双特异性HER2抗体的制作方法

技术特征：

1.一种双特异性抗HER2抗体，包含第一免疫球蛋白抗原结合结构域和第二免疫球蛋白抗原结合结构域，其中(i)该第一免疫球蛋白抗原结合结构域和该第二免疫球蛋白抗原结合结构域特异性结合至不同HER2抗体结合位点，(ii)该第一免疫球蛋白抗原结合结构域结合至第一HER2抗体结合位点，该第一HER2抗体结合位点包含HER2的结构域II内的表位，并且(iii)该第一HER2抗体结合位点与帕妥珠单抗的抗体结合位点不同。

2.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中该第一免疫球蛋白抗原结合结构域包含重链(HC)可变区(VH)和轻链(LC)可变区(VL)，该重链可变区和该轻链可变区包含：

(i)与SEQ ID NO：1相同或除了高达1、2、3或4个氨基酸取代以外与SEQ ID NO：1相同的可变重链CDR-1(VH-CDR1)；

(ii)与SEQ ID NO：2相同或除了高达1、2、3或4个氨基酸取代以外与SEQ ID NO：2相同的可变重链CDR-2(VH-CDR2)；

(iii)与SEQ ID NO：3相同或除了高达1、2、3或4个氨基酸取代以外与SEQ ID NO：3相同的可变重链CDR-3(VH-CDR3)；

(iv)与SEQ ID NO：4相同或除了高达1、2、3或4个氨基酸取代以外与SEQ ID NO：4相同的可变轻链CDR-1(VL-CDR1)；

(v)与SEQ ID NO：5相同或除了高达1、2、3或4个氨基酸取代以外与SEQ ID NO：5相同的可变轻链CDR-2(VL-CDR2)；以及，

(vi)与SEQ ID NO：6相同或除了高达1、2、3或4个氨基酸取代以外与SEQ ID NO：6相同的可变轻链CDR-3(VL-CDR3)。

3.一种双特异性抗HER2抗体，包含第一免疫球蛋白抗原结合结构域和第二免疫球蛋白抗原结合结构域，其中该第一免疫球蛋白抗原结合结构域包含VH和VL，其中

(a)该VH包含SEQ ID NO：15或43的氨基酸；

(b)该VL包含SEQ ID NO：16或44的氨基酸；

并且其中该第一免疫球蛋白抗原结合结构域和该第二免疫球蛋白抗原结合结构域特异性结合至不同HER2表位。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的双特异性抗HER2抗体，其中该第一免疫球蛋白抗原结合结构域和/或该第二免疫球蛋白抗原结合结构域包含以下各项或由其组成：(a)VH和VL，该VH进一步包含重链恒定区或其片段，并且该VL包含轻链恒定区(LC)或其片段；(b)单链Fv(“scFv”)；(c)双体抗体；(d)小抗体；(e)F(ab’)2；或(f)F(ab)。

5.根据权利要求4所述的双特异性抗HER2抗体，其中(a)该重链恒定区或其片段是IgG恒定区；和/或(b)该LC恒定区是κ恒定区或λ恒定区。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的双特异性抗HER2抗体，其中该第一免疫球蛋白抗原结合结构域是单克隆抗体、人源化抗体、人抗体、嵌合抗体、或亲和力优化的抗体。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的双特异性抗HER2抗体，其中：

(a)该第二免疫球蛋白抗原结合结构域特异性结合至与该曲妥珠单抗抗体相同的HER2表位；

(b)该第二免疫球蛋白抗原结合结构域通过该曲妥珠单抗抗体竞争性地抑制HER2结合；或

(c)该第二免疫球蛋白抗原结合结构域包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、或至少六个互补决定区(CDR)，这些互补决定区包含SEQ ID NO：54至59中的任一个的氨基酸。

