一种调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂

1.本发明属于添加剂技术领域，尤其涉及一种调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂。


背景技术：

2.目前，氧气是维持人类和动物生存必不可少的物质，它可以作为电子受体参与合成atp，为生命活动提供能量。缺氧是指在特定生理/病理情况下，机体内氧含量低于正常水平。当机体受到外界低氧环境刺激时，其为了适应环境将发生一系列非特异性应答，这种刺激反应称为低氧应激。这是生命最本质的特征，普遍存在于生物进化过程中。哺乳动物细胞中的多种生化反应必须在足够的氧气浓度下才能够顺利进行。机体长期处于低氧环境下会引发一系列生理/病理反应。长期低氧应激会导致器官在形态结构、代谢、机能等方面发生异常；如果机体不能适应强烈的低氧应激将导致组织器官功能衰竭，尤其会导致神经系统和心血管系统产生多种难以修复的损伤，最终造成脑和心等重要器官因能量供应不足而坏死。
3.菊苣酸为咖啡酸衍生物，分子式为c
22h18o12
，分子量为474.37，熔点为206℃，针型结晶，最早由m.l.scarpati从菊苣中提取分离出。菊苣酸具有抗氧化及清除自由基能力、抗菌及抗病毒、提高免疫力、抗炎等作用，菊苣酸是一种有效的抗氧化药物，能通过降低细胞内活性氧(reac-tive oxygen species，ros)和脂质过氧化物丙二醛的积累、清除自由基、抑制氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein，oxldl)的方式，发挥抗氧化损伤、抗衰老及心血管保护的药理作用。schlernitzauer等探讨了菊苣酸作用于l6肌管的抗氧化作用，其结果表明菊苣酸可通过降低ros的积累、提高ros解毒酶的活性和表达、激活amp激酶(amp kinase，ampk)通路，发挥抗氧化损伤作用并能提高其抗氧化活性。另外，菊苣酸有较强的清除dpph
·
，
·
oh，abts
·
+自由基的能力，作用强度高于其降解产物咖啡酸及咖啡酒石酸。在低氧诱导下菊苣酸对h9c2大鼠心肌细胞抗氧化能力、炎性因子、能量代谢的影响尚无文献报道。
4.通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：在低氧诱导下菊苣酸对h9c2大鼠心肌细胞抗氧化能力、炎性因子、能量代谢的影响尚无文献报道。
5.解决以上问题及缺陷的难度为：寻找适合能够通过缓解低氧对动物心肌细胞损伤的天然植物提取物，解析植物提取物对动物心肌细胞保护潜在的影响作用及缓解高海拔地区动物低氧应激提供新思路。
6.解决以上问题及缺陷的意义为：通过此发明，在高海拔地区动物饲料中添加菊苣酸饲料添加剂，缓解低氧应激通过对动物心肌细胞的影响，提高动物低氧环境适应能力。


技术实现要素：

7.针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂。
8.本发明是这样实现的，一种调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂，所述调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂的有效成分为紫锥菊提取物—菊苣酸。
9.进一步，所述菊苣酸含量为4％，为黄绿色精细粉末，包括2～2.2％的菊苣酸、1～1.5％的咖啡酸、0.5～1％的绿原酸以及0.3～0.5％的紫锥菊甙(菊苣酸里4％含量的组成)。
10.本发明的另一目的在于提供一种验证所述菊苣酸作为调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂的方法，所述验证所述菊苣酸作为调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂的方法包括以下步骤：
