谷氨酸盐的混合物。最适宜的浓度会取决于处理是否是预防性的、控制性的或 治疗性的，本发明的粘±、酵母制品和任选谷氨酸盐的混合物是否是唯一活性物或它是否 与其它材料于相伴的治疗中一起使用W及接受者的种类和年龄或生命阶段。
[0083] 在优选实施方案中，粘±、酵母制品和任选谷氨酸盐的混合物的浓缩组合物呈控 释形式。控释形式会包含粘±、酵母制品和任选谷氨酸盐的混合物和聚合材料(其用于提供 从控释系统中粘±、酵母制品和任选谷氨酸盐的混合物的控释）并且在用于加入固体饲料 材料的组合物中是特别有用的。作为控释制剂的结果，粘±、酵母制品和任选谷氨酸盐的混 合物的释放可被延迟使得主要在十二指肠中发生。控释聚合物也可将因味道所致的组合物 排斥最小化或被用于直肠栓剂。
[0084] 在本发明中，术语"控释系统"被用于与在"ControlledDrugDelivery(控制药 物递送）"（Robinson和Lee, 1987)中的背景相同的背景，并包括与在"ControlledDrug Delivery(控制药物递送）"（Robinson和Lee, 1987)中引用的实例的相同范围。可用本 领域已知的许多其它抑敏感性控释系统（Robinson和Lee, 1987)代替丙締酸的聚合物或 丙締酷胺和丙締酸的共聚物。例如，可溶的和阴离子的或不可溶的交联的和阴离子的、纤维 素性系统；或源自任何一般的丙締酸聚合物和/或其衍生物的可溶的和阴离子的，或不可 溶的交联的和阴离子的聚合物。运类交联的和不可溶的聚合物是优选的，因为它们膨胀并 且也较小可能被代谢。
[0085] 本发明也提供动物饲料组合物，其包含本发明的粘±、酵母制品和任选谷氨酸 盐的混合物和饲料。粘±、酵母制品和任选谷氨酸盐的混合物优选W全部饲料组合物的 0. 0001-25%的量，优选全部饲料组合物的0. 0001-5%，更优选全部饲料组合物的约0. 25%存 在。
[0086] 在另一优选实施方案中，本发明的粘±、酵母制品和任选谷氨酸盐的混合物可被 配制用于加入动物的饮用水。
[0087] 本发明的粘±、酵母制品和任选谷氨酸盐的混合物优选W0. 05-5000mg/kg体重 /天的量，更优选100-1000mg/kg/天给予。
[0088] 在用于给予本发明的粘±、酵母制品和任选谷氨酸盐，的混合物的组合物中使用 的合适的惰性载体的实例包括，但不限于水、橄揽油、花生油、芝麻油、向日葵油、红花油、落 花生油、挪子油、液体石蜡、乙二醇、丙二醇、聚乙二醇、乙醇、丙醇、异丙醇、甘油、脂肪醇、甘 油S醋、聚乙締醇、部分水解的聚乙酸乙締醋和其混合物。
[0089] 用于口腔或直肠给予的固体形式可含有制药上或兽药上可接受的粘合物、甜味 剂、崩解剂、稀释剂、调味料、包衣剂、防腐剂、润滑剂和/或时间延迟剂。合适的粘合剂包括 阿拉伯树胶、明胶、玉米淀粉、西黄著胶、藻酸钢、簇甲基纤维素或聚乙二醇。合适的甜味剂 包括薦糖、乳糖、葡萄糖或类黄酬巧例如新澄皮巧二氨查耳酬。合适的崩解剂可包括玉米淀 粉、甲基纤维素、聚乙締基化咯烧酬、黄原胶、膨润上、藻酸或琼脂。合适的稀释剂包括乳糖、 山梨醇、甘露醇、右旋糖、高岭±、纤维素、碳酸巧、娃酸巧或憐酸二巧。合适的调味剂包括薄 荷油、冬青的油、樓桃、澄或覆盆子调味料。合适的包衣剂包括丙締酸和/或甲基丙締酸和 /或它们的醋和/或它们的酷胺的共聚物或聚合物、蜡、脂肪醇、玉米醇溶蛋白、紫胶或谷蛋 白。合适的防腐剂包括苯甲酸钢、维生素E、a.-生育酪、抗坏血酸、对径基苯甲酸甲醋、对 径基苯甲酸丙醋或重硫酸钢。合适的润滑剂包括硬脂酸儀、硬脂酸、油酸钢、氯化钢或滑石。 合适的时间延迟剂包括单硬脂酸甘油醋或二硬脂酸甘油醋。