8.根据权利要求7所述的双特异性抗HER2抗体，其中该第二免疫球蛋白抗原结合结构域是scFv，所述scFv包含：

(i)包含SEQ ID NO：54的氨基酸的VH-CDR1；

(ii)包含SEQ ID NO：55的氨基酸的VH-CDR2；

(iii)包含SEQ ID NO：56的氨基酸的VH-CDR3；

(iv)包含SEQ ID NO：57的氨基酸的VL-CDR1；

(v)包含SEQ ID NO：58的氨基酸的VL-CDR2；以及

(vi)包含SEQ ID NO：59的氨基酸的VL-CDR3。

9.根据权利要求7或权利要求8所述的双特异性抗HER2抗体，其中

(a)该第二免疫球蛋白抗原结合结构域被共价连接至该第一免疫球蛋白抗原结合结构域的该HC的羧基末端上；

(b)该第二免疫球蛋白抗原结合结构域被共价连接至该第一免疫球蛋白抗原结合结构域的该HC的氨基末端上；或，

(c)该第二免疫球蛋白抗原结合结构域被共价嵌入在该第一免疫球蛋白抗原结合结构域的该HC的多肽链中。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的双特异性抗HER2抗体，其中该重链包含恒定区，该恒定区包含Fc结构域。

11.根据权利要求10所述的双特异性抗HER2抗体，其中该Fc结构域包含能够降低或增强该双特异性抗体的ADCC活性的至少一个突变。

12.一种双特异性抗HER2抗体，包含彼此相关联的第一多肽链和第二多肽链，其中该第一多肽链选自以下各项：

(1)[TZ_S]-[L₁]-[_BVH]-[_BCH]-[Fc_x]

(2)[_BVH]-[_BCH]-[Fc_x]-[L₂]-[TZ_S]

(3)[_BVH]-[_BCH]-[L₃]-[TZ_S]-[L₄]-[Fc_x]

其中

TZs是结合与曲妥珠单抗相同的表位的scFv；

L₁、L₂、L₃以及L₄是肽接头；

Fc_x是Fc结构域；

_BVH和_BCH分别是抗体的VH区和CH1区，该抗体能够结合至与该曲妥珠单抗抗体识别的该表位不同的HER2表位；

并且其中该第二链包含[_BVL]-[CL]，其中_BVL是能够结合至与该曲妥珠单抗抗体识别的该表位不同的HER2表位的抗体的该VL区，并且CL是选自下组的IgG轻链恒定区，该组由以下各项组成：人κ恒定区和人λ恒定区。

13.根据权利要求12所述的双特异性抗HER2抗体，其中_BVL包含

(i)与SEQ ID NO：4相同或除了高达1、2、3或4个氨基酸取代以外与SEQ ID NO：4相同的可变轻链CDR-1(VL-CDR1)；

(ii)与SEQ ID NO：5相同或除了高达1、2、3或4个氨基酸取代以外与SEQ ID NO：5相同的可变轻链CDR-2(VL-CDR2)；以及，

(iii)与SEQ ID NO：6相同或除了高达1、2、3或4个氨基酸取代以外与SEQ ID NO：6相同的可变轻链CDR-3(VL-CDR3)；

其中[TZ_S]包含

(i)包含SEQ ID NO：54的氨基酸的VH-CDR1；

(ii)包含SEQ ID NO：55的氨基酸的VH-CDR2；

(iii)包含SEQ ID NO：56的氨基酸的VH-CDR3；

(iv)包含SEQ ID NO：57的氨基酸的VL-CDR1；

(v)包含SEQ ID NO：58的氨基酸的VL-CDR2；以及

(vi)包含SEQ ID NO：59的氨基酸的VL-CDR3；

其中该[Fcx]包含

(i)引入可衍生基团的至少一个氨基酸取代；和/或，

(ii)能够增强该双特异性抗体的ADCC活性的至少一个突变；

并且其中[_BVH]包含

(i)与SEQ ID NO：1相同或除了高达1、2、3或4个氨基酸取代以外与SEQ ID NO：1相同的可变重链CDR-1(VH-CDR1)；

(ii)与SEQ ID NO：2相同或除了高达1、2、3或4个氨基酸取代以外与SEQ ID NO：2相同的可变重链CDR-2(VH-CDR2)；以及

(iii)与SEQ ID NO：3相同或除了高达1、2、3或4个氨基酸取代以外与SEQ ID NO：3相同的可变重链CDR-3(VH-CDR3)。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的双特异性HER2抗体，其中该双特异性HER2抗体：

