ID NO: 11)或 SEQ ID NO: 2 的 prM-E 序列有至 少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%同 一性。
[0069] 例如用于本发明方法的本发明的疫苗组合物优选包含血清型1的登革热抗原、血 清型2的登革热抗原、血清型3的登革热抗原和血清型4的登革热抗原。所述组合物在本 文可描述为四价组合物。例如本发明的组合物，例如用于本发明的保护方法的组合物，可有 利地包含血清型1、2、3和4的登革热抗原的下列组合的任一种：i)包含CYD-I的M和E序 列的登革热抗原、包含CYD-LAV的M和E序列的登革热抗原、包含CYD-3的M和E序列的嵌 合登革热病毒和包含CYD-4的M和E序列的登革热抗原；ii)包含CYD-I的M和E序列的登 革热抗原、包含CYD-BID的M和E序列的登革热抗原、包含CYD-3的M和E序列的登革热抗 原和包含CYD-4的M和E序列的登革热抗原；（iii)包含CYD-I的M和E序列的登革热抗 原、包含CYD-PR的M和E序列的登革热抗原、包含CYD-3的M和E序列的登革热抗原和包 含CYD-4的M和E序列的登革热抗原；（iv)包含CYD-I的M和E序列的登革热抗原、包含 CYD-MD的M和E序列的登革热抗原、包含CYD-3的M和E序列的登革热抗原和包含CYD-4 的M和E序列的登革热抗原。例如，本发明的组合物还可有利地包含登革热抗原的下列组合 的任一种：i) CYD-l、CYD-LAV、CYD-3 和 CYD-4 ;ii) CYD-l、CYD-BID、CYD-3 和 CYD-4 ; (iii) CYD-l、CYD-PR、CYD-3 和 CYD-4 或（iv) CYD-l、CYD-MD、CYD-3 和 CYD-4。本发明的组合物还 可有利地包含登革热抗原的下列组合：i)包含CYD-I的M和E序列的登革热抗原、VDV2、包 含CYD-3的M和E序列的登革热抗原和包含CYD-4的M和E序列的登革热抗原。例如，本 发明的组合物可有利地包含CYD-1、VDV-2、CYD-3和CYD-4。如本文所述，本发明的组合物 可有利地包含血清型2的登革热抗原，其包含CYD-LAV (SEQ ID NO: 13)、CYD-BID (SEQ ID NO: 14)、CYD-PR (SEQ ID NO: 15)、CYD-MD (SEQ ID NO: 16)或SEQ ID NO: 18 的E序列。 如本文所述，本发明的组合物可有利地包含血清型2的登革热抗原，其包含与CYD-LAV (SEQ ID NO: 13)、CYD-BID (SEQ ID NO: 14)、CYD-PR (SEQ ID NO: 15)、CYD-MD (SEQ ID NO: 16)或SEQ ID NO: 18的E序列具有至少90%同一性的序列。例如，所述序列可与CYD-LAV (SEQ ID NO: 13),CYD-BID (SEQ ID NO: 14),CYD-PR (SEQ ID NO: 15),CYD-MD (SEQ ID NO: 16)或SEQ ID NO: 18的E序列有至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至 少96%、至少97%、至少98%或至少99%同一性。
[0070] 如本文所述，本发明的组合物（例如用于本发明方法的四价制剂），可有利地包含 血清型2的登革热抗原，其包含选自SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22或SEQ ID NO: 23的多肽。优选所述血清型2的登革热抗原还包含选自SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16 或 SEQ ID NO: 18 的多肽。例如， 所述血清型2的登革热抗原优选包含：i) SEQ ID NO: 13的多肽和SEQ ID NO: 19的多肽； ii) SEQ ID NO: 14 的多肽和 SEQ ID NO: 20 的多肽；iii) SEQ ID NO: 15 的多肽和 SEQ ID NO: 21 的多肽；iv) SEQ ID NO: 16 的多肽和 SEQ ID NO: 22 的多肽；或V)SEQ ID NO: 18的多肽和SEQ ID NO: 23的多肽。