[0090] 用于口腔或直肠给予的悬浮液可另外包含分散剂和/或助悬剂。合适的助悬剂 包括簇甲基纤维素钢、甲基纤维素、径丙基甲基纤维素、聚乙締基化咯烧酬、藻酸钢或十六 基醇。合适的分散剂包括卵憐脂、聚氧乙締醋或脂肪酸例如硬脂酸、聚氧乙締山梨醇单或 二-油酸醋、-硬脂酸醋或-月桂酸醋、聚氧乙締脱水山梨醇单或二-油酸醋、-硬脂酸醋 或-月桂酸醋等。
[0091] 粘±、酵母制品和任选谷氨酸盐的混合物的组合物可另外包括一种或多种乳化 剂。合适的乳化剂包括如上面例示的分散剂或天然树胶例如阿拉伯树胶或西黄著胶。
[0092] 用于在本发明的方法中给予的组合物可通过本领域（例如在兽医组合物和药物 组合物的领域中）已知用于制备组合物的方法制备，所述方法包括渗合、研磨、均化、悬浮、 溶解、乳化、分散并在适当时混合活性成分与选定的赋形剂、稀释剂、载体和佐剂。
[0093] 对于口腔给予，药物或兽医组合物可呈片剂、锭剂、丸剂、含片、胶囊、馳剂、粉末 (其包括冻干粉末)、溶液、粒剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂和町剂的形式。缓释或延释的形式也 可例如W包衣颗粒、多层片剂或微粒的形式制备。
[0094] 表B.喂食自含和不含黄曲霉毒素的产气芙膜梭菌病原体（CP巧的攻击和意图减 轻该攻击影响的制品的肉鸡的处理影响的相互作用1' 2' 3。
[0095]a-h在不带有共同上标的列中主要作用的平均值差异显著（p< 0. 05)。
[0096] 1平均值是初始具有22只鸟(等同于第7天20只）的8个重复圈（pen)的平均值； 5只鸟/圈在第20天安乐死用于伤损评分。
[0097] 尽管本发明和它的优点已经详细描述，应该理解的是，在不背离随附权利要求中 定义的本发明的精神和范围的情况下可在本文中作出多种改变、替换和变更。
[009引本发明会在W下实施例中进一步阐明，所述实施例被给出仅出于说明目的而非意 图W任何形式限制本发明。
[0099] 实施例1 :梭菌属毒素/疾病、原型制品功效的概述 在体外和体内测试抗2种梭菌种类的几种毒素吸附剂。
[0100] 用S种粉末状的粘±样品：巧膨润± (C邸脚、绿坡缕石型化llersEarth(A阳） 和热处理的化llersEarth(HT巧实施对a-毒素的体外吸附测定。a-毒素在应激条件 下在家禽的肠中由产气芙膜梭菌产生，其导致坏死性肠炎。将五种水平的毒素（〇、5、10、50 和100yg/ml)和S种水平的每一种粘± (0、0. 5%和1. 0%) -起在50y1的憐酸盐缓冲 溶液中测试、解育、离屯、，并且结合通过测量由未结合的a-毒素引起的蛋黄卵憐脂琼脂水 解而确定。所有制品W某种水平结合该毒素。表1展示了概括性结果。减少结合物与毒素 的比例导致粘±的结合效率的分离，CBEN与其它2种粘±相比具有较大的结合效率（大约 2倍更有效）。总体上，a-毒素体外结合最优的为CBEN，随后为A阳和HTF。
[0101] 表1-对产气芙膜梭菌a毒素的吸附
