粘土制品及其用图
【专利说明】粘±制品及其用途
[0001] 相关申请和通过引用并入 本申请要求分别提交于2012年10月2日和2013年3月15日的分别题名 为"CLAY-CONTAININGCOMPOSITIONTHATALLEVIATESEFFECTSOFBACTERIAL EXOTOXIN-ASSOCIATEDDISEASE(缓解细菌外毒素相关疾病的影响的含粘±的组合）"和 "CLAY,AYEASTPRODUCTANDGLUTAMATEBLEND邸PRODUCTANDUSEST肥RE0F(粘±， 酵母制品和谷氨酸盐渗合的制品及其用途）"的美国临时专利申请系列号61/708, 763和 61/792, 382的权益和优先权。
[0002] 上述申请和其中或在其审查期间引用的所有文件（"申请引用的文件"）和在申请 引用的文件中引用或参考的所有文件，和本文中引用或参考的所有文件r本文中引用的文 件"），和在本文引用的文件中引用或参考的所有文件，与本文中或在通过引用并入本文的 任何文件中提及的任何制品的任何制造商的说明书、描述、产品说明书和产品表单一起特 此通过引用并入本文，并可W应用于本发明的实践中。更具体而言，所有参考的文件通过引 用而并入的程度如同各个单独的文件被具体地和单独地指出通过引用并入。 发明领域
[0003] 本申请设及粘±、酵母制品和任选谷氨酸盐的混合物及其用途，特别是用于减轻 肠疾病的影响的用途。
[0004] 发明背景 梭菌属（Clostridium)是细菌属，其分泌在家禽、动物和人中引起疾病的毒素。厌氧的 细菌病原体对于农业产业是严重的经济负担。梭菌家族的细菌代表特定的负担，因为运些 细菌在家禽和其它经济上有价值的家养动物中引起严重的疾病。用W控制运些生物体的先 前的努力依赖于卫生措施和在动物饮食中抗生素的给予。
[0005] 坏死性肠炎（肥）是在现代肉鸡群中最常见的和经济上毁灭性细菌疾病。它是由 产气芙膜梭菌（c/o別扣? 化easO引起的传染性疾病，所述产气芙膜梭菌是革兰氏 阳性、厌氧细菌，其可存在于±壤、垃圾、灰尘中，并在健康鸟类的肠中处于低水平。产气芙 膜梭菌仅在它从不产生毒素的类型转化为产生毒素的类型时引起肥。
[0006] 存在五种类型的产气芙膜梭菌（A、B、C、D和巧，其产生多种毒素（a、P、e、I 和CP巧。a-毒素一-一种酶（憐脂酶C)被相信是肥的发生的关键。然而，最近的研究 已表明不产生a-毒素的隔离群（isolate)仍可引起疾病。此外，称为化巧的新毒素最近 在引起疾病的产气芙膜梭菌隔离群中被鉴定出。感染的鸟的肠是脆弱的并因由毒素引起的 肉眼损害和气体肿胀。在NE的急性形式下，鸟常常在表现出临床征兆之前死亡。然而，在 其亚临床形式下，该疾病对于生产者而言更加是经济上的损害。该疾病的通常观察到的症 状随着鸟的年龄而变化。
[0007] 在本领域中仍存在对保护集中饲养的家养动物(其包括禽类，例如鸡）免于梭菌种 类的感染的安全、经济和有效的方法的需要。引起疾病的梭菌属引起人受苦和在家畜中的 经济损失两者。用W干预运些疾病的成本有效的方式会有助于疾病管理系统。
[0008] 在此申请中对任何文件的引用或识别并非承认运类文件可用作本发明的现有技 术。
[000引发明概述 本发明设及抗毒素、免疫调节剂、对粘膜细胞提供能量的组分或其组合，其对于减羟基 于梭菌属或球虫目（coccidia)的疾病或其它肠疾病的影响或就一般改善胃肠健康或功能 而言可W是有用的。
[0010] 申请人已经在体外表明某些粘±可吸附来自艰难梭菌（別ri扣y曲扣//iciie) 和产气芙膜梭菌的毒素。申请人已经在体外表明某些粘±或粘±制剂可缓解鸡中的坏死性 肠炎(与产气芙膜梭菌相关的疾病)。申请人发现粘±或粘±制剂可在体外结合梭菌属的毒 素并且粘±或粘±制剂可缓解由产气芙膜梭菌引起的疾病，和可能的其它梭菌属引起的疾 病。
[0011] 申请人也发现粘±可吸附由艰难梭菌和产气芙膜梭菌产生的外毒素。当使用包括 产气芙膜梭菌和球虫目（巨型艾美球虫（仿皿xi皿)）的攻击模型时，发现渗合物(其 为粘±、酵母制品和一种形式的功能氨基酸的组合）帮助减轻肉鸡中坏死性肠炎的影响。