11.步骤一，进行试剂的配制；
12.步骤二，进行细胞培养及分组；
13.步骤三，进行氧化损伤水平相关酶活性的测定；
14.步骤四，进行相关炎性因子指标的测定；
15.步骤五，进行能量代谢相关指标的测定；
16.步骤六，进行数据处理。
17.进一步，所述步骤一中的试剂的配制包括：
18.紫锥菊提取物—菊苣酸的配制：将紫锥菊提取物—菊苣酸溶解于dmem培养基中，配置浓度为60μg/ml的紫锥菊提取物—菊苣酸使用，4℃冰箱避光保存。
19.进一步，所述步骤二中的细胞培养及分组包括：
20.将h9c2大鼠心肌细胞置于37℃、5％co2、饱和湿度的培养箱中培养，用含10％胎牛血清和1％双抗的dmem培养液进行培养，每24h换一次液，待细胞生长约70～80％融合时将其传代，2～3d进行一次细胞传代，传代培养足够的细胞以备用；取处于对数生长期的细胞接种到96孔板上，用于试验细胞分为对照组、菊苣酸组、低氧组、低氧+菊苣酸；四个组预处理24h，令细胞贴壁及生长到合适的细胞密度，将对照组与常氧+菊苣酸组放置co2培养箱中24h，将低氧组与低氧+菊苣酸组放置细胞1％氧浓度低氧小室中，而后将低氧小室放置在co2培养箱中24h，每组共计培养48h；其中，氧浓度使用mic-101细胞低氧小室-细胞缺氧-细胞高氧富氧培养仓控制氧浓度，每组设置三个重复。
21.进一步，所述对照组为常氧组，所述菊苣酸组浓度为60μg/ml，所述低氧组为1％氧浓度。
22.进一步，所述步骤三中的氧化损伤水平相关酶活性的测定包括：
23.h9c2大鼠心肌细胞经96孔板培养后，96孔板每孔加入15μl裂解液；用微量移液器轻轻吹打数下，使裂解液和细胞充分接触，用显微镜观察细胞情况，随后利用试剂盒进行sod、mda、cat以及ho-1的测定。
24.进一步，所述步骤四中的相关炎性因子指标的测定包括：
25.h9c2大鼠心肌细胞经96孔板培养后，96孔板每孔加入15μl裂解液；用微量移液器轻轻吹打数下，使裂解液和细胞充分接触，用显微镜观察细胞情况，随后进行tnf-α、il-6、以及il-10的测定。
26.进一步，所述步骤五中的能量代谢相关指标的测定包括：
27.h9c2大鼠心肌细胞经96孔板培养后，吸去上清，用胰酶室温消化2～3min，加培养液终止消化，用微量移液器轻轻吹打，将所有液体吸出转入ep管；1000r/min，离心10min弃
上清，留沉淀细胞；加入1ml pbs轻轻吹打，1000r/min，离心10min弃上清，留沉淀细胞待用；加入培养液制成细胞悬液，重新接种到96孔板，反复冻融三次后进行超微量ca
2+-atp酶含量及na
+k+-atp酶含量的测定。
28.进一步，所述步骤六中的数据处理包括：
29.所有试验数据经excel软件初步处理后，采用spss statistics 26统计软件进行方差分析，lsd法进行多重比较，表中数据以“平均数
±
标准差”表示，利用originpro 9.0软件进行绘图。
30.结合上述的所有技术方案，本发明所具备的优点及积极效果为：未见在低氧诱导下菊苣酸对h9c2大鼠心肌细胞氧化损伤水平、炎性因子、能量代谢的影响的相关报道，是首次运用菊苣酸在低氧诱导下对模型动物心肌细胞的影响，从而对ca做为在高海拔地区缓解动物低氧应激饲料添加剂的开发提供理论依据。本发明旨在探讨低氧诱导下菊苣酸(chicoric acid，ca)对h9c2大鼠心肌细胞氧化损伤水平、炎性因子、能量代谢的影响，本试验以h9c2大鼠心肌细胞为研究对象，将h9c2大鼠心肌细胞接种到96孔板上，分为对照组(常氧组)、常氧+菊苣酸(60μg/ml)组、低氧组(1％氧浓度)和低氧(1％氧浓度)+菊苣酸组(60μg/ml)，每组设置三个重复，首先四个组预处理24h，令细胞贴壁及生长到合适的细胞密度，将对照组与常氧+菊苣酸组放置co2培养箱中24h，将低氧组与低氧+菊苣酸组放置细胞1％氧浓度低氧小室中，而后将低氧小室放置在co2培养箱中24h，每组共计培养48h。