技术特征：
1.一种用于治疗骨质疏松症的基于普鲁士蓝纳米酶的基因编辑平台的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：s1：合成中空介孔硅纳米粒hmsns；s2：表面生长pb：将hmsns溶于去离子水中，加入pb后搅拌，离心，干燥，得到hpb；s3：搭载crispr/cas9质粒：hpb和crispr/cas9质粒混合搅拌，离心得到的hpb@rc；s4：结合peg-aln：将步骤s3得到的hpb与peg-aln混合，避光搅拌，最终形成hpb@rc-aln基因编辑平台。2.根据权利要求1所述的用于治疗骨质疏松症的基于普鲁士蓝纳米酶的基因编辑平台的构建方法，其特征在于，步骤s1中的hmsns的合成方法如下：用反相微乳法制备hmsns，其中水相为aps水溶液，油相为溴化十六烷基三甲铵、环己烷、triton x-100和正辛醇的混合溶液，水相加入到油相中，形成油包水反相微乳体系，稳定后加入teos和nh4oh引发反应，加入丙酮终止反应，白色沉淀，清洗三遍，白色沉淀除去ctab，去离子水去除乙酸，得到中空介孔硅纳米粒hmsns。3.根据权利要求1所述的用于治疗骨质疏松症的基于普鲁士蓝纳米酶的基因编辑平台的构建方法，其特征在于，步骤s2中的pb的制备方法如下：将fecl3水溶液，和k4[fe(cn)6]3h2o溶液缓慢混合，连续搅拌，离心干燥得到pb。4.根据权利要求1所述的用于治疗骨质疏松症的基于普鲁士蓝纳米酶的基因编辑平台的构建方法，其特征在于，步骤s3中的hpb与rc质粒的配比如下：每2mg hpb加入0.5mgrc质粒。5.根据权利要求1所述的用于治疗骨质疏松症的基于普鲁士蓝纳米酶的基因编辑平台的构建方法，其特征在于，步骤s4中，所述基因编辑为细胞内基因编辑；细胞内基因编辑方法为：将制备的基因纳米颗粒用αmem细胞培养基重悬获得纳米颗粒重悬液，进行细胞培养，提取细胞的rna和蛋白进行检测其基因突变情况。6.权利要求1-5中任一项所述的制备方法制备得到的基于普鲁士蓝纳米酶的基因编辑平台。7.权利要求6所述的基于普鲁士蓝纳米酶的基因编辑平台在制备治疗骨质疏松的药物中的应用。
技术总结
本发明公开一种用于治疗骨质疏松症的基于普鲁士蓝纳米酶的基因编辑平台的构建方法HPB@RC-ALN，方法包括合成HMSNs、表面生长PB、搭载CRISPR/Cas9质粒、结合ALN；HPB@RC-ALN限制ROS生成，缓解成骨细胞的衰老，从而促进骨形成。同时，HPB@RC-ALN成骨搭载CRISPER/Cas9质粒后实现高效转染，精确达到RANKL基因编辑目标，并在成骨细胞中敲除RANKL基因，使破骨细胞的形成被显著抑制。本发明的基于纳米酶的基因编辑平台通过挽救细胞衰老和阻断RANKL的产生实现了对成骨细胞-破骨细胞的双向调控。破骨细胞的双向调控。破骨细胞的双向调控。
技术研发人员：陈昊 李克 王辉辉
受保护的技术使用者：扬州大学
技术研发日：2022.10.18
技术公布日：2023/3/27