[0012] 本发明设及抗毒素、免疫调节剂和对粘膜细胞提供能量的组分或其组合。有利地， 抗毒素可W是粘±，免疫调节剂可W是酵母制品和对细胞提供能量的组分可W是功能氨基 酸(例如谷氨酸盐)。在特别有利的实施方案中，粘±可^是巧蒙脱±粘±，酵母制品可W 是季也蒙毕赤酵母（巧cAia巧/酵母制品和功能氨基酸可W是谷氨酸一钢 ("MSG")。在另一有利实施方案中，混合物可包括约50-90% (w/w)的抗毒素、约10-50% (w/w)的免疫调节剂巧可为酵母制品）和约0.01-15% (w/w)的谷氨酸盐。
[0013] 在特别优选的实施方案中，组合物或混合物可W是约80% (w/w)粘±、约10% (w/ W)的酵母制品和约10% (w/w)的谷氨酸盐，或60% (>/\￥)粘±、约35% (w/w)的酵母制品和 约5% (w/w)-约10% (w/w)的谷氨酸盐。
[0014] 本发明也包含本文公开的用作饮食补充剂的组合物和/或混合物。在一个实施 方案中，补充剂可W是饲料的约0. 05% (w/w)-约0. 35%(w/w)、饲料的约0. 15% (w/w)-约 0. 25% (w/w)或饲料的约 0. 25% (w/w)。
[0015] 因此，本发明的一个目的是不在本发明中包含任何先前已知的制品，制作该制品 的方法或使用该制品的方法W便申请人保留权利并特此公开对任何先前已知制品、方法或 方法的放弃。另外注意：本发明不意图在本发明的范围内包含不满足USPT0 (35U.S.C. §112,第一段）或EP0巧PC的第83条）的书面描述和能够实施要求的任何制品、制作该 制品的方法或使用该制品的方法W便申请人保留权利和特此公开对任何先前描述的制品、 制作该制品的方法或使用该制品的方法的放弃。
[001引注意：在此公开中特别是在权利要求和/或段落中，诸如"包括"、"含有"等术语可 具有美国专利法中归属于其的含义；例如，它们可意指"包含"等并且诸如"基本上由……组 成"等术语具有在美国专利法中归属于其的含义，例如，它们允许没有明确记载的要素，但 排除在现有技术中存在的或影响本发明的基础或新颖特性的要素。
[0017] 运些和其它实施方案由W下详细描述公开，或因W下详细描述而显而易见并包括 于W下详细描述中。
[0018] 附图简述 w下详述(其通过举例的方式给出，并不意图将本发明仅限定于描述的具体实施方案） 可在与附图结合的情况下得到最好的理解。
[0019] 图1描绘了实验设计的示意性概要。
[0020] 图2描述了在肉鸡中体重增加的比较，所述肉鸡用与抗生素维吉霉素（VM)比较的 美国Oil-Dri公司的Amlan国际品牌（"Amlan")制品例如100%粘±制品做；与有机酸 和植物提取物渗合的粘±制品灯）；粘±和酵母制品的渗合物（C);粘±、酵母制品和谷氨 酸一钢的渗合物（D)喂食，并用产气芙膜梭菌（CP)攻击W诱导坏死性肠炎。从巨型艾美球 虫感染的那天至CP感染后2天确定体重。将鸟在解化后第14天用巨型艾美球虫的10, 000 个形成抱子的卵囊感染。在巨型艾美球虫感染4天后，将鸟（除了在对照处理中的那些）与 ixi〇9cfuCP-起解育。
[002。 图3描述了在肉鸡中体重增加的比较，所述肉鸡用Amlan制品例如B、Y、C、D喂食， 并与抗生素VM比较。从CP感染的那天至CP感染后7天确定体重增加。将鸟在解化后第 14天用巨型艾美球虫的10, 000个形成抱子的卵囊感染。在巨型艾美球虫感染4天后，将鸟 与lXl09CFUCP-起解育。
[002引图4描述了膳食Amlan制品对肠伤损得分的影响。
[0023] 图5A描绘了在产气芙膜梭菌感染后7天时的抗a-毒素抗原的血清抗体响应。
[0024] 图5B描绘了在产气芙膜梭菌感染后14天时的抗a-毒素抗原的血清抗体响应。
[0025] 图6A描绘了在产气芙膜梭菌感染后7天时的抗化巧毒素抗原的血清抗体响应。
[0026] 图6B描绘了在产气芙膜梭菌感染后14天时的抗化巧毒素抗原的血清抗体响应 图7A描绘了带有Amlan制品的饮食补充对于血清毒素的影响影响。在产气芙膜梭菌 感染后2天时收集血清并用于通过化ISA测量a-毒素的水平。
[0027] 图7B描绘了带有Amlan制品的饮食补充对血清毒素的影响。在产气芙膜梭菌感 染后2天时收集血清并用于通过化ISA测量化tB-毒素的水平。
