本发明涉及保健营养品
技术领域：
，具体涉及一种具有保健功能的益生菌固体饮料及其制备方法。
背景技术：
：益生菌(probiotic)又称微生态调节剂、生态制品、活菌制剂，是指能够促进场内生态菌群生态平衡，对宿主起有益作用的微生物，主要来源于动物肠道正常生理性细菌和非肠道菌。近10年来，越来越多的学者认识到肠道菌群对人类健康的重要性，以及膳食成分对肠道菌群的构成及代谢的有益调节作用，随着微生态基础理论的研究，以及该理论被应用在实践上取得成效，益生菌产品得到迅速发展。若单独摄食益生菌，益生菌存活率较低，并且在肠道内定植率也很低，目前益生菌固体饮料大都采用膳食纤维和益生菌复配使用。cn107788317a中公开一种益生菌固体饮料，按重量份计，包括以下组分：无水葡萄糖40～60份，低聚半乳糖5～15份，水苏糖5～15份，乳清蛋白粉1～5份，短双歧杆菌m16v2～8份，乳双歧杆菌hn0192～10份，发酵乳杆菌cect57162～8份，鼠李糖乳杆菌hn0012～10份，该益生菌固体饮料，能够更好的促进胃肠吸收，增强婴幼儿的免疫力。cn107647234a中公开了一种女士益生菌固体饮料，配方包括如下质量比的成分：罗伊氏乳杆菌1020wt％，鼠李糖乳杆菌1020wt％，低聚木糖2540wt％，蔓越莓提取物1525wt％，该益生菌固体饮料选用低聚木糖作为益生元，不仅具备了本身的保健效果，还可以很好地促进罗伊氏乳杆菌和鼠李糖乳杆菌两种对女性生理健康有利的益生菌的增殖，还可以跟能预防女性尿路感染的蔓越莓提取物组合出独特的风味，受到女性使用者的欢迎。cn106619743a公开了一种具有降血糖作用的益生菌固体饮料及其制备方法，益生菌固体饮料包含按重量百分比计的下列组分：复合益生菌5～15％、低聚木糖14～28％、l阿拉伯糖50～80％、膳食纤维4～6％。复合益生菌菌粉包括鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、青春双歧杆菌这三种菌。该益生菌固体饮料可以大量增殖有益菌，提高外源性益生菌在肠道黏膜上的定植率和存活率，改善肠道菌群平衡系统，提高人体免疫力，促进机体修复各项机能，从而起到辅助降血糖功效。以上现有技术中的益生菌固体饮料均能起到一定的保健效果，但是，如何选择更合适的成分与益生菌复配，以取得更好的保健效果，仍是本领域技术人员在不断研究的问题。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种具有保健功能的益生菌固体饮料及其制备方法。本发明所采取的技术方案是：一种具有保健功能的益生菌固体饮料，制备原料中含有聚葡萄糖、小麦低聚肽、抗性糊精、益生菌菌粉、酸度调节剂、甜味剂、食品用香精。进一步地，按照重量百分比计，制备原料中含有聚葡萄糖30％～45％，小麦低聚肽10％～25％，抗性糊精20％～40％，益生菌菌粉0.2％～5％，酸度调节剂0.5％～5％，甜味剂0.5％～2％，食品用香精0.1％～2％。进一步地，按照重量百分比计，制备原料中含有聚葡萄糖30％，小麦低聚肽25％，抗性糊精37.5％，益生菌菌粉5％，酸度调节剂0.5％，甜味剂1％，食品用香精0.5％。进一步地，益生菌菌粉中的益生菌选自鼠李糖乳杆菌、双歧杆菌、罗伊氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌中的至少一种。进一步地，益生菌菌粉中益生菌含量为1.0×1010cfu/g～4.0×1011cfu/g。进一步地，酸度调节剂选自柠檬酸及其钠、钾盐，苹果酸，乳酸，酒石酸的至少一种。进一步地，甜味剂选自三氯蔗糖、罗汉果甜苷、安赛蜜、阿斯巴甜、木糖醇、甜菊糖苷中的至少一种。