随后使用elisa试剂盒进行各项指标的测定。结果表明：与对照组相比，低氧组cat含量极显著降低(p《0.01)；与低氧组相比，低氧组+菊苣酸组cat含量升高的趋势，但差异不显著(p》0.05)。与对照组相比，低氧组sod含量极显著降低(p《0.01)，与低氧组相比，低氧+菊苣酸组sod含量极显著升高(p《0.01)；与对照组相比，低氧组gsh-px含量极显著降低(p《0.01)；与低氧组相比，低氧+菊苣酸组gsh-px含量显著升高(p《0.05)。与对照组相比，低氧组ho-1含量显著降低(p《0.05)；与低氧组相比，低氧+菊苣酸组ho-1含量升高，差异不显著(p＞0.05)。与对照组相比，低氧组mda含量极显著升高(p《0.01)；与低氧组相比，低氧+菊苣酸组mda含量极显著降低(p《0.01)。与对照组相比，低氧组tnf-α含量极显著升高(p《0.01)；与低氧组相比，低氧组+菊苣酸组tnf-α含量极显著降低(p《0.01)。与对照组相比，低氧组il-6含量极显著升高(p《0.01)；与低氧组相比，低氧组+菊苣酸组il-6含量极显著降低(p《0.01)。与对照组相比，低氧组il-10含量极显著降低(p《0.01)；与低氧组相比，低氧+菊苣酸组il-10含量极显著升高(p《0.01)。与对照组相比，低氧组ca
2+-atp酶含量极显著降低(p《0.01)；与低氧组相比，低氧+菊苣酸组ca
2+-atp酶含量极显著升高(p《0.01)。与对照组相比，低氧组na
+-k
+-atp酶含量极显著降低(p《0.01)，与低氧组相比，低氧+菊苣酸组na
+-k
+-atp酶含量极显著升高(p《0.01)。综上所述，菊苣酸提高低氧诱导下的h9c2大鼠心肌细胞的抗氧化能力、减少炎症因子的分泌、增加能量代谢率。
附图说明
31.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对本发明实施例中所需要使用的附图做简单的介绍，显而易见地，下面所描述的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下还可以根据这些附图获得其他的附图。
32.图1是本发明实施例提供的紫锥菊提取物—菊苣酸对低氧诱导下的h9c2大鼠心肌细胞氧化损伤水平的影响示意图(*表示p＜0.05，**表示p＜0.01)。
33.图2是本发明实施例提供的紫锥菊提取物—菊苣酸对低氧诱导下的h9c2大鼠心肌细胞炎性因子的影响示意图(*表示p＜0.05，**表示p＜0.01)。
34.图3是本发明实施例提供的紫锥菊提取物—菊苣酸对低氧诱导下的h9c2大鼠心肌细胞能量代谢的影响示意图(*表示p＜0.05，**表示p＜0.01)。
35.图4是本发明实施例提供的验证所述菊苣酸作为调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂的方法流程图。
具体实施方式
36.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
37.针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂，下面结合附图对本发明作详细的描述。
38.本发明实施例提供的调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂的有效成分为紫锥菊提取物—菊苣酸，所述菊苣酸含量为4％，为黄绿色精细粉末，包括2～2.2％的菊苣酸、1～1.5％的咖啡酸、0.5～1％的绿原酸以及0.3～0.5％的紫锥菊甙。
39.如图4所示，本发明实施例提供的验证所述菊苣酸作为调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂的方法包括以下步骤：