[0028] 图8A描绘在第二个体内实验中第0天-第21天的饲料转化率的比较。在此实验 中，对肉鸡(除了在未攻击中的那些（无肥））攻击W诱导坏死性肠炎并喂食非制品（肥）；如 先前实验中的粘±、酵母制品和谷氨酸一钢的渗合物值）；具有不同包含比例的粘±、酵母 制品和谷氨酸一钢值8)和使用不同酵母制品的那两种制剂值X和D8X)，将运些制品与抗生 素维吉霉素（VM)比较。在此实验中，在第14天时肉鸡用大约5, 000个巨型艾美球虫（球 虫目的一株）的卵囊经口攻击，在第19、20和21天时给予它们产气芙膜梭菌1〇8C化/ml的 肉汤培养物（除了未攻击的对照处理（无肥)），所述产气芙膜梭菌分离自产生a和化tB 两种毒素的坏死性肠炎的临床病例。此实验持续28天。大体上，从第0天到第21天间喂食 不同Amlan制品的鸟的饲料转化率是在处于NE或VM处理中的那些之间的中间值。然而， 喂食制品D8X的鸟并不遵循运样的模式，其具有统计学上和数字上与在运时间段内处于肥 处理中的那些同样差的饲料转化率。
[0029] 图8B描绘了第14天-第21天的饲料转化率。在第14天-第21天时间段内喂 食处理DX的攻击的鸟的饲料转化率与处于NE处理中的鸟（其被攻击但未喂食制品）相比 显著较佳并且统计上等同于加入VM的饮食。
[0030] 图8C描绘了第0天-第28天的饲料转化率。除了D8X之外的所有制品与没用制 品的肥相比显著较佳。制品D和DX是测试的制品中最佳的，类似于处于VM处理的鸟，并 且与没有给予肥攻击的鸟相比没有统计差异。
[003。 图9A描绘了第0天-第28天的重量增力日。增加由VM与不用任何制品的肥对照 相比改善。当与VM相比时D8统计上等同并且数字上较佳。所有其它制品是在不用制品的 肥和VM之间的中间值。
[0032] 图9B描绘了第14天-第28天的重量增加。增加在第14天-第28天遵循与第 0天-第28天类似的模式，除了D8数字上等同于VM。
[003引图10描绘伤损得分。喂食D8和D8X的鸟的伤损得分与喂食VM的鸟的相比较低 并且与没有用肥攻击的那些鸟相比可不具有统计上差异。
[0034] 图11描绘了肥死亡率。除了D之外的所有制品与不用制品的肥攻击的鸟相比 降低死亡率并等同于喂食VM的那些。
[0035] 图12A描绘了在第S个体内研究中肉鸡中体重增加的比较，所述体重增加从巨型 艾美球虫感染那天到产气芙膜梭菌感染后2天确定。将鸟在解化后第14天时用10, 000个 巨型艾美球虫的形成抱子的卵囊感染。在巨型艾美球虫感染4天后，将鸟用IX1〇9cFU产 气芙膜梭菌接种。在此实验中，有未攻击的对照（Cont)、被攻击W诱导坏死性肠炎但未喂食 制品的组（肥）、W0. 35、0. 25、0. 15和0. 05%包含的制品D制剂值35、D25、D15和D05)，也 包含的是W不同比例组合成分的制品值S，DSF，D8D8巧和在饮食中接收20g/吨的维吉 霉素的最后一组（VM)。
[0036] 图12B描绘了与处于不用制品的坏死性肠炎攻击对照中的鸟相比在体重增加中 的百分比增加的比较。肥是被攻击W诱导坏死性肠炎但不喂食制品的组；VM是在饮食中接 收20g/吨的维吉霉素的组。
[0037] 图13A描绘了在肉鸡中体重增加的比较。从产气芙膜梭菌感染的那天开始并在产 气芙膜梭菌感染后7天时终止确定体重增加。
[0038] 图13B描绘了与不用制品的坏死性肠炎攻击对照相比在体重增加中的百分比增 加的比较。
[0039] 图14描绘了制品对肠伤损得分的影响，得分是在产气芙膜梭菌感染后第2天检查 的5只鸟/组的平均数。
[0040] 图15A描绘了在产气芙膜梭菌感染后2天时抗a-毒素抗原的血清抗体响应。
[0041] 图15B描绘了在产气芙膜梭菌感染后7天时抗a-毒素抗原的血清抗体响应。
[0042] 图16A描绘了在产气芙膜梭菌感染后2天时抗化巧毒素抗原的血清抗体响应。
[0043] 图16B描绘了在产气芙膜梭菌感染后7天时抗化巧毒素抗原的血清抗体响应。
[0044] 图17A描绘了饮食补充对血清a-毒素水平的影响。在产气芙膜梭菌感染后第2 天时收集血清并用于通过酶联免疫吸附测定巧LISA)测量a-毒素的水平。
[0045] 图17B描绘了饮食补充对血清化tB-毒素水平的影响。在产气芙膜梭菌感染后第 2天时收集血清并用于通过化ISA测量化tB-毒素的水平。
[0046] 图18A-B描绘了在产气芙膜梭菌感染后2天时在空肠上皮内的淋己细胞中的细胞 因子的产生。
[0047] 图18C-D描绘了在产气芙膜梭菌感染后2天时在鸟的空肠上皮内的淋己细胞中细 胞因子的产生。
[004引图19A-C描绘了在产气芙膜梭菌感染后2天时在鸟的脾脏中细胞因子的产生。
[0049] 图19D-F描绘了在产气芙膜梭菌感染后2天时在鸟的脾脏中细胞因子的