一种基于斑马鱼炎症性肠病模型筛选药效物质的方法与流程

文档序号:23715795发布日期:2021-01-24 05:34阅读:来源:国知局

技术特征:
1.一种基于斑马鱼炎症性肠病模型筛选药效物质的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将待测物质加入到含有斑马鱼胚胎的孵育液a中进行预保护,再换液加入含有三硝基苯磺酸的孵育液b,继续孵育,得到给药模型;(2)利用与活性氧反应的荧光染料对给药模型的斑马鱼胚胎进行处理,荧光成像并分析斑马鱼胚胎肠道区域内的平均荧光强度,与未给药模型组的活性氧水平进行比较,筛选具有统计学差异的物质作为目标物质。2.如权利要求1所述的基于斑马鱼炎症性肠病模型筛选药效物质的方法,其特征在于,步骤(1)中,预保护的时间为12~36h。3.如权利要求1所述的基于斑马鱼炎症性肠病模型筛选药效物质的方法,其特征在于,步骤(1)中,孵育液a中的斑马鱼胚胎为受精后24~72h的胚胎;所述孵育液b中三硝基苯磺酸的浓度为50~100μg/ml,在孵育液b中孵育的时间为48~72h。4.如权利要求3所述的基于斑马鱼炎症性肠病模型筛选药效物质的方法,其特征在于,步骤(1)中,斑马鱼胚胎在含有75μg/ml三硝基苯磺酸的孵育液b中孵育48h。5.如权利要求1所述的基于斑马鱼炎症性肠病模型筛选药效物质的方法,其特征在于,所述荧光染料为2

,7
’-
二氢二氯荧光素二乙酸酯。6.如权利要求1所述的基于斑马鱼炎症性肠病模型筛选药效物质的方法,其特征在于,步骤(2)中,筛选平均荧光强度小于未给药模型组70%的物质为目标物质。7.如权利要求1所述的基于斑马鱼炎症性肠病模型筛选药效物质的方法,其特征在于,所述斑马鱼胚胎采用免疫细胞带有荧光标记的转基因斑马鱼系;步骤(2)中,还包括:利用荧光成像计算给药模型斑马鱼胚胎肠道区域内免疫细胞个数,与未给药模型组比较,筛选具有统计学差异的物质作为目标物质。8.如权利要求7所述的基于斑马鱼炎症性肠病模型筛选药效物质的方法,其特征在于,所述斑马鱼胚胎采用转基因斑马鱼系tg(lyz:dsred)或转基因斑马鱼系tg(lyz:egfp)。9.如权利要求8所述的基于斑马鱼炎症性肠病模型筛选药效物质的方法,其特征在于,步骤(2)中,还包括:利用荧光成像计算给药模型斑马鱼胚胎肠道区域内中性粒细胞个数,再根据如下公式计算回调指数,筛选回调指数>0.6的物质为目标物质;x=(n
model-n
drug
)/(n
model-n
control
)其中x-回调指数,n
model-未给药模型组中性粒细胞个数,n
drug-给药模型组中性粒细胞个数,n
control-空白组中性粒细胞个数。10.如权利要求1所述的基于斑马鱼炎症性肠病模型筛选药效物质的方法,其特征在于,步骤(1)中,设置5~10个重复。
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