8小 时，待培养基混浊后取出，然后放入4°C冰箱保存待用；
[0064] 第二步、菌种复合培养
[0065] (1)将步骤1培养的菌种按以下重量百分比称取：酿酒酵母15%、嗜酸乳杆菌 30 %、植物乳杆菌30 %、双歧杆菌25%;
[0066] (2)菌种复合培养：将以上称取的菌种按1 :100比例放入以下重量配比的原料中： 红糖5%、纯净水95 %，放入发酵罐搅拌均匀后30°C密闭培养，待pH小于3. 60后培养15 天；
[0067] 第三步、原料复合发酵
[0068] (1)原料粉碎：将筛选个体均匀的葛根、沙棘、葡萄籽分别通过粉碎机粉碎成40 目；
[0069] (2)复合发酵：将以上复合培养的菌种按1 :20比例放入以下配比的原料中：葛根 25 %、沙棘20 %、葡萄籽5 %、红糖5 %、纯净水45 %，放入发酵罐搅拌均匀后30°C密闭培养 15天；
[0070] 第四步、浓缩液制备
[0071] (1)发酵罐内添加水，使固液比达到1 :1，浸泡1天，然后淋洗；
[0072] (2)淋洗液在50 °C进行浓缩至20 % ;
[0073] (3)浓缩后的复合天然产物液，在60°C下杀菌20分钟后4°C贮藏待用。
[0074] 第五步、固态剂型制备
[0075] 将物料按以下重量比称取：复合天然产物浓缩液20%、赤藓糖醇20%、乳糖55%、 保护剂5 %，先将赤藓糖醇和乳糖依次加入喷雾干燥一步制粒机，然后开始喷入复合天然产 物浓缩液，流量l〇ml/分钟，最后喷入溶解于适量水中的保护剂，制粒机的进风温度60°C， 出风温度45°C，待喷雾器内温度降到30°C时出料，即得。
[0076] 实施例二（口服液型）
[0077] 第一步：同实施例一；
[0078] 第二步：菌种复合培养
[0079] (1)将步骤1培养的菌种按以下重量百分比称取：酿酒酵母10%、嗜酸乳杆菌 30 %、植物乳杆菌30 %、双歧杆菌30%;
[0080] (2)菌种复合培养：将以上称取的菌种按1 :100比例放入以下配比的原料中：红 糖3%、纯净水97%，放入发酵罐搅拌均匀后32°C密闭培养，待pH小于3. 60后培养12天；
[0081] 第三步、原料复合发酵
[0082](1)原料粉碎：将筛选个体均匀的葛根、沙棘、葡萄籽分别通过粉碎机粉碎成40 目；
[0083] (2)复合发酵：将以上复合培养的菌种按1 :15比例放入以下配比的原料中：葛根 30 %、沙棘20 %、葡萄籽5 %、红糖5 %、纯净水40 %，放入发酵罐搅拌均匀后32°C密闭培养 12天；
[0084] 第四步、浓缩液制备
[0085] (1)发酵罐内添加水，使固液比达到1 :1，浸泡1天，然后淋洗。
[0086] (2)淋洗液在45 °C进行浓缩至20 %
[0087] (3)浓缩后的复合天然产物液，在65°C下杀菌10分钟后4°C贮藏待用；
[0088] 第五步、口服液型制备
[0089] 将物料按以下重量比称取：复合天然产物浓缩液45%、赤藓糖醇45%、保护剂 5-10%，先将赤藓糖醇和保护剂加入适量热蒸馏水搅拌溶解，冷却至35°C后加入复合天然 产物浓缩液，搅拌使溶液澄清后即得。
[0090] 实施例三：
[0091] 根据《保健食品检验与评价技术规范（2003版）》，按照缓解体力疲劳功能评价的 检验方法进行。
[0092] 动物分组：选择健康清洁级雄性昆明种小鼠，体重18_22g，常规适应性喂养2天 后，随机分为2组（空白组、给药组）。
[0093] 给药剂量的确定：根据给人推荐剂量（1. 5g固体剂型/d或者50ml液体剂型/d) 的小鼠等效剂量作为的灌胃剂量，即0. 30g固体剂型/kg BW/d或者10ml液体剂型/kg BW/ d，经口给药，灌胃容积20mL/kg ? BW，空白组灌胃蒸馏水。
[0094] 实验方法：
[0095] 每天给药1次，连续给药14天。末次给药30min后，在小鼠尾根部负荷5%体重 铅丝置于游泳箱中游泳。水深不少于30cm，水温25± 1. 0°C，记录小鼠自游泳开始至死亡的 时间。参照MCARLE推荐的力竭判断标准，即小鼠头部沉入水中，经10s还不能返回水面视 为力竭。记录自游泳开始至力竭的时间作为游泳时间。数据以均数和标准差（又±SD)表 示。各组数据均进行方差齐性检验，方差齐，组间差异采用t检验。测试结果见表1:
[0096] 表1各组小鼠力竭性游泳时间比较（X±S)
[0097]
【主权项】
1. 一种具有抗疲劳功能的复合微生物制剂，其特征在于，所述微生物制剂经下列原料 发酵而成：复合微生物菌种、中药原料、红糖和水。