上述的具有保健功能的益生菌固体饮料的制备方法，包括以下步骤：(1)配料：将各原料按照配方比例在相对湿度45％～55％、温度18～23℃的环境下称量配料；(2)混合：将步骤(1)配好的物料混合均匀；(3)分装：将步骤(2)混合好的物料进行分装，温度控制在18～23℃，相对湿度控制在30％～40％。进一步地，配料时间控制在30min内。进一步地，步骤(1)～步骤(3)均在10万级洁净区进行。益生菌是一种“有益于宿主健康的、活的微生物膳食补充剂”。益生菌用于人或动物，在达到足够的剂量时，能通过改善肠道微生物的平衡及性能，从而对宿主产生有益作用，如促进肠道通畅、改善肠道环境、抑制腹泻、缓解乳糖不耐症、提高免疫力等。聚葡萄糖和抗性糊精均为可溶性膳食纤维，在消化道中不被机体降解，但可被肠道菌群发酵产生乳酸、乙酸、短链脂肪酸等酸性物质。短链脂肪酸可为结肠粘膜细胞代谢提供约70％的能量，还能够增加肠粘膜的血流量和氧的摄取量，是结肠粘膜的营养来源，为粘膜细胞提供能量。小麦低聚肽是以谷朊粉为原料、经过定向酶切及特定的小肽分离技术获得的小分子多肽类混合物，主要成分是由2～6个氨基酸分子构成的小肽，味苦、水溶性好、分散稳定、易吸收、生物活性强等。低聚肽进入消化道后不需要消化，可以直接吸收，转运速度快、耗能低、不易饱和，同时能够消除与游离氨基酸的吸收竞争。此外小麦低聚肽中氨基酸含量均衡，几乎与小麦蛋白一样，蛋白质(以干基计)/(g/100g)≥90％，低聚肽(以干基计)/(g/100g)≥75％，谷氨酸≥25，其中谷氨酸大部分以谷氨酰胺的形式存在。谷氨酰胺是机体游离氨基酸池中含量最多的氨基酸，能够为人体氨基酸、蛋白质和核酸的合成提供氮源，也能够为碳链氧化提供能量，是肠道粘膜以及免疫细胞、肝脏、肾脏等多种组织细胞的能量来源和核酸合成的前体物质，是生长迅速细胞(如肠粘膜细胞)的必需呼吸燃料和主要营养物质。本发明的有益效果是：本配方不仅优选聚葡萄糖和抗性糊精两种可溶性膳食纤维，从人体肠道内存的益生菌中优选出四株：鼠李糖乳杆菌、双歧杆菌、罗伊氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌；而且特地添加富含蛋白质(氨基酸)并且对人体肠道功能和免疫有促进作用的小麦低聚肽，经过优化各原料配比，使得本配方具有改善肠道健康，增强机体免疫力以及补充蛋白质的功，并且发现本发明还有降血脂的效果。本发明固体饮料的制备中采用优化工艺，严格控制生产条件保证产品稳定性。具体实施方式下面将结合实施例进一步阐述本发明，应理解，以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。实施例1一种具有保健功能的益生菌固体饮料，按照重量百分比计，原料中含有以下组分：聚葡萄糖30％，小麦低聚肽25％，抗性糊精37.5％，益生菌菌粉5％，苹果酸0.5％，罗汉果甜苷1％，食品用香精0.5％；其中益生菌菌粉含有鼠李糖乳杆菌、双歧杆菌、罗伊氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌各2×1011cfu/g。益生菌固体饮料的制备方法如下：(1)配料：将聚葡萄糖，小麦低聚肽，抗性糊精，益生菌菌粉，酸度调节剂，甜味剂，食品用香精按照配方比例在相对湿度45％～50％、温度20～23℃的环境下称量配料，配料时间控制在30min内；(2)混合：将步骤(1)配好的物料用真空上料机加到三维一体混合机中，混合20min，转速30r/min；(3)分装：将步骤(2)混合好的物料进行分装成10g，即得具有保健功能的益生菌固体饮料，分装时温度控制在20～23℃，相对湿度控制在35％～40％。