40.s101，进行试剂的配制；
41.s102，进行细胞培养及分组；
42.s103，进行氧化损伤水平相关酶活性的测定；
43.s104，进行相关炎性因子指标的测定；
44.s105，进行能量代谢相关指标的测定；
45.s106，进行数据处理。
46.下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步描述。
47.实施例：菊苣酸对低氧诱导下的h9c2大鼠心肌细胞氧化损伤水平、炎性因子、能量代谢的影响
48.1、本发明旨在探讨低氧诱导下菊苣酸(chicoric acid，ca)对h9c2大鼠心肌细胞氧化损伤水平、炎性因子、能量代谢的影响，本试验以h9c2大鼠心肌细胞为研究对象，将h9c2大鼠心肌细胞接种到96孔板上，分为对照组(常氧组)、常氧+菊苣酸(60μg/ml)组、低氧组(1％氧浓度)和低氧(1％氧浓度)+菊苣酸组(60μg/ml)，每组设置三个重复，首先四个组预处理24h，令细胞贴壁及生长到合适的细胞密度，将对照组与常氧+菊苣酸组放置co2培养箱中24h，将低氧组与低氧+菊苣酸组放置细胞1％氧浓度低氧小室中，而后将低氧小室放置在co2培养箱中24h，每组共计培养48h。随后使用elisa试剂盒进行各项指标的测定。结果表明：与对照组相比，低氧组cat含量极显著降低(p《0.01)；与低氧组相比，低氧组+菊苣酸组cat含量升高的趋势，但差异不显著(p》0.05)。与对照组相比，低氧组sod含量极显著降低(p《0.01)，与低氧组相比，低氧+菊苣酸组sod含量极显著升高(p《0.01)；与对照组相比，低氧
组gsh-px含量极显著降低(p《0.01)；与低氧组相比，低氧+菊苣酸组gsh-px含量显著升高(p《0.05)。与对照组相比，低氧组ho-1含量显著降低(p《0.05)；与低氧组相比，低氧+菊苣酸组ho-1含量升高，差异不显著(p＞0.05)。与对照组相比，低氧组mda含量极显著升高(p《0.01)；与低氧组相比，低氧+菊苣酸组mda含量极显著降低(p《0.01)。与对照组相比，低氧组tnf-α含量极显著升高(p《0.01)；与低氧组相比，低氧组+菊苣酸组tnf-α含量极显著降低(p《0.01)。与对照组相比，低氧组il-6含量极显著升高(p《0.01)；与低氧组相比，低氧组+菊苣酸组il-6含量极显著降低(p《0.01)。与对照组相比，低氧组il-10含量极显著降低(p《0.01)；与低氧组相比，低氧+菊苣酸组il-10含量极显著升高(p《0.01)。与对照组相比，低氧组ca
2+
atp酶含量极显著降低(p《0.01)；与低氧组相比，低氧+菊苣酸组ca
2+
atp酶含量极显著升高(p《0.01)。与对照组相比，低氧组na
+k+-atp酶含量极显著降低(p《0.01)，与低氧组相比，低氧+菊苣酸组na
+k+-atp酶含量极显著升高(p《0.01)。综上所述，菊苣酸提高低氧诱导下的h9c2大鼠心肌细胞的抗氧化能力、减少炎症因子的分泌、增加能量代谢率。
49.2、材料与方法
50.2.1实验材料
51.h9c2大鼠心肌细胞购买于武汉普诺赛生命科技有限公司；紫锥菊提取物—菊苣酸，购于西安锐博生物科技有限公司。成分：菊苣酸含量4％(菊苣酸(2％～2.2％)+咖啡酸1％～1.5％+绿原酸0.5％～1％+紫锥菊甙0.3％～0.5％)，为黄绿色精细粉末。dmem干粉和胎牛血清购自于gibco公司；pbs购自hfart公司；胰蛋白酶溶液购自solarbio公司；超氧化物歧化酶(sod)测定试剂盒、丙二醛(mda)测定试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(gsh-px)测定试剂盒、过氧化氢酶(cat)测定试剂盒、超微量ca
2+-atp酶测试盒、超微量na