(a)在结合至该HER2靶标时诱导内化；

(b)在内化之后促进有效的溶酶体运输；

(c)诱导HER2靶标降解；

(d)阻断低HER2表达癌症细胞中的配体诱导的AKT磷酸化；

(e)破坏配体诱导的HER2：HER3二聚化；或

(f)其组合。

15.一种抗体-药物轭合物(ADC)，包含根据权利要求1至14中任一项所述的双特异性HER2抗体以及至少一个、两个、三个、或四个治疗部分，并且任选地包含至少一个间隔物。

16.根据权利要求15所述的ADC，其中每个治疗部分被化学轭合至该双特异性抗体的该Fc区中的特定位置处的氨基酸侧链上。

17.根据权利要求16所述的ADC，其中这些特定位置选自下组，该组由以下各项组成：239、248、254、258、273、279、282、284、286、287、289、297、298、312、324、326、330、335、337、339、350、355、356、359、360、361、375、383、384、389、398、400、413、415、418、422、435、440、441、442、443、446、在位置239与240之间的插入、以及其任何组合，其中氨基酸位置编号根据如在卡巴特中所阐述的EU索引。

18.根据权利要求17所述的ADC，其中这些特定位置是239、442或两者，其中氨基酸位置编号根据如在卡巴特中所阐述的EU索引。

19.一种ADC，包含根据权利要求1至14中任一项所述的双特异性HER2抗体，其中所述抗体包含：

(i)包含SEQ ID NO：32A的氨基酸的第一多肽链和包含SEQ ID NO：42A的氨基酸的第二多肽链，其中该第一多肽链包含共价连接至位置239处的半胱氨酸氨基酸上的治疗部分，其中氨基酸位置编号根据如在卡巴特中所阐述的EU索引；

(ii)包含SEQ ID NO：33A的氨基酸的第一多肽链和包含SEQ ID NO：42A的氨基酸的第二多肽链，其中该第一多肽链包含共价连接至分别位于位置239和442处的半胱氨酸氨基酸上的两个治疗部分，其中氨基酸位置编号根据如在卡巴特中所阐述的EU索引；

(iii)包含SEQ ID NO：36A的氨基酸的第一多肽链和包含SEQ ID NO：42A的氨基酸的第二多肽链，其中该第一多肽链包含共价连接至位置239处的半胱氨酸氨基酸上的治疗部分，其中氨基酸位置编号根据如在卡巴特中所阐述的EU索引；

(iv)包含SEQ ID NO：37A的氨基酸的第一多肽链和包含SEQ ID NO：42A的氨基酸的第二多肽链，其中该第一多肽链包含共价连接至分别位于位置239和442处的半胱氨酸氨基酸上的两个治疗部分，其中氨基酸位置编号根据如在卡巴特中所阐述的EU索引；

(v)包含SEQ ID NO：40A的氨基酸的第一多肽链和包含SEQ ID NO：42A的氨基酸的第二多肽链，其中该第一多肽链包含共价连接至位置239处的半胱氨酸氨基酸上的治疗部分，其中氨基酸位置编号根据如在卡巴特中所阐述的EU索引；或，

(vi)包含SEQ ID NO：41A的氨基酸的第一多肽链和包含SEQ ID NO：42A的氨基酸的第二多肽链，其中该第一多肽链包含共价连接至分别位于位置239和442处的半胱氨酸氨基酸上的两个治疗部分，其中氨基酸位置编号根据如在卡巴特中所阐述的EU索引。