以上均在10万级洁净区进行。通过检测，实施例1中益生菌固体饮料的蛋白质含量为22.0g/100g，l-谷氨酰胺的含量为6.8g/100g，可见实施例1中益生菌固体饮料能够给人体提供丰富的氨基酸，特别是l-谷氨酰胺。实施例2一种具有保健功能的益生菌固体饮料，按照重量百分比计，原料中含有以下组分：聚葡萄糖30％，小麦低聚肽25％，抗性糊精37.5％，益生菌菌粉5％，苹果酸0.5％，罗汉果甜苷1％，食品用香精0.5％；其中益生菌菌粉含双歧杆菌、罗伊氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌各2×1011cfu/g。益生菌固体饮料的制备方法如下：(1)配料：将聚葡萄糖，小麦低聚肽，抗性糊精，益生菌菌粉，酸度调节剂，甜味剂，食品用香精按照配方比例在相对湿度45％～50％、温度20～23℃的环境下称量配料，配料时间控制在30min内；(2)混合：将步骤(1)配好的物料用真空上料机加到三维一体混合机中，混合20min，转速30r/min；(3)分装：将步骤(2)混合好的物料进行分装成10g，即得具有保健功能的益生菌固体饮料，分装时温度控制在20～23℃，相对湿度控制在35％～40％。以上均在10万级洁净区进行。通过检测，实施例1中益生菌固体饮料的蛋白质含量为21.0g/100g，l-谷氨酰胺的含量为6.5g/100g，可见实施例1中益生菌固体饮料能够给人体提供丰富的氨基酸，特别是l-谷氨酰胺。实施例3一种具有保健功能的益生菌固体饮料，按照重量百分比计，原料中含有以下组分：聚葡萄糖45％，小麦低聚肽10％，抗性糊精40％，益生菌菌粉5％，苹果酸5％，罗汉果甜苷0.5％，食品用香精2％；其中益生菌菌粉含有鼠李糖乳杆菌、双歧杆菌、罗伊氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌各4×1011cfu/g。益生菌固体饮料的制备方法如下：(1)配料：将聚葡萄糖，小麦低聚肽，抗性糊精，益生菌菌粉，酸度调节剂，甜味剂，食品用香精按照配方比例在相对湿度45％～50％、温度20～23℃的环境下称量配料，配料时间控制在30min内；(2)混合：将步骤(1)配好的物料用真空上料机加到三维一体混合机中，混合20min，转速30r/min；(3)分装：将步骤(2)混合好的物料进行分装成10g，即得具有保健功能的益生菌固体饮料，分装时温度控制在20～23℃，相对湿度控制在35％～40％。以上均在10万级洁净区进行。通过检测，实施例1中益生菌固体饮料的蛋白质含量为9.0g/100g，l-谷氨酰胺的含量为3.8g/100g，可见实施例1中益生菌固体饮料能够给人体提供丰富的氨基酸，特别是l-谷氨酰胺。实施例4一种具有保健功能的益生菌固体饮料，按照重量百分比计，原料中含有以下组分：聚葡萄糖30％，小麦低聚肽25％，抗性糊精40％，益生菌菌粉0.2％，柠檬酸2.3％，三氯蔗糖0.5％，食品用香精2％；其中益生菌菌粉含有鼠李糖乳杆菌、双歧杆菌、罗伊氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌各4×1011cfu/g。益生菌固体饮料的制备方法如下：(1)配料：将聚葡萄糖，小麦低聚肽，抗性糊精，益生菌菌粉，酸度调节剂，甜味剂，食品用香精按照配方比例在相对湿度45％～50％、温度20～23℃的环境下称量配料，配料时间控制在30min内；(2)混合：将步骤(1)配好的物料用真空上料机加到三维一体混合机中，混合20min，转速30r/min；(3)分装：将步骤(2)混合好的物料进行分装成10g，即得具有保健功能的益生菌固体饮料，分装时温度控制在20～23℃，相对湿度控制在35％～40％。