2. 根据权利要求1所述的复合微生物制剂，其特征在于，所述复合微生物菌种包括下 列组分及各组分的重量份数： 酿酒酵母 10-20重量份； 嗜酸乳杆菌20-30重量份； 植物乳杆菌20-30重量份； 双歧杆菌20-30重量份； 其中，所述酿酒酵母、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌经过培养发酵。
3. 根据权利要求1所述的复合微生物制剂，其特征在于，所述中药原料、红糖和水的重 量份数为： 中药原料 40-65重量份； 红糖 2-5重量份； 水 40-60重量份。
4. 根据权利要求1所述的复合微生物制剂，其特征在于，所述复合微生物菌种与所述 中药原料、红糖和水的重量比为1 :15-20。
5. 根据权利要求1、3或4所述的复合微生物制剂，其特征在于，所述中药原料至少包括 葛根、沙棘和葡萄籽。
6. 根据权利要求1所述的复合微生物制剂，其特征在于，所述微生物制剂为固体制剂 或液体口服制剂。
7. 根据权利要求1所述的复合微生物制剂，其特征在于，所述微生物制剂中还包括赤 藓糖醇、乳糖、保护剂中的至少一种。
8. -种如权利要求1所述微生物制剂的制作方法，其特征在于，步骤包括： 步骤一：复合微生物菌种制备 (1. 1)、将酿酒酵母接入马铃薯液体培养基中培养至培养基浑浊；将嗜酸乳杆菌、植物 乳杆菌、双歧杆菌分别接入MRS液体培养基中培养至培养基浑浊； (1. 2)、将上述经培养后的菌种，按以下重量百分比配制：酿酒酵母10-20重量份、嗜酸 乳杆菌20-30重量份、植物乳杆菌20-30重量份、双歧杆菌20-30重量份； (1. 3)、将（1. 2)称取的菌种按重量比为1 :80-120的比例放入原料I中发酵，得复合微 生物菌种； 其中，所述原料I包括红糖、水； 其中，所述发酵条件为28-32°C、密闭发酵，待pH小于3. 60-4. 00条件下；步骤二：中药 的复合微生物发酵液制备 将步骤一所得复合微生物菌种与原料II按1:15-20比例培养； 其中，所述原料II包括中药原料、红糖、水； 其中，中药原料为粉末状，粒径为30-50目； 其中，所述培养条件在28-32°C条件下，培养12-15天； 步骤三：中药的复合微生物发酵浓缩液制备 (3. 1)、将步骤二所得中药的复合微生物发酵液加水，使固液比为1:1后，依次浸泡、淋 洗； (3. 2)、将淋洗液浓缩，得中药的复合微生物发酵浓缩液； 步骤四：微生物制剂制备 将步骤三得到的中药复合微生物发酵浓缩液与赤藓糖醇、乳糖、保护剂中的至少一种 混合，制得固体或液体所述微生物制剂； 其中，得到复合微生物浓缩液后需在60_70°C条件下，杀菌10-30min后，2_4°C储臧待 用。
9. 根据权利要求8所述的制作方法，其特征在于，所述步骤一的（1. 1)中酿酒酵母的培 养条件为：在28-32°C的条件下，180-220rpm振荡培养48-72小时；嗜酸乳杆菌、植物乳杆 菌、双歧杆菌的培养条件均为：在35-39°C条件下，培养48-72小时。
10. 根据权利要求8所述的制作方法，其特征在于，所述原料I按重量配比为：红糖 5-10%、水90-98%;所述原料II按重量配比为：中药原料40-65重量份、红糖2-5重量份、 水40-60重量份；其中，所述中药原料选自葛根、沙棘和葡萄籽。
【专利摘要】本发明提供了一种具有抗疲劳功能的生物制剂及其制作方法。本发明制备的生物制剂产品中富含大量抗疲劳能力的活性成分，例如：黄酮类(4.43％)、皂甙类(82.4mg/100g)、氨基酸(4.21％)、谷胱甘肽(886mg/100g)、维生素C(322mg/100g)、维生素E(908μg/100g)、SOD(194000U/100g)，乳酸盐(5.04％)以及多种微量元素(铁：503mg/kg；硒：0.18mg/kg等)等，并且具备抗疲劳的功能，其通过微生物复合发酵技术对中药的有效成分进行转化，使其具有更易吸收利用，效果显著等特点，是一种对抗氧化、清除自由基、改善人体疲劳状况的天然生物制剂。
【IPC分类】A61K36-87, A61P39-06, A61P39-00
【公开号】CN104623122
【申请号】CN201510014572
【发明人】江瀚, 陈琦冈
【申请人】江瀚生物科技（上海）有限公司
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年1月12日