技术特征:
1.一种调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂,其特征在于,所述调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂的有效成分为紫锥菊提取物—菊苣酸。2.如权利要求1所述调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂,其特征在于,所述菊苣酸含量为4%,为黄绿色精细粉末,包括2~2.2%的菊苣酸、1~1.5%的咖啡酸、0.5~1%的绿原酸以及0.3~0.5%的紫锥菊甙。3.一种验证如权利要求1~2任意一项所述菊苣酸作为调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂的方法,其特征在于,所述验证所述菊苣酸作为调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂的方法包括以下步骤:步骤一,进行试剂的配制;步骤二,进行细胞培养及分组;步骤三,进行氧化损伤水平相关酶活性的测定;步骤四,进行相关炎性因子指标的测定;步骤五,进行能量代谢相关指标的测定;步骤六,进行数据处理。4.如权利要求3所述验证所述菊苣酸作为调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂的方法,其特征在于,所述步骤一中的试剂的配制包括:紫锥菊提取物—菊苣酸的配制:将紫锥菊提取物—菊苣酸溶解于dmem培养基中,配置浓度为60μg/ml的紫锥菊提取物—菊苣酸使用,4℃冰箱避光保存。5.如权利要求3所述验证所述菊苣酸作为调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂的方法,其特征在于,所述步骤二中的细胞培养及分组包括:将h9c2大鼠心肌细胞置于37℃、5%co2、饱和湿度的培养箱中培养,用含10%胎牛血清和1%双抗的dmem培养液进行培养,每24h换一次液,待细胞生长约70~80%融合时将其传代,2~3d进行一次细胞传代,传代培养足够的细胞以备用;取处于对数生长期的细胞接种到96孔板上,用于试验细胞分为对照组、菊苣酸组、低氧组、低氧+菊苣酸;四个组预处理24h,令细胞贴壁及生长到合适的细胞密度,将对照组与常氧+菊苣酸组放置co2培养箱中24h,将低氧组与低氧+菊苣酸组放置细胞1%氧浓度低氧小室中,而后将低氧小室放置在co2培养箱中24h,每组共计培养48h;其中,氧浓度使用mic-101细胞低氧小室-细胞缺氧-细胞高氧富氧培养仓控制氧浓度,每组设置三个重复。6.如权利要求5所述验证所述菊苣酸作为调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂的方法,其特征在于,所述对照组为常氧组,所述菊苣酸组浓度为60μg/ml,所述低氧组为1%氧浓度。7.如权利要求3所述验证所述菊苣酸作为调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂的方法,其特征在于,所述步骤三中的氧化损伤水平相关酶活性的测定包括:h9c2大鼠心肌细胞经96孔板培养后,96孔板每孔加入15μl裂解液;用微量移液器轻轻吹打数下,使裂解液和细胞充分接触,用显微镜观察细胞情况,随后利用试剂盒进行sod、mda、cat以及ho-1的测定。8.如权利要求3所述验证所述菊苣酸作为调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂的方法,其特征在于,所述步骤四中的相关炎性因子指标的测定包括:h9c2大鼠心肌细胞经96孔板培养后,96孔板每孔加入15μl裂解液;用微量移液器轻轻
吹打数下,使裂解液和细胞充分接触,用显微镜观察细胞情况,随后进行tnf-α、il-6、以及il-10的测定。9.如权利要求3所述验证所述菊苣酸作为调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂的方法,其特征在于,所述步骤五中的能量代谢相关指标的测定包括:h9c2大鼠心肌细胞经96孔板培养后,吸去上清,用胰酶室温消化2~3min,加培养液终止消化,用微量移液器轻轻吹打,将所有液体吸出转入ep管;1000r/min,离心10min弃上清,留沉淀细胞;加入1ml pbs轻轻吹打,1000r/min,离心10min弃上清,留沉淀细胞待用;加入培养液制成细胞悬液,重新接种到96孔板,反复冻融三次后进行超微量ca
2+-atp酶含量及na
+
k
+-atp酶含量的测定。10.如权利要求3所述验证所述菊苣酸作为调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂的方法,其特征在于,所述步骤六中的数据处理包括:所有试验数据经excel软件初步处理后,采用spss statistics 26统计软件进行方差分析,lsd法进行多重比较,表中数据以“平均数
±
标准差”表示,利用originpro 9.0软件进行绘图。
技术总结
本发明属于添加剂技术领域,公开了一种调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂,所述调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂的有效成分为紫锥菊提取物—菊苣酸;所述菊苣酸含量为4%,为黄绿色精细粉末,包括2~2.2%的菊苣酸、1~1.5%的咖啡酸、0.5~1%的绿原酸以及0.3~0.5%的紫锥菊甙;所述验证所述菊苣酸作为调节高海拔地区动物心脏功能的添加剂的方法包括:进行试剂的配制;进行细胞培养及分组;进行氧化损伤水平相关酶活性的测定;进行相关炎性因子指标的测定;进行能量代谢相关指标的测定;进行数据处理。结果表明,菊苣酸提高低氧诱导下的H9c2大鼠心肌细胞的抗氧化能力、减少炎症因子的分泌、增加能量代谢率。炎症因子的分泌、增加能量代谢率。炎症因子的分泌、增加能量代谢率。
技术研发人员:吴华 陈鑫磊 行倩文 沈童
受保护的技术使用者:青海大学
技术研发日:2022.05.31
技术公布日:2022/8/5