(vii)包含SEQ ID NO：32A的氨基酸或由其组成的第一多肽链和包含SEQ ID NO：42A的氨基酸或由其组成的第二多肽链，其中该第一多肽链包含共价连接至位置239与240之间插入的半胱氨酸氨基酸上的治疗部分，其中氨基酸位置编号根据如在卡巴特中所阐述的EU索引；

(viii)包含SEQ ID NO：33C的氨基酸或由其组成的第一多肽链和包含SEQ ID NO：42A的氨基酸或由其组成的第二多肽链，其中该第一多肽链包含共价连接至位置239与240之间插入的半胱氨酸氨基和位于位置442处的半胱氨酸氨基酸上的两个治疗部分，其中氨基酸位置编号根据如在卡巴特中所阐述的EU索引；

(ix)包含SEQ ID NO：36C的氨基酸或由其组成的第一多肽链和包含SEQ ID NO：42A的氨基酸或由其组成的第二多肽链，其中该第一多肽链包含共价连接至位置239与240之间插入的半胱氨酸氨基酸上的治疗部分，其中氨基酸位置编号根据如在卡巴特中所阐述的EU索引；

(x)包含SEQ ID NO：37C的氨基酸或由其组成的第一多肽链和包含SEQ ID NO：42A的氨基酸或由其组成的第二多肽链，其中该第一多肽链包含共价连接至位置239与240之间插入的半胱氨酸氨基和位于位置442处的半胱氨酸氨基酸上的两个治疗部分，其中氨基酸位置编号根据如在卡巴特中所阐述的EU索引；

(xi)包含SEQ ID NO：40C的氨基酸或由其组成的第一多肽链和包含SEQ ID NO：42A的氨基酸或由其组成的第二多肽链，其中该第一多肽链包含共价连接至位置239与240之间插入的半胱氨酸氨基酸上的治疗部分，其中氨基酸位置编号根据如在卡巴特中所阐述的EU索引；或，

(xii)包含SEQ ID NO：41C的氨基酸或由其组成的第一多肽链和包含SEQ ID NO：42A的氨基酸或由其组成的第二多肽链，其中该第一多肽链包含共价连接至位置239与240之间插入的半胱氨酸氨基和位于位置442处的半胱氨酸氨基酸上的两个治疗部分，其中氨基酸位置编号根据如在卡巴特中所阐述的EU索引。

20.根据权利要求15至19中任一项所述的ADC，其中该治疗部分包括细胞毒素、放射性同位素、免疫调节剂、细胞因子、淋巴因子、趋化因子、生长因子、肿瘤坏死因子、激素、激素拮抗剂、酶、寡核苷酸、DNA、RNA、siRNA、RNAi、微小RNA、光敏治疗剂、抗血管生成剂、促凋亡剂、肽、脂质、碳水化合物、螯合剂或其组合。

21.根据权利要求20所述的ADC，其中该细胞毒素是微管溶素、奥瑞他汀、美登木素生物碱或吡咯并苯并二氮杂(PBD)。

22.一种药物组合物，包含根据权利要求1至14中任一项所述的双特异性HER2抗体、或根据权利要求15至21中任一项所述的ADC、以及药学上可接受的载体。

23.一种治疗HER2表达癌症的方法，该方法包括向有需要的受试者给予根据权利要求1至14中任一项所述的双特异性HER2抗体、根据权利要求15至21中任一项所述的ADC、或根据权利要求22所述的药物组合物。

24.根据权利要求23所述的方法，其中该癌症是低HER2表达癌症。

25.一种治疗对HER2靶向治疗剂的抗性的方法，该方法包括向有需要的受试者给予根据权利要求1至14中任一项所述的双特异性HER2抗体、根据权利要求15至21中任一项所述的ADC、或根据权利要求22所述的药物组合物。