[0071] 本文所述的本发明的组合物（例如用于本发明方法的四价制剂），可有利地包含 血清型 2 的登革热抗原，其包含与 SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22或SEQ ID NO: 23具有至少90%同一性的多肽。优选所述血清型2的登革热抗原 还包含与 SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16 或 SEQ ID NO: 18具有至少90%同一性的多肽。例如，所述血清型2的登革热抗原优选包含：i)与SEQ ID NO: 13具有至少90%序列同一性的多肽和与SEQ IDN0: 19具有至少90%序列同一性的多 肽；ii)与SEQ ID NO: 14具有至少90%序列同一性的多肽和与SEQ ID NO: 20具有至少 90%序列同一性的多肽；iii)与SEQ ID NO: 15具有至少90%序列同一性的多肽和与SEQ ID NO: 21具有至少90%序列同一性的多肽；iv)与SEQ ID NO: 16具有至少90%序列同一 性的多肽和与SEQ ID NO: 22具有至少90%序列同一性的多肽；或V)与SEQ ID NO: 18具 有至少90%序列同一性的多肽和与SEQ ID NO: 23具有至少90%序列同一性的多肽。在优 选的实施方案中，本文提及至少90%同一性时可解释为与指定序列有至少91%、至少92%、至 少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%同一性。
[0072] 在前面段落描述的血清型2的登革热抗原可有利地与本文其它部分描述的血清 型1、3和4的登革热抗原的任一种组合形成包含血清型1的登革热抗原、血清型2的登革 热抗原、血清型3的登革热抗原和血清型4的登革热抗原的四价制剂。例如，所述血清型1、 2、3和4的登革热抗原可各自独立选自活的减毒登革热病毒或活的减毒嵌合登革热病毒。 有利的是，用于本发明方法的组合物包含血清型1、2、3和4各自的登革热抗原，其中所述血 清型1、2、3和4的登革热抗原各自为活的减毒嵌合登革热病毒。有利的是，用于本发明方 法的组合物包含血清型1、2、3和4各自的登革热抗原，其中所述血清型1、3和4的登革热 抗原各自为活的减毒嵌合登革热病毒，且所述血清型2的登革热抗原选自活的减毒登革热 病毒和活的减毒嵌合登革热病毒。
[0073] 有利的是，用于本发明方法的组合物包含血清型1、2、3和4各自的登革热抗原，其 中所述血清型1、3和4的登革热抗原各自为活的减毒嵌合登革热病毒，且所述血清型2的 登革热抗原为活的减毒登革热病毒。例如，所述血清型1、3和4的活的减毒嵌合登革热病 毒可为登革热/登革热嵌合体例如基于DEN-2 16681/PDK53毒株（亦称为LAV2)的登革热 /登革热嵌合体。例如所述血清型1、3和4的登革热/登革热嵌合体可为这样的嵌合病毒， 其中DEN-2 16681/PDK53毒株的基因组被修饰，使得DEN-2 16681/PDK53毒株的prM和E 基因分别被血清型1毒株、血清型2毒株和血清型3毒株的prM和E基因置换。所述嵌合 登革热/登革热病毒分别可称为DEN-2/1、DEN-2/3和DEN-2/4。在这种情况下，是活的减 毒病毒的血清型2的登革热抗原可为DEN-2 16681/PDK53毒株（亦称为LAV2)。
[0074] 本发明人的目的是提供用于本发明方法的优化的四价登革热疫苗组合物（即包 含血清型1、2、3和4各自的登革热抗原的疫苗组合物），当与由实施例1限定的CYD-1、 CYD-2、CYD-3和CYD-4产生的中和抗体反应相比时，其提供针对血清型2的登革热病毒的 改进的中和抗体反应。
[0075] 因此，一方面，本发明有利地提供用于本发明方法的疫苗组合物，其中所述组合物 包含血清型1、2、3和4各自的登革热抗原，其中所述血清型1、3和4的登革热抗原各自为 活的减毒嵌合登革热病毒，且所述血清型2的登革热抗原为活的减毒登革热病毒，其包含 与SEQ ID NO: 24所示序列具有至少90%序列同一性的核酸序列。