测试几种粘± (A阳、酸处理的绿坡缕石（ATA)、CBEN和热处理的巧膨润± (HCBN))对2 种艰难梭菌毒素A和B的活性。粘±(作为细粉）和毒素（将纯化的毒素稀释成对于毒素 A2000细胞毒性单位/ml和对于毒素B10, 000细胞毒性单位/ml的最终浓缩）两者按几 种不同浓度加入。将粘±放入带有毒素的悬浮液中并解育。固体随后通过离屯、除去。将上 清液（剩下的液体，其中仍然会残留活性毒素）加入细胞培养物（中国仓鼠卵巢细胞）并 记录损伤。越多细胞损伤意味着越少的粘±活性。越少的细胞损伤意味着越多的抗毒素活 性。
[0102] 结果：没有制品吸附毒素B(其在W10X毒素A的比例下使用）。表2给出了实 施例数据。AFE和ATA吸附一些毒素A。W下表提供了结果的实例。100意指没有测量到的 毒素吸附的减少。0意指没有毒素活性。
[0103] 表2-艰难梭菌毒素A和B的吸附
随后一轮测试(其仅使用毒素B，其中使用2%粘±并按重量（非细胞毒性单位）定量毒 素）显示测试的所有制品在某种程度上具有活性（表3)。在此表中，活性的定义与表2的 相反。100意指没有毒素活性。0意指很多毒素活性（即细胞毒性）. 表3-艰难梭菌毒素B的吸附，Arizona大学，2010年
对于体内研究，菌株JGS4143--有毒肥野生株被用于攻击。用带有16%蛋白的无抗 生素小鸡起始饮食（starterdiet)喂食新解化的CornishXRock小鸡7天。在第8天时， 将饮食改变为基于小麦的高蛋白（28%)饲料，其含有60%的鱼粉和处于400ppm的锋。将 粘±肥邸N、CBEN和CBEN+益生菌按1%或2%加入各组的饲料中。在攻击前（第14天） 撤走饲料达20小时。第15天起，喂食（每12小时一次持续3. 5天）鸟1. 25:1饲料：培 养物的混合物。将存活的鸟在第18天和第19天验尸。对肉眼损害计数和评分，并新鲜收 集一式两份样品用于细菌学培养和在10%憐酸盐缓冲的福尔马林中固定用于组织病理学。 将石蜡包埋的组织切片巧ym)，用苏木精和伊红染色，通过光显微术检查并基于坏死的程 度而赋予伤损得分。对于半定量细菌学结果，将从验尸小鸡收集的空肠段在无菌锥上无菌 地打开并通过用无菌显微镜载玻片刮擦而取出粘膜。将来自带有肉眼损害的区域的刮擦物 在膜蛋白月示血琼脂上划线平板接种。将具有典型形态学和溶血性模式的所有菌落划线用 于在血琼脂上分离并确定为产气芙膜梭菌（革兰氏阳性的厌氧的具有双区溶血的杆菌）。 产气芙膜梭菌浓度的评估通过对来自连续划线的集落评级而实施（例如4表示在第4条划 线上的集落）。
[0104] 结果：两种不带有益生菌的粘±都表现出伤损得分或平板得分的显著的减少。鸡 都严重患病，其被怀疑是因使用的大量接种物和饲料所致。
[0105] 表4-坏死性肠炎体内结果 来自坏死性肠炎体内鸡研究中的损伤和平板得分*
*不同字母在P=0. 05水平上显著差异。
[0106] **处理死亡率是在梭菌属处理期间死亡的鸟的百分比，其不包括在梭菌属处理之 前死亡的那些。
[0107] 因为没有球虫目被用于疾病发展（坏死性肠炎与球虫的感染相关）中，一项研究 使用球虫模型进行。