以上均在10万级洁净区进行。通过检测，实施例1中益生菌固体饮料的蛋白质含量为20.0g/100g，l-谷氨酰胺的含量为6.6g/100g，可见实施例1中益生菌固体饮料能够给人体提供丰富的氨基酸，特别是l-谷氨酰胺。实施例5稳定性检测益生菌食品中的活细菌数量是其健康功能和产品质量的重要指标，实施例1中益生菌固体饮料的稳定性检测方法及结果如下：1.评价方法鼠李糖乳杆菌、双歧杆菌、罗伊氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌采用gb4789.35-2010的方法进行检测。2.试验观察方法实施例1中的益生菌固体饮料在自然(常温)存放24个月，观察0天、3个月、6个月、9个月、12个月、24个月的活菌数，共测6次，计算其衰减率。3.稳定性实验结果如下表1益生菌固体饮料的稳定性研究由以上数据可知，本发明的益生菌固体饮料具有良好的稳定性。实施例6增强免疫力效果检测1、材料和方法1.1、样品：实施例1中的益生菌固体饮料。人体口服推荐量为每日1次，每次5g，成人体重按60kg计算，折合剂量0.84g/(kg·bw)。1.2、实验动物与分组：体重为18g～22g的spf级昆明种雌性小鼠160只。每40只分为1组，共4组。每组随机分为对照组、低、中、高剂量组。1.3、实验环境条件：实验条件为屏障环境，温度22℃～24℃，湿度52％～54％。1.4、剂量选择及样品处理：据人体口服推荐量，本益生菌固体饮料低、中、高剂量分别为0.42g/(kg·bw)、0.84g/(kg·bw)、0.167g/(kg·bw)(分别相当于人体推荐剂量的5、10、20倍)，以灌胃方式给予受试动物，每天灌胃1次，灌胃体积为0.2ml/10g·bw。对照组予以等体积的溶剂，连续30天。1.5、主要仪器与试剂：仪器：洁净工作台、二氧化碳培养箱、酶标仪、离心机、722分光光度计、无菌手术器械、细胞计数器、计时器、血色素吸管等。试剂：绵羊红细胞(srbc)、生理盐水、hank’s液(ph7.2～7.4)、rpmi1640培养液、小牛血清、青链霉素、cona、1mol/l的hcl溶液、酸性异丙醇(96ml异丙醇加1mol/l的hcl溶液4ml)、mtt、pbs缓冲液(ph7.2～7.4)、补体、sa缓冲液、琼脂糖、都式试剂、yac-1细胞、乳酸钠、硝基氯化四氮、吩嗪二甲酯硫酸盐、氧化型辅酶i、0.2mol/l的tris-hcl缓冲液、2.5％的triton、印度墨汁、0.1％的碳酸钠、鸡红细胞、甲醇、giemsa染液等。1.6、实验方法：1.6.1、迟发型变态反应(dth)(足跖增厚发)：小鼠腹腔注射2％(v/v)srbc(0.2ml/每鼠)致敏后4天，测量左后足跖部厚度，然后在测量部位皮下注射20％(v/v)srbc(20μl/每鼠)，注射后24h测量左后足跖部厚度，同一部位测量三次，取平均值。以攻击前后足跖厚度差值来表示dth的程度。1.6.2、cona诱导的小鼠淋巴细胞转化实验(mtt法)：无菌取脾，制成细胞悬液，hank’s液洗2次，调整细胞浓度为3×106个/ml。将细胞悬液分两孔加入到24孔培养板中，每孔1ml，一孔加75μlcona液(7.5μg/ml)，另一孔为对照，置5％二氧化碳，37℃培养72h。培养结束前4h，每孔吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的rpmi1640培养液，同时加入mtt(5mg/ml)50μl/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解，以570nm波长测定光密度值。