总重量0.5%的巴氏醋杆菌（CICC20056）和酿酒酵母（CICC1001）的混合菌在35℃下有氧发酵48h，发酵后过滤取发酵液。
c）用70%的乙醇在40℃下浸提10h，得到沙棘叶提取物。
d）将所述的酶解液、发酵液和沙棘叶提取物分别浓缩至水分含量为30%。
e）将浓缩后的酶解液、发酵液和沙棘叶提取物按照重量比1:2:5混合得到组合物1。
f）将组合物1与干酪乳杆菌（CICC6117）和动物双歧杆菌（CICC21711）的混合菌制剂按照重量比为1:9混合均匀后通过冷冻喷雾干燥得到成品。
实施例3
a）将重量比为1:2的新鲜沙棘叶和沙棘果混合后磨浆，加入1.5倍重量的水充分搅拌后加入沙棘叶和沙棘果总重量2%的纤维素酶、甘露聚糖酶和葡聚糖酶的混合酶，50℃下酶解8h后，过滤得到酶解液。
b）将重量比为1.5:1的新鲜沙棘叶和沙棘果混合后磨浆，加入1倍重量的水充分搅拌后接入沙棘叶和沙棘果总重量0.3%的巴氏醋杆菌（CICC20056）、酿酒酵母（CICC1001）和米根霉（CICC3010）的混合菌在30℃下有氧发酵30h，发酵后过滤取发酵液。
c）用70%的乙醇在45℃下浸提5h，得到沙棘叶提取物。
d）将所述的酶解液、发酵液和沙棘叶提取物分别浓缩至水分含量为25%。
e）将浓缩后的酶解液、发酵液和沙棘叶提取物按照重量比1:1.5:3混合得到组合物1。
f）将组合物1与干酪乳杆菌（CICC6117）和动物双歧杆菌（CICC21711）的混合菌制剂按照重量比为1:7混合均匀后通过冷冻喷雾干燥得到成品。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所做的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施方式仅限于此，对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的前提下，还可以做出若干简单的推演或替换，都应当视为属于本发明由所提交的权利要求书确定专利保护范围。