+-k
+-atp酶测试盒、总蛋白(tp)测定试剂盒，购于南京建成生物工程研究所；大鼠血红素氧合酶1(ho-1)测定试剂盒、大鼠白细胞介素-6(il-6)测定试剂盒、大鼠白细胞介素10(il-10)测定试剂盒、大鼠肿瘤坏死因子α(tnf-α)测定试剂盒，购自于江苏酶免实业有限公司；dmem干粉和胎牛血清购自于gibco公司；pbs购自hfart公司；胰蛋白酶溶液购自solarbio公司；青霉素-链霉素(penicillin-streptomycin solution)混合液，购自于武汉普诺赛生命科技有限公司。ripi(强)裂解液；购自于陕西中晖赫彩生物医药科技有限公司。
52.2.2主要仪器
53.超净工作台(江苏通净净化设备有限公司)；co2细胞培养箱(美国nuaire公司)；mic-101细胞低氧小室-细胞缺氧-细胞高氧富氧培养仓购自杭州艾普仪器设备有限公司；高速低温离心机(英国dynamica公司)酶标仪，购自意大利multiskan公司。
54.2.3试剂配制
55.紫锥菊提取物—菊苣酸的配制：将紫锥菊提取物—菊苣酸溶解于dmem培养基中，配置浓度为60μg/ml的紫锥菊提取物—菊苣酸使用，4℃冰箱避光保存。
56.2.4细胞培养及分组
57.将h9c2大鼠心肌细胞置于37℃、5％co2、饱和湿度的培养箱中培养，用含10％胎牛血清和1％双抗的dmem培养液进行培养，每24h换一次液，待细胞生长约70％～80％融合时将其传代，2～3d进行一次细胞传代，传代培养足够的细胞以备用。取处于对数生长期的细胞接种到96孔板上，用于试验细胞分为对照组(常氧组)、菊苣酸组(60μg/ml)、低氧组(1％氧浓度)、低氧(1％氧浓度)+菊苣酸(60μg/ml)，首先四个组预处理24h，令细胞贴壁及生长
到合适的细胞密度，将对照组与常氧+菊苣酸组放置co2培养箱中24h，将低氧组与低氧+菊苣酸组放置细胞1％氧浓度低氧小室中，而后将低氧小室放置在co2培养箱中24h，每组共计培养48h。其中氧浓度使用mic-101细胞低氧小室-细胞缺氧-细胞高氧富氧培养仓控制氧浓度，每组设置三个重复。
58.2.5氧化损伤水平相关酶活性测定
59.h9c2大鼠心肌细胞经96孔板培养后，96孔板每孔加入15μl裂解液。用微量移液器轻轻吹打数下，使裂解液和细胞充分接触，用显微镜观察细胞情况，随后sod、mda、cat参照南京建成生物工程研究所的相应试剂盒流程测定，ho-1参照江苏酶免实业有限公司的相应试剂盒流程测定。
60.2.6相关炎性因子指标测定
61.h9c2大鼠心肌细胞经96孔板培养后，96孔板每孔加入15μl裂解液。用微量移液器轻轻吹打数下，使裂解液和细胞充分接触，用显微镜观察细胞情况，随后进行tnf-α、il-6、以及il-10的测定。
62.2.7能量代谢相关指标的测定
63.h9c2大鼠心肌细胞经96孔板培养后，吸去上清，用胰酶室温消化2～3分钟，加培养液终止消化，用微量移液器轻轻吹打，将所有液体吸出转入ep管，然后1000r/min，离心10分钟弃上清，留沉淀细胞，再加入1ml pbs轻轻吹打，再次1000r/min，离心10分钟弃上清，留沉淀细胞待用，加入培养液制成细胞悬液，重新接种到96孔板，反复冻融三次，随后超微量ca
2+-atp酶测试盒、超微量na
+-k
+-atp酶测试盒参照南京建成生物工程研究所的相应试剂盒流程测定。
64.2.8数据处理
65.所有试验数据经excel软件初步处理后，采用spss statistics 26统计软件进行单因素(one-way anova)方差分析，duncan氏多重比较检验，表中数据以“平均数
±
标准差”表示，以p《0.05表示差异显著，p《0.01表示差异极显著，利用origin pro 9.0软件进行绘图。
66.3、结果与分析
67.3.1紫锥菊提取物—菊苣酸对低氧诱导下的h9c2大鼠心肌细胞氧化损伤水平的影响