1.6.3、抗体生成细胞检测(jerne改良玻片法)：取羊血用生理盐水洗涤3次，将压积srbc用生理盐水配成2％(v/v)的细胞悬液，每鼠腹腔注射0.2ml。免疫5天后，处死小鼠，取脾，200目筛网过滤，洗涤、离心2次，最后将细胞悬浮于8mlhank’s液中。调整细胞浓度为5×106个/ml。将表层培养基加热溶解，与等量2倍浓度hank’s液混合，分装小试管，每管0.5ml，加入50μl10％srbc，20μl脾细胞悬液，混匀，倒片，二氧化碳培养箱中温育1.5h，加入用sa液稀释的补体(1：8)，继续温育1.5h，计数溶血空斑数。1.6.4、nk细胞活性的测定(乳酸脱氢酶测定法)：受试小鼠颈椎脱臼处死，无菌取脾，制成脾细胞悬液，hank’s液洗2次，调整细胞浓度为2×107个/ml。取靶细胞和效应细胞各100μl(效靶比50：1)，加入u型96孔培养板，靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μl，靶细胞最大释放孔加靶细胞和2.5％triton各100μl，均设三个平行孔，于37℃、5％co2培养箱中培养4h，每孔吸取上清液100μl置平底96孔培养板中，同时加入ldh基质液100μl，反应3min～10min，每孔加入1mol/l的hcl30μl，在酶标仪490nm处测定光密度(od)；nk细胞活性＝[(反应孔od-自然释放孔od)/(最大释放孔od-自然释放孔od)]×100％。2、结果2.1、实验数据统计：用spss11.0软件进行统计分析。2.2、结果分析：2.2.1益生菌固体饮料小鼠细胞免疫功能的影响2.2.1.1益生菌固体饮料对小鼠迟发型变态反应(dth)的影响表2益生菌固体饮料对小鼠迟发型变态反应(dth)的影响组别动物只数注射后24h足拓肿胀度p值对照组100.269±0.116-低剂量组100.306±0.115>0.05中剂量组100.480±0.112<0.05高剂量组100.510±0.131<0.01由表2可知，经口给予小鼠不同剂量的益生菌固体饮料30天后，中剂量组、高剂量组小鼠足跖肿胀度大于对照组，差异有显著性(p<0.05)。2.2.1.2益生菌固体饮料cona诱导的小鼠淋巴细胞转化能力的影响表3益生菌固体饮料cona诱导的小鼠淋巴细胞转化能力的影响组别动物只数淋巴细胞增殖能力p值对照组100.017±0.012-低剂量组100.016±0.015>0.05中剂量组100.045±0.012<0.05高剂量组100.087±0.021<0.01由表3可见，经口给予小鼠不同剂量的益生菌固体饮料30天后，中、高剂量能增加小鼠淋巴细胞转化能力，与对照组比较差异有显著性(p<0.05)。2.2.1.3益生菌固体饮料对小鼠抗体生成细胞数的影响表4益生菌固体饮料对小鼠抗体生成细胞数的影响由表4可知，经口给予小鼠不同剂量的益生菌固体饮料30天后，中、高剂量能增加小鼠抗体生成细胞数，与对照组比较差异有显著性(p<0.05)。2.2.1.4益生菌固体饮料对对小鼠nk细胞活性的影响表5益生菌固体饮料对对小鼠nk细胞活性的影响组别动物只数nk细胞活性p值对照组1029.7±5.9-低剂量组1030.1±3.4>0.05中剂量组1057±4.2<0.05高剂量组1067±6.1<0.01由表5可见，经口给予小鼠不同剂量的益生菌固体饮料30天后，中、高剂量能增加小鼠nk细胞活性，与对照组比较差异有显著性(p<0.05)。