[0076] 因此，另一方面，本发明有利地提供用于本发明方法的疫苗组合物，其包含血清型 1的登革热抗原、血清型2的登革热抗原、血清型3的登革热抗原和血清型4的登革热抗原， 其中： i) 所述血清型1的登革热抗原是YF/登革热嵌合登革热病毒（即其中YF病毒的遗传 骨架通过编码YF病毒的prM和E蛋白的序列用登革热血清型1病毒的相应序列交换而被 修饰的受体黄热病病毒）； ii) 所述血清型2的登革热抗原是活的减毒血清型2的登革热病毒，其包含与SEQ ID NO: 24所示序列具有至少90%序列同一性的核酸序列； iii) 所述血清型3的登革热抗原是YF/登革热嵌合登革热病毒（即其中YF病毒的遗 传骨架通过编码YF病毒的prM和E蛋白的序列用登革热血清型3病毒的相应序列交换而 被修饰的受体黄热病病毒）和 iv) 所述血清型4的登革热抗原是YF/登革热嵌合登革热病毒（即其中YF病毒的遗 传骨架通过编码YF病毒的prM和E蛋白的序列用登革热血清型4病毒的相应序列交换而 被修饰的受体黄热病病毒）。
[0077] 优选所述受体YF病毒（其形成血清型1、3和4的YF/登革热嵌合病毒的遗传骨 架）是减毒YF病毒。例如，所述受体YF病毒可以是选自YF 17D、YF 17DD和YF 17D204的 减毒YF病毒。优选血清型1、3和4的YF/登革热嵌合病毒分别为Chimerivax登革热血清 型1 (即CYD-1)、Chimerivax登革热血清型3 (即CYD-3)和Chimerivax登革热血清型4 (即 CYD-4) 〇
[0078] 本文提及与SEQ ID NO: 24所示序列具有至少90%序列同一性的核酸序列可优选 解读为与SEQ ID NO: 24所示序列具有至少92%、至少94%、至少96%、至少98%、至少99%或 100%序列同一性的核酸序列。优选相当于SEQ ID NO: 24的736、1619、4723、5062、9191、 10063、10507、57、524、2055、2579、4018、5547、6599 和 8571 位的所述核酸序列（与 SEQ ID NO: 24所示序列具有至少90%序列同一性）内的位置上的核苷酸不突变。有利的是，是用 于本发明的组合物中的活的减毒登革热病毒的血清型2的登革热抗原（例如与上文和本文 其它部分描述的血清型1、3和4的登革热抗原（例如是活的减毒嵌合登革热病毒的血清型 1、3和4的登革热抗原，例如YF/登革热嵌合登革热病毒）联用）是包含与SEQ ID NO: 24 所示序列具有100%序列同一性的核酸序列的活的减毒登革热病毒或当与SEQ ID NO: 24 所示序列比较时包含至少1个且不多于20个核苷酸取代的活的减毒登革热病毒。优选当 与SEQ ID NO: 24所示序列比较时，所述活的减毒登革热病毒包含至少一个且不多于15、 14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3或2个核苷酸取代。优选在相当于5￡0 1〇勵：24的736、 1619、4723、5062、9191、10063、10507、57、524、2055、2579、4018、5547、6599 和 8571 位的所 述核酸序列内的位置上的核苷酸不突变。有利的是，当与SEQ ID NO: 24所示序列比较时， 是用于本发明的组合物中的活的减毒登革热病毒的血清型2的登革热抗原包含不多于20 个碱基突变、缺失或插入的核酸序列。在某些情况下，当与SEQ ID NO: 24所示序列比较时， 所述血清型2的活的减毒登革热病毒包含不多于15个或甚至不多于12、11、10、9、8、7、6、 5、4、3、2或1个碱基突变、缺失或插入的核酸序列。优选在相当于SEQ ID NO: 24的736、 1619、4723、5062、9191、10063、10507、57、524、2055、2579、4018、5547、6599 和 8571 位上的 所述核酸序列内的位置上的核苷酸不突变。
[0079] 另外优选的是，用于本发明的疫苗组合物中的血清型2的登革热抗原（例如是血 清型2的活的减毒登革热病毒或活的减毒嵌合登革热病毒的登革热抗原）当在四价登革热 疫苗组合物的情况下使用时，能够诱导人的中和抗体并且能够诱导平衡的免疫应答。另外 优选的是，用于本发明的疫苗组合物中的血清型2的登革热抗原（例如是血清型2的活的 减毒登革热病毒或活的减毒嵌合登革热病毒的登革热抗原）在人中产生低病毒血症或无 病毒血症。另外优选的是，当与由实施例1限定的CYD-l、CYD-2、CYD-3和CYD-4产生的中 和抗体反应相比时，用于本发明的四价疫苗组合物的血清型2的登革热抗原（例如是血清 型2的活的减毒登革热病毒或活的减毒嵌合登革热病毒的登革热抗原）提供针对血清型2 的登革热病毒的改进的中和抗体反应。
