1.一种新鲜芦荟皮及芦荟凝胶汁液制备方法,包括以下步骤:
a.制备新鲜芦荟皮及芦荟凝胶汁液:
取新鲜芦荟,洗净,分离芦荟皮层和内部凝胶,分别切成小块,泡在pbs溶液中,放入榨汁机中榨汁,获得新鲜的芦荟皮和凝胶汁液,经纱布过滤后,置于4℃,备用;
b.制备芦荟皮和凝胶外泌体样囊泡:
将步骤a制得的新鲜的芦荟皮和凝胶汁液,以300×g离心10min,弃去沉淀,获得上清液a1、a2;接着将上清液a1、a2以1000×g离心10min,获得上清液b1、b2;上清液b1、b2以3000×g离心20min,获得上清液c1、c2;再将上清液c1、c2以11000×g离心40min,获得上清液d1、d2,最后上清液d1、d2经0.22μm滤膜过滤后,以50000×g离心90min,获得沉淀e1、e2,以适量pbs重悬沉淀e1、e2获得混悬液f1、f2,混悬液f1、f2以50000×g离心90min,获得沉淀g1、g2,以pbs重悬,分别获得芦荟皮层及芦荟凝胶外泌体样囊泡。
2.根据权利要求1所述的新鲜芦荟皮及芦荟凝胶汁液制备方法,其特征在于步骤a中的芦荟皮层和内部凝胶所切成的小块分别与pbs冰块及冰pbs溶液按质量比为2:1:4比例混合后再放入榨汁机中榨汁;同时,其榨汁程序为:每30s暂停一次,间隔10s,共计240s。
3.根据权利要求1所述的新鲜芦荟皮及芦荟凝胶汁液制备方法,其特征在于步骤b中最终获得的外泌体样囊泡,以1xpbs缓冲溶液重悬,所述的1xpbs缓冲溶液含25mm海藻糖、1.5μg/ml蛋白酶抑制剂,获得分散性良好的芦荟外泌体样囊泡,同时保护外泌体样囊泡的膜表面蛋白,减少低温冷冻条件对外泌体样囊泡的影响。
4.根据权利要求1所述的新鲜芦荟皮及芦荟凝胶汁液制备方法,其特征在于所述的新鲜芦荟选自中华芦荟、库拉索芦荟或木立芦荟。
5.权利要求1~4任意一项方法制得的芦荟外泌体样囊泡。
6.权利要求1~4任意一项方法制备得的芦荟皮层及芦荟凝胶外泌体样囊泡中活性成分的分析前处理方法,包括以下步骤:
将所获得的芦荟皮层及芦荟凝胶外泌体样囊泡经超高速离心后弃去上清,用适量甲醇重悬,超声溶解后,离心留取上清液,经过滤后,4℃保存待用。
7.根据权利要求6所述的芦荟皮层及芦荟凝胶外泌体样囊泡的分析前处理方法,其特征在于,外泌体样囊泡经bca蛋白定量法测定蛋白含量后,根据两种外泌体样囊泡的实际蛋白浓度,取相应体积的外泌体样囊泡溶液,使其总蛋白质量为1mg,在4℃,50000×g条件下离心90min获得外泌体样囊泡沉淀,以1ml色谱级甲醇溶液重悬沉淀,超声20min,使有效成分充分溶解于甲醇中,再以11000×g离心10min,留取上清,经0.22μm滤膜过滤后用封口膜封住瓶口,置于4℃保存待用。
8.根据权利要求6所述的芦荟皮层及芦荟凝胶外泌体样囊泡的分析前处理方法,其特征在于,所述的两种外泌体样囊泡均含有芦荟大黄素、芦荟苦素、β-谷甾醇。
9.根据权利要求7所述的芦荟皮层及芦荟凝胶外泌体样囊泡的分析前处理方法,其特征在于,所述的两种外泌体样囊泡对其内部的芦荟大黄素、芦荟苦素、β-谷甾醇等有效成分具有保护作用,能在较长时间内维持其稳定性。
10.权利要求5所述的芦荟外泌体样囊泡在制药中的应用,其特征在于,两种芦荟外泌体样囊泡能够被制备成颗粒剂、胶囊剂、软胶囊剂、口服液体制剂、注射剂、经皮给药制剂的任一种。