[010引方法：将十二种具有8只鸟的8个重复的处理（TRT)用于实验W评估不同制品在 鸡中对肠健康、生长表现和坏死性肠炎的影响的影响。六种制品在产气芙膜梭菌攻击的情 况下评估并且运些制品的两种也在无产气芙膜梭菌（C巧攻击的情况下评估。鸡从第0天 龄到第28天龄喂食处理饮食，所有鸟在第14天时通过混合的球虫目接种物（约5000个巨 型艾美球虫的卵囊/鸟）接受口腔球虫目攻击。攻击的鸟也在第19、20和21天时接受CP (108C化/ml)的肉汤培养物W诱导肥。
[0109]处理列出于表5中 表5-用于坏死性肠炎研究的处理 处理和描述
结果：根据测量，所有制品W某种方式缓解疾病。表6表展示了表现的排序的次序。尽 管维吉霉素（用于控制坏死性肠炎的药物）在数字上最佳，但粘±制品与它相比基本上是 没有显著差异的。
[0110] 表6-基于在有或没有产气芙膜梭菌攻击的情况下鸟的伤损得分、坏死性肠炎死 亡率和第14天-第28天重量增加和饲料转化比例对处理的简单排序3。
[0111] a运是基于四种响应标准的每一种中的排序的排序，所述四种响应标准如下:1) 第14天-第28天的重量增加；2)第14天-第28天的饲料转化率；3)伤损得分讯4)因 坏死性肠炎的死亡率。不尝试使一种响应标准权重高于另一种，也不存在在统计分析上的 任何尝试。
[0112] 因为测量的参数的数字和结果有点复杂，下表仅仅列出它们。
[0113] 表7.在鸟中的伤损得分和坏死性肠炎死亡率
a带有不同字母的数字在p=0. 05水平上是显著的。
[0114] b评分基于0-3分，0为正常和3为最严重。
[0115]C用由坏死性肠炎引起的死亡数量除W开始实验的鸟的数量（8/圈）而确定的 死亡率。 表8.鸟的生长表现
实施例2 :在幼肉鸡中坏死性肠炎和黄曲霉毒素对生长表现、伤损得分和死亡率的影 响和缓解它们的制品 关于可能的坏死性肠炎/黄曲霉毒素相互作用知道得很少。进行研究W调查可能的相 互作用和数种原型制品减轻疾病的能力。制品索引B=LVM粘±;Y=B+有机酸+植物提 取物；C=B+酵母制品；所述3种测试材料减轻疾病。
[0116] 将Co化500小鸡（2, 640只，雄性）用于确定疾病攻击的影响和减轻运些影响的 制品。使用S种攻击水平：1)未攻击；2)坏死性肠炎（CP巧攻击；和3)CPP+1ppm黄曲霉 毒素B1。测试用W缓解疾病攻击的制品是：1)无制品（NP)尚基于专有粘±的制品度）； 3)灯）；4)C)讯W维吉霉素（VM)。在24天的研究中，将22只小鸡（等于在第7天20 只）/圈分配至具有8个重复（实验单位=圈）的15种处理（3X5因子排列）。将显著差 异设定于P<〇. 05。在第0天、第10天和第24天测出重量用于饲料摄入、增加和饲料：增 加的计算。鸟随意消费饲料和水。在此研究中观察到对于肥和A化组合的增加的负响应， 因为F1 (第0天-第10天）、增加（第10天-24天，第0天-第24天）和F:G(第10 天-第24天）随着攻击水平从未攻击到CPP攻击到CPP+A!^L攻击（P<0. 5)而渐增变差。其 它生长响应当应用CPP+A!^L两者时与未攻击或CPP攻击相比较差（P<0. 05)。伤损得分在带 有或不带AFL的情况下在CPP攻击的鸟中较高（P<0. 05)。喂食VM在未攻击的鸟中改善表 现（P<0. 05)。在CPP攻击的鸟中，加入B或Y与NP相比改善F1和增加；在攻击期间Y等 同于喂食VM的那些（P<0. 05)。当用CPP和AFL两者攻击时，给予B的鸟具有最高的增加和 饲料转化率；喂食Y、C和VM与加入NP相比具有较高的增加（P<0. 05