[0080] 有利的是，用于本发明方法的疫苗组合物包含血清型1、2、3和4各自的登革热抗 原，其中所述血清型1、3和4的登革热抗原各自为活的减毒嵌合登革热病毒，且所述血清型 2的登革热抗原为活的减毒登革热病毒，其包含与SEQ ID NO: 24所示序列具有至少90%序 列同一性的核酸序列，且其中所述血清型1、2、3和4的登革热抗原分别不是CYD-l、VDV-2、 CYD-3和CYD-4或分别不是包含CYDl的M和E序列的登革热抗原、VDV2、包含CYD3的M和 E序列的登革热抗原和包含CYD4的M和E序列的登革热抗原。
[0081] 有利的是，用于本发明方法的疫苗组合物包含血清型1、2、3和4各自的登革热抗 原，其中：（i)所述血清型1的登革热抗原是CYD-I以外的活的减毒嵌合登革热病毒或所述 血清型1的登革热抗原是CYD-I ; (ii)所述血清型2的登革热抗原是VDV-2以外的活的减 毒登革热病毒或所述血清型2的登革热抗原是VDV-2 ; (iii)所述血清型3的登革热抗原是 CYD-3以外的活的减毒嵌合登革热病毒或所述血清型3的登革热抗原是CYD-3和（iv)所述 血清型4的登革热抗原是CYD-4以外的活的减毒嵌合登革热病毒或所述血清型4的登革热 抗原是CYD-4。在这种情况下，VDV-2毒株是通过对Vero细胞的后续适应而来源于DEN-2 16681/PDK53毒株（LAV2)的毒株，其中与包括4个沉默突变的DEN-2 16681/PDK53毒株相 比，所述VDV-2毒株具有10个另外的突变。
[0082] 有利的是，用于本发明方法的组合物包含血清型1、2、3和4各自的登革热抗原，其 中：（i)所述血清型1的登革热抗原是CYD-I以外的活的减毒嵌合登革热病毒或所述血清 型1的登革热抗原是CYD-I ; (ii)所述血清型2的登革热抗原是VDV-2以外的活的减毒登革 热病毒或所述血清型2的登革热抗原是VDV-2 ; (iii)所述血清型3的登革热抗原是CYD-3 以外的活的减毒嵌合登革热病毒或所述血清型3的登革热抗原是CYD-3和（iv)所述血清 型4的登革热抗原是CYD-4以外的活的减毒嵌合登革热病毒或所述血清型4的登革热抗原 是CYD-4。在这种情况下，VDV-2毒株是包含SEQ ID NO: 24所示核酸序列的毒株。
[0083] 用于本发明方法的优选的疫苗组合物包含血清型1的登革热抗原、血清型2的登 革热抗原、血清型3的登革热抗原和血清型4的登革热抗原，其中： i) 所述血清型1的登革热抗原是CYD-I以外的YF/登革热嵌合登革热病毒或所述血 清型1的登革热抗原是CYD-I ; ii) 所述血清型2的登革热抗原是包含与SEQ ID NO: 24所示序列具有至少90%序列 同一性的核酸序列的活的减毒血清型2的登革热病毒，其中所述血清型2的登革热抗原不 是包含与SEQ ID NO: 24所示序列具有100%序列同一性的核酸序列的活的减毒血清型2的 登革热病毒或所述血清型2的登革热抗原是包含与SEQ ID NO: 24所示序列具有100%序 列同一性的核酸序列的活的减毒血清型2的登革热病毒； iii) 所述血清型3的登革热抗原是CYD-3以外的YF/登革热嵌合登革热病毒或所述 血清型3的登革热抗原是CYD-3 ;和 iv) 所述血清型4的登革热抗原是CYD-4以外的YF/登革热嵌合登革热病毒或所述血 清型4的登革热抗原是CYD-4。
[0084] 有利的是，是用于本发明的疫苗组合物中的活减毒嵌合登革热病毒的血清型2的 登革热抗原（例如与上文和本文其它部分描述的血清型1、3和4的登革热抗原（例如是YF/ 登革热嵌合登革热病毒的血清型1、3和4的登革热抗原）联用）包含与SEQ ID NO: 25所 示序列具有至少90%同一性的核酸序列。优选所述核酸序列与SEQ ID NO: 25所示序列具 有至少92%、至少94%、至少96%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。优选在相当于SEQ ID NO: 24的524、736、1619和2055位的所述核酸序列内的位置上的核苷酸不突变（即保 留出现在这些位置上的SEQ ID NO: 24中的核苷酸）。
[0085] 如本文所述，本发明的组合物可有利地包含选自以下的登革热抗原：（a)活的