绿原酸在制备治疗肌营养不良疾病的药物中的用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物医药领域，具体而言，涉及绿原酸在制备治疗肌营养不良疾病的 药物中的用途。
【背景技术】
[0002] 绿原酸（Chlorogenic acid)是由咖啡酸（Caffeic acid)与奎尼酸（Quinic acid)组成的缩酸酸，异名为咖啡单宁酸，化学名为3-0-咖啡酰奎酸（3-〇-caffeoylquinic acid)，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯类化合物。
[0003] 肌营养不良症是指一组以进行性加重的肌无力和支配运动的肌肉变性为特征的 遗传性疾病群。肌营养不良症包括先天性肌营养不良症、Duchenne肌营养不良症（DMD)、 Becker肌营养不良症（BMD)、肢带型肌营养不良症等多种类型。其临床上主要表现为不同 程度和分布的进行性加重的骨骼肌萎缩和无力，也可累及心肌。其发病原因有血管源性、神 经源性、肌纤维再生错乱、肌细胞膜功能紊乱等学说。本病病因是遗传异常，在不同的类型 中可以不同的方式进行，但遗传因素通过何种机制最终造成肌肉变性，则始终未明。
[0004] 绿原酸已被广泛应用于食品、保健品、化妆品和药品等多个领域，如：心血管保护 作用、抗氧化作用、抗紫外以及抗辐射作用、抗诱变及抗癌作用、抗菌作用、抗病毒作用、降 脂降糖作用、免疫调节作用等，但绿原酸的其他作用还需要进一步研究和探索，对治疗肌营 养不良疾病未作报道。
【发明内容】
[0005] 为了解决上述问题，本发明的目的在于提供绿原酸在制备治疗肌营养不良疾病的 药物中的用途。
[0006] 本发明采用以下方式实现： 绿原酸在制备治疗肌营养不良疾病的药物中的用途。
[0007] 进一步，所述药物以有效剂量的绿原酸为活性成分，加上药学上可接受的辅料或 辅助性成分制备而成的药剂。
[0008] 进一步，所述的药剂中每制剂单位含有绿原酸1~lOOOmg。
[0009] 进一步，所述的药剂中每制剂单位含有绿原酸30~250mg。
[0010] 进一步，所述的药剂中每制剂单位含有绿原酸100~200mg。
[0011] 进一步，所述绿原酸的纯度大于或者等于98%。
[0012] 进一步，所述药剂为口服制剂或者注射剂。
[0013] 进一步，所述肌营养不良疾病为先天性肌营养不良症、Duchenne肌营养不良症、 Becker肌营养不良症和肢带型肌营养不良症中的至少一种。
[0014] 本发明通过药效实验证明绿原酸具有防止肌纤维坏死，促进肌纤维再生，使肌力 增强，血清肌酸磷酸激酶（CPK)血清肌酸磷酸激酶血清肌酸磷酸激酶、乳酸脱氢酶（LDH)等 生化指标下降，病症明显改善的效果；同时，绿原酸能够抑制骨骼肌的肌膜破裂和坏死，具 有抗炎/免疫反应，抗氧化作用，延缓肌纤维的凋亡、变性及坏死，增强骨骼肌运动等能力， 从而发挥出治疗肌营养不良的作用。
[0015] 本发明的有益效果： 本发明提供了绿原酸在制备治疗肌营养不良疾病的药物中的用途，为肌营养不良疾病 的治疗提供了依据。
【附图说明】
[0016] 图1为实施例7中的各组小鼠腓肠肌HE染色图片； 图2为实施例7中的各组小鼠腓肠肌的电镜图片。
【具体实施方式】
[0017] 实施例1 绿原酸冻干粉针剂的制备 处方：纯度为98%的绿原酸60g，作为支架剂的甘露醇55g，作为抗氧化剂的亚硫酸氢钠 4g〇
[0018] 制法：采用现有的冻干粉针剂制法，首先将上述处方中的各组分完全溶解于纯化 水中，再分别经过超滤膜过滤，无菌灌装，冷冻干燥和压盖，按照无菌粉针剂的常规操作制 成2ml粉针剂，共1000支，每支含绿原酸60mg。
[0019] 实施例2 绿原酸片剂的制备 处方：纯度为99. 2%的绿原酸100g，作为填充剂的乳糖200g，作为崩解剂的羟丙基淀粉2〇g，作为粘合剂的羟丙甲基纤维素15g，作为润滑剂的硬脂酸镁5g。