小结：从实验数据可以看出，经口给予小鼠低、中、高剂量的益生菌固体饮料30天后，中、高剂量能增加小鼠迟发型变态反应能力、小鼠淋巴细胞转化能力，与对照组比较差异有显著差异(p<0.05)；中、高剂量能增加小鼠nk细胞活性，与对照组比较差异有显著性(p<0.05)；提示本发明中的益生菌固体饮料具有增强免疫力的功能。实施例7降血脂功能检测1.实验材料icr小鼠100只，实施例1中的益生菌固体饮料，螺旋藻，高脂饲料(20％猪油、2％胆固醇、0.2％胆酸盐、0.1％丙基硫氧嘧啶)2.方法取icr小鼠100只，雌雄比1:1，随机分成5组，每组20只，称各组体重，即：空白对照组(灌给，高脂模型组，低剂量组、高剂量组，阳性对照组。除空白对照组(喂基础饲料)外，其它各组均饲喂的是高脂饲料(20％猪油、2％胆固醇、0.2％胆酸盐、0.1％丙基硫氧嘧啶)。低剂量组按小鼠体重的0.42g/(kg·bw)剂量每天一次用实施例1的益生菌固体饮料灌胃，高剂量组比低剂量组增加一倍用量，阳性对照组按小鼠体重的0.42g/(kg·bw)剂量每天一次用市售螺旋藻灌胃，空白组和高脂模型组按小鼠体重的0.42g/(kg·bw)剂量每天一次用清水灌胃，每日定时投料灌胃，且自由饮水；灌胃4周，称各组体重，禁食不禁水12h后，眼球取血，37℃水域30min后离心(3000r/min、15min)分离血清，测血清中胆固醇(tc)、甘油三酯(tg)、低密度脂蛋白(ldl-c)、高密度脂蛋白(hdl-c)。3.结果检测结果见表6。表6益生菌固体饮料对小鼠降血脂的影响组别tc(mmol/l)tg(mmol/l)ldl-c(mmol/l)hdl-c(mmol/l)空白对照组2.33±0.630.90±0.110.47±0.091.88±0.43高脂模型组4.58±0.171.99±0.211.43±0.132.98±0.57低剂量组2.58±0.17*1.09±0.21*0.48±0.13*2.28±0.68*高剂量组2.18±0.17**0.89±0.21**0.43±0.21**1.98±0.32**阳性对照组2.98±0.07*1.29±0.21*0.86±0.26*2.48±0.49*注：与高脂模型组比**：p<0.05,*：p<0.01从表6中可以看出低剂量组、高剂量组、阳性对照组的各血脂水平都较高脂模型组为低，说明本发明的益生菌固体饮料与螺旋藻一样具有降低血脂的作用。并且高剂量组的降血脂作用比螺旋藻效果还好。实施例8改善肠道功能效果检测1.实验对象：选取不同年龄段的便秘患者(排便次数为3～4d/次)，每个年龄段90名，平均分为对照组30名，试验组1、组2各30名。2.实验方法：对照组服用安慰剂(麦芽糊精)、试验组1服用现有普通的益生菌固体饮料(含益生菌和膳食纤维)，试验组2服用本发明实施例1的益生菌固体饮料，服用量为5g/d。3.判断标准：显效：服用后，排便1次/天，为功效明显；有效：服用后，排便2d/次为功效不够明显；无效：服用后排便3d及以上/次，为无效。4.实验结果表710～20岁患者服用益生菌后排便情况显效有效无效腹泻对照组01290试验组1101551试验组2201000表820～30岁患者服用益生菌后排便情况表930～40岁患者服用益生菌后排便情况显效有效无效腹泻对照组00300试验组1713100试验组291650表1040～50岁患者服用益生菌后排便情况显效有效无效腹泻对照组00300试验组1101552试验组2201000表1150～60岁患者服用益生菌后排便情况显效有效无效腹泻对照组00300试验组1128100试验组220640表1260～70岁患者服用益生菌后排便情况显效有效无效腹泻对照组11280试验组1101551试验组222800从表7～表12可以看出本发明的益生菌固体饮料对治疗便秘有显著的作用，并且不会出现腹泻。当前第1页12