68.如图1(a)所示，与对照组相比，常氧+菊苣酸组的cat含量极显著升高(p《0.01)，而低氧组与低氧组+菊苣酸组cat含量极显著降低(p《0.01)；与常氧+菊苣酸组相比，低氧组与低氧组+菊苣酸组cat含量极显著降低(p《0.01)；与低氧组相比，低氧组+菊苣酸组cat含量升高的趋势，但差异不显著(p》0.05)。如图1(b)所示，与对照组相比，常氧+菊苣酸组sod含量极显著升高(p《0.01)，低氧组sod含量极显著降低(p《0.01)，与常氧+菊苣酸组相比，低氧组与低氧+菊苣酸组sod含量极显著降低(p《0.01)，与低氧组相比，低氧+菊苣酸组sod含量极显著升高(p《0.01)；如图1(c)所示，与对照组相比，常氧+菊苣酸组gsh-px含量极显著升高(p《0.01)，低氧组与低氧+菊苣酸组gsh-px含量极显著降低(p《0.01)；与常氧+菊苣酸组相比，低氧组与低氧+菊苣酸组gsh-px含量极显著降低(p《0.01)；与低氧组相比，低氧+菊苣酸组gsh-px含量显著升高(p《0.05)。如图1(d)所示，与对照组相比，常氧+菊苣酸组ho-1含量极显著升高(p《0.01)，低氧组ho-1含量显著降低(p《0.05)，低氧+菊苣酸组ho-1含量降
低，差异不显著(p》0.05)；与常氧+菊苣酸组相比，低氧组与低氧+菊苣酸组ho-1含量极显著降低(p《0.01)；与低氧组相比，低氧+菊苣酸组ho-1含量升高，差异不显著(p＞0.05)。如图1(e)所示，与对照组相比，常氧+菊苣酸组mda含量极显著降低(p《0.01)，低氧组与低氧+菊苣酸组mda含量极显著升高(p《0.01)；与常氧+菊苣酸组相比，低氧组与低氧+菊苣酸组mda含量极显著升高(p《0.01)；与低氧组相比，低氧+菊苣酸组mda含量极显著降低(p《0.01)。
69.3.2紫锥菊提取物—菊苣酸对低氧诱导下的h9c2大鼠心肌细胞炎性因子的影响
70.如图2(a)所示，与对照组相比，常氧组+菊苣酸组tnf-α含量极显著降低(p《0.01)，低氧组与低氧组+菊苣酸组tnf-α含量极显著升高(p《0.01)；与常氧+菊苣酸组相比，低氧组与低氧组+菊苣酸组tnf-α含量极显著升高(p《0.01)；与低氧组相比，低氧组+菊苣酸组tnf-α含量极显著降低(p《0.01)。如图2(b)所示，与对照组相比，常氧组+菊苣酸组il-6含量降低，差异不显著(p》0.05)，低氧组与低氧组+菊苣酸组il-6含量极显著升高(p《0.01)；与常氧组+菊苣酸组相比，低氧组与低氧组+菊苣酸组il-6含量极显著升高(p《0.01)；与低氧组相比，低氧组+菊苣酸组il-6含量极显著降低(p《0.01)。如图2(c)所示，与对照组相比，常氧+菊苣酸组il-10含量升高，差异不显著(p》0.05)，低氧组与低氧+菊苣酸组il-10含量极显著降低(p《0.01)；与常氧+菊苣酸组相比，低氧组与低氧+菊苣酸组il-10含量极显著降低(p《0.01)；与低氧组相比，低氧+菊苣酸组il-10含量极显著升高(p《0.01)。
71.3.3紫锥菊提取物—菊苣酸对低氧诱导下的h9c2大鼠心肌细胞能量代谢的影响
72.如图3(a)所示，与对照组相比，常氧+菊苣酸组ca
2+-atp酶含量极显著升高(p《0.01)，低氧组与低氧+菊苣酸组ca
2+-atp酶含量极显著降低(p《0.01)；与常氧+菊苣酸组相比，低氧组与低氧+菊苣酸组ca
2+-atp酶含量极显著降低(p《0.01)；与低氧组相比，低氧+菊苣酸组ca
2+-atp酶含量极显著升高(p《0.01)。如图3(b)所示，与对照组相比，常氧+菊苣酸组na
+-k
+-atp酶含量极显著升高(p《0.01)，低氧组与低氧+菊苣酸组na
+-k
+-atp酶含量极显著降低(p《0.01)，常氧+菊苣酸组相比，低氧组与低氧+菊苣酸组na
+-k
+-atp酶含量极显著降低(p《0.01)与低氧组相比，低氧+菊苣酸组na