[0020] 制法：按照片剂的常规方法制备，经压片后共制成1000片片剂，每片含绿原酸 100mg〇
[0021] 实施例3 绿原酸胶囊剂的制备 处方：纯度为98. 5%的绿原酸200g，作为填充剂的淀粉100g，作为润滑剂的滑石粉 10g〇
[0022] 制法：按照胶囊剂的常规方法制备，经充填后共制成1000粒胶囊，每粒胶囊含绿 原酸200mg。
[0023] 实施例4 绿原酸颗粒剂的制备 处方：纯度为98. 3%的绿原酸250g，乳糖1500g，糊精1000g，淀粉100g。
[0024] 制法：按照颗粒剂的常规方法制备，对软材进行过筛、干燥和整粒后，得到颗粒剂。 在无菌条件下分装颗粒剂，共制成1000袋颗粒剂，每袋颗粒剂含绿原酸250mg。
[0025] 实施例5 绿原酸丸剂的制备 处方：纯度为98%的绿原酸lg，淀粉50g以及药用量的聚维酮K30和无水乙醇。
[0026] 制法：按照丸剂的常规方法制备，采用搓丸法制得绿原酸丸剂1000粒，没粒绿原 酸丸剂含绿原酸lmg。
[0027] 实施例6 绿原酸散剂的制备 处方：纯度为99. 1%的绿原酸1000g以及药用量的辅料。
[0028]制法：按照散剂的常规方法制备，将绿原酸和辅料经粉碎、过筛后混合均匀，制备 成散剂。在无菌条件下分装成1000袋，每袋散剂含绿原酸l〇〇〇mg。
[0029] 容易理解的，上述实施例1-6中的辅料还可以采用其他相应的辅料。
[0030] 实施例7 绿原酸对杜氏肌营养不良血清CPK、肌力、病理形态的改善以及对NF-kB的影响。
[0031] 1材料与方法 1. 1实验动物 清洁级C57小鼠购自南京大学模式动物研究所，清洁级mdx小鼠购自南京大学模式动 物研究所，为dystrophin基因敲除小鼠（DMD模型鼠)，是目前最广泛应用的研究人类杜氏 肌营养不良疾病的动物模型。
[0032] 1. 2实验方法 (一）分组：24只6周龄mdx小鼠，随机抽签的方式分为3组，每组8只；按以下方式分 组及予以处理：（1)绿原酸治疗前模型组：于6周龄时做相应指标检测，作为治疗后对比的 基础值。（2)绿原酸治疗组：绿原酸以20mg/kg，腹腔注射给药，每天给药一次，连续给药14 天；（3)正常对照组：每天给予等量的生理盐水(腹腔注射)。另分别取8只6周龄和12周 龄正常小鼠，作为治疗前后的正常对照组。
[0033](二）标本提取与准备： (1)小鼠眼球取血，取血后不加抗凝剂静置1小时，低温低速离心，分离血清，放 入-20 °C冰箱中待进行CPK检测。
[0034] (2)将小鼠放在冰上分离出腓肠肌，取材时分为3部分，一份置于液氮中待进行 western blot检测，一份修剪成l~3mm组织块后放入戊二醛固定液待进行电镜检测，一份 置于4%多聚甲醛中保存待进行HE染色。
[0035] (三）实验操作 (1)悬吊试验： 将小鼠前腿握住水平玻璃棒(直径约〇. 5cm)，然后将玻璃棒缓慢升高远离桌面约45厘 米处停止，然后记录下鼠标的时间。其实验结果如下表1所示。
[0036] 表1不同观察时期各组小鼠的悬吊试验结果$ ±S，S)_
注：与同时点mdx模型组相比，P〈0. 05 ;与同组治疗前相比（P〈0. 05)。
[0037] 如表1所示，在绿原酸治疗前，mdx小鼠前臂抓住玻璃棒时间较短，模型组悬吊试 验时间明显低于正常对照组；经绿原酸治疗后，绿原酸治疗组悬吊试验时间虽然仍低于 正常对照组，但与治疗前的mdx模型组相比，其悬吊时间显著延长，因此，绿原酸可以使肌 力增强。
[0038] (2)血清CPK值测定 使用生化分析仪检测血清CPK值。因mdx小鼠的血清CPK值会有明显升高，可能会不在 线性范围内，所以血清样本在测定前使用生理盐水1 :1〇稀释。其检测结果如下表2所示。
[0039] 表2不同观察时期各组小鼠的血清CPK检测结果(S±S，U/L)
注：与同时点mdx模型组相比，P〈0. 05 ;与同组治疗前相比（P〈0. 05) 如表2所示，mdx小鼠血清CPK值明显高于正常对照组；绿原酸治疗后的mdx小鼠CPK值下降，虽仍高于正常对照组