+-k
+-atp酶含量极显著升高(p《0.01)。
73.4、讨论
74.哺乳动物细胞中的多种生化反应必须在足够的氧气浓度下才能够顺利进行。机体长期处于低氧环境下会引发一系列生理/病理反应。长期低氧应激会导致器官在形态结构、代谢、机能等方面发生异常；如果机体长期处于低氧应激将导致组织器官功能衰竭，尤其会导致神经系统和心血管系统产生多种难以修复的损伤，最终造成脑和心等重要器官因能量供应不足而坏死。
75.4.1紫锥菊提取物—菊苣酸对低氧诱导下的h9c2大鼠心肌细胞氧化损伤水平的影响
76.低氧引起的氧化还原能力过强是由于ros生成过多和抗氧化系统受损所致。sod，cat，gsh-px，ho-1含量可直接反应细胞抗氧化程度，mda含量可间接反映细胞过氧化损伤程度。如图1(a)～(e)所示，与对照组相比，常氧+菊苣酸组sod，cat，gsh-px，ho-1含量均极显著升高(p《0.01)，mda含量极显著降低(p《0.01)证实在常氧下，菊苣酸也可提高其抗氧化能力；低氧组sod，cat，gsh-px含量均极显著降低(p《0.01)，ho-1含量显著降低(p《0.05)，mda含量极显著升高(p《0.01)证实低氧诱导下，h9c2细胞的抗氧化能力降低。而与低氧组相比，低氧+菊苣酸组sod含量极显著升高(p《0.01)，gsh-px含量显著升高(p《0.05)，cat与ho-1含
量升高，差异不显著，mda含量极显著降低(p《0.01)，虽然未恢复到其常氧下的正常水平，但是证实低氧诱导下菊苣酸可以明显提高h9c2大鼠心肌细胞在低氧环境下的抗氧化能力，明显改善低氧诱导下造成的氧化应激下的氧化损伤。
77.4.2紫锥菊提取物—菊苣酸对低氧诱导下的h9c2大鼠心肌细胞炎性因子的影响
78.低氧诱导下可令细胞产生氧化应激，进而造成氧化损伤。这时细胞就会产生免疫应答，分泌大量炎症因子，如促炎因子tnf-α，il-6抑炎因子il-10等。如图2(a)～(c)所示，与对照组相比，常氧+菊苣酸组tnf-α分泌极显著降低(p《0.01)，il-6有降低的趋势，差异不显著(p》0.05)il-10有升高的趋势，差异不显著(p》0.05)证实其在常氧下，菊苣酸也可提高其抗炎能力；与对照组相比，低氧组tnf-α、il-6分泌极显著升高(p《0.01)，il-10分泌极显著降低(p《0.01)证实在低氧诱导下可促使炎症的发生。而与低氧组相比，低氧+菊苣酸组tnf-α，il-6分泌极显著降低(p《0.01)，il-10分泌极显著升高(p《0.01)。证实在低氧诱导引发氧化应激造成的氧化损伤后，加入菊苣酸后，促炎因子tnf-α，il-6分泌量降低，而抑炎因子il-10分泌量升高，使细胞在低氧诱导下的氧化应激造成的氧化损伤下，提高其生存能力。
79.4.3紫锥菊提取物—菊苣酸对低氧诱导下的h9c2大鼠心肌细胞能量代谢的影响
80.细胞应对低氧环境的关键步骤之一是减少代谢率和代谢需求，因此在本发明中，如图3(a)～(b)所示，与对照组相比，常氧+菊苣酸组na
+-k
+-atp酶及ca
2+-atp酶活力均极显著升高(p《0.01)，证实常氧下菊苣酸可提高其能量代谢水平；低氧组na
+-k
+-atp酶及ca
2+-atp酶活力极显著低于对照组(p《0.01)，证实在低氧诱导下，其能量代谢水平降低。与低氧组相比，低氧+菊苣酸组na
+-k
+-atp酶及ca
2+-atp酶活力均极显著升高(p《0.01)。证实在低氧诱导后，代谢率减少，加入菊苣酸后，可以明显改善在低氧环境下的代谢率，改善其在低氧诱导下造成的氧化应激的氧化损伤的代谢需求。
81.5、结果
82.菊苣酸提高低氧诱导下的h9c2大鼠心肌细胞的抗氧化能力、减少炎症因子的分泌、增加能量代谢率。
83.以